人胚胎干细胞来源cd34+细胞与脐血来源cd34+细胞emt相关分子表达的比较

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1、後旦大学万方数据硕士学位论文人胚胎干细胞来源CD34+细胞与脐血来源CD34+细胞EMT相关分子表达的比较Expressionofepithelial—mesenchy‘maltransitionrelatingmoleculesinhumanembryonicstemcell-derivedCD34+cellsandumbilicalcordblood—derivedCD34+cells研究生姓名学科及专业曾庆超内科学血液病学导师陈彤教授导师组成员袁燕主治医师二零一三年四月一苓一二平四月万方数据万方数据曾庆超硕士学位论文中文

2、摘要人胚胎干细胞来源CD34+细胞与脐血来源CD34+细胞EMT相关分子表达的比较硕士研究生导师曾庆超陈彤教授中文摘要造血干细胞移植(hematopoieticstemcelltransplantation，HSCT)是治疗许多血液系统疾病的重要手段，目前常用的移植供源包括骨髓，外周血和脐血。但是，移植技术的开展受到供源不足和配型成功率低的限制。因此，开发新的移植供源具有重要意义。胚胎干细胞可能满足这项需求。临床上移植开展常将CD34抗原作造血干细胞的标记，体外研究表明通过诱导白发分化，或者与S17，OP9等基质细胞共培养的方

3、法已经能够将胚胎干细胞分化为CD34+细胞。但是体内实验表明，这些分化的CD34+细胞并不能完全模拟脐血等移植供源的功能。脐血因其具有相对容易获得性，低的感染率和低的移植物抗宿主反应被应用到移植上。那么研究胚胎干细胞来源的CD34+细胞与脐血来源的CD34+细胞的差异对于了解胚胎干细胞分化机制非常重要。体内研究表明，在胚胎发育过程中，造血干细胞主要由中胚层发育而来，产生造血干细胞的主要场所是主动脉一

4、生腺一中肾区(aorta—gonad—mesonephros，AGM)和胎肝(fetalliver，FL)。在胎肝产生造血干细胞

5、过程中，上皮间质转化(epithelial—mesenchymaltransition，EMT)机制起到了重要的作用。在体外研究中，关于EMT机制在胚胎干细胞向CD34+细胞分化中作用尚无定论。因此，探讨EMT机制在胚胎干细胞向CD34+分化过程的作用将会有一定的价值。已有研究表明，在胚胎干细胞分化的过程中干细胞标记会减少或消失，这些标记的减少或消失是否也与CD34有关联呢?在此假设的基础上，我们研究了胚胎干细胞向CD34+细胞分化过程中具有代表性的干细胞标记NANOG；和EMT相关的重要的钙粘蛋白E—cadherin和N-c

6、adherin；EMT相关转录因子Snaill，Snail2，Zebl，Zeb2的表达变化，并比较了纯化后的胚胎干细胞来源和脐血来源的CD34+细胞以上分子的表达变化。研究发现1．胚胎干细胞分化为CD34+细胞过程中NANOG的表达水平逐渐降低；纯化后的胚胎干细胞来源的CD34+(humanembryonicstemcell—derivedCD34+，hESCs—CD34+)1万方数据曾庆超硕士学位论文中文摘要细胞的NANOG水平高于纯化后脐血来源CD34+(umbilicalcordblood—derivedCD34+，UC

7、B-CD34+)细胞。即随着胚胎干细胞向CD34+细胞分化，hESCs—CD34+细胞NANOG表达逐渐下降，但仍然高于UCB—CD34+细胞。2．胚胎干细胞分化为CD34+细胞过程中，EMT相关上皮性钙粘蛋白E-cadherin表达逐渐下降；间质性钙粘蛋白N-cadherin逐渐上升；EMT相关转录因Snaill，Snail2，Zebl，Zeb2表达水平逐渐上升。纯化后hESCs-CD34+细胞E-cadherin的表达高于纯化后UCB-CD34+细胞；N-cadherin的表达低于纯化后UCB—CD34+细胞；转录因子Sn

8、aill，Snai12，Zebl，Zeb2的表达低于纯化后UCB—CD34+细胞。即随着胚胎干细胞向CD34+细胞分化，hESCs—CD34+细胞E-cadherin表达逐渐下降，但仍然高于UCB—CD34+细胞；N-cadherin和转录因子Snaill，Snail2，Zebl，Zeb2表达逐渐上升，但仍低于UCB—CD34+细胞。第一部分人胚胎干细胞培养及诱导分化为CD34+细胞目的研究人胚胎干细胞的培养方法以及用不同方法将bESC—H9诱导分化为CD34+细胞方法以小鼠胚胎成纤维细胞(mouseembryonicfibr

9、oblast，MEF)作为滋养层，将人胚胎干细胞细胞系hESC-H9进行二维培养，对培养细胞进行干性标记时相专一性抗原(stagespecificembryonicant，SSEA)SSEA一4，肿瘤识别抗原(tumorrejectionantigen，Tra)Tra-l-8