伤寒沙门菌非编码rna asrc的验证与特性研究

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1、硕士学位论文伤寒沙门菌非编码RNAAsrC的验证与特性研究IDENTIFICATIoNANDCHARACTERIZATIoNoFNoNCoDINGRNAASRCINSALMoNELLAENTERICASERoVARTYPHI作者姓名：詹莉芳指导教师：黄新祥教授小组成员：徐顺高副教授张海方副教授生秀梅副教授倪斌讲师张盈讲师申请学位：硕士学科专业：临床检验诊断学论文提交日期：2013年4月26日论文答辩日期：2013年6月9日学位授予单位：江苏大学学位授予日期：2013年6月17日答辩委员会主席：王胜军教授独创性声明＼一本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作

2、所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：麓韵节ⅪI≥年6月，占日学位论文版权使用授予书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究

3、所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。本学位论文属于不保密团。学位论文作者签名：虐菊乇如I≥年彳月tb13指导教师签名：疡祁千--2．0，；年多月r多13江苏人学硕士学位论文．摘要目的：非编码RNA(non—codingRNA，ncRNA)已经成为核酸和蛋白质之外参与基因表达调控的另一类重要因子。本课题组通过对伤寒沙门菌(SalmonellaentericaserovarTyphi，&Typhi)RNA序列分析和生物信

4、息学预测，发现了包括AsrC在内的一些ncRNAs。本研究旨在对&TyphincRNAAsrC进一步鉴定，并研究其特性，以便对AsrC参与的基因表达调控进行深入研究。方法：1．AsrC的鉴定：利用NorthernBlot和qRT．PCR对AsrC进行存在性、完整性验证，并观察其生长时相表达特性。2．AsrC的分子全长鉴定：分别利用5’和3’RACE实验寻找AsrC的转录起始点和转录终止点，以确定AsrC的分子全长。3．AsrC在应激条件下的表达量分析：利用NorthernBlot和qRT．PCR对伤寒沙门菌在不同生长时期，酸、氧及高渗环境应激后AsrC的水平进行分析。4．基因缺陷变异株

5、的制备：利用九．Red系统制备伤寒沙门菌asrC基因启动子缺陷变异株。5．基因缺陷回补株的制备：利用重组质粒pBAD／gIII将lepA基因和pBAD／gIII空质粒分别导入asrC基因启动子缺陷变异株，构建lepA基因的缺陷回补株和lepA缺陷空质粒对照株。6．asrC基因启动子缺失的定量分析：qRT-PCR分析＆Typhi野生株、asrC基因启动子缺陷株中AsrC的水平。伤寒沙门菌1F编码RNAAsrC的验证及特性研究7．生长曲线的测定：制作生长曲线，观察&Typhi野生株、asrC基因启动子缺陷株、lepA基因缺陷回补株及空质粒对照株在等渗、氧应激、酸应激和高渗应激时的生长状况。

6、结果：1．经NorthernBlot和qRT．PCR分析，确定AsrC存在表达，并发现其在对数生长后期(OD6000．8)时AsrC的表达量最高。2．经过57和3’RACE实验鉴定AsrC的分子全长信息，并确定其分子全长为893bp，与lepA基因部分重叠。3．NorthernBlot和qRT-PCR结果表明，S．TyphiAsrC在酸、氧及高渗应激时的表达量均下降。4．利用久,-Red系统成功制备S．Typhi包含asrC基因启动子区域500bp的缺陷变异株。5．PCR及序列分析结果表明，成功构建pBAD·lepA阳性重组质粒，并成功将重组质粒和空质粒pBAD／glll分别导入asr

7、C基因启动子基因缺失变异株中，成功制备lepA基因缺陷回补株和空质粒对照株。6．qRT-PCR结果显示，与＆Typhi野生株相比，asrC基因启动子缺失变异株中AsrC的水平显著降低。7．生长曲线分析结果显示，在氧应激时asrC基因启动子缺失变异株生长明显比S．Typhi野生株慢(尸