mir-34a通过wntβ-catenin信号通路影响神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡

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1、硕士学位论文论文题目MiR-34a通过Wnt/β-catenin信号通路影响神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡研究生姓名严向明指导教师姓名周云教授专业名称儿科学研究方向泌尿外科论文提交日期2013年9月苏州大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，

2、均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明引起的法律责任。学位论文作者签名：严向明日期：2013-09-30学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学有关收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位

3、论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密文件□本论文属于在年月解密后适用本规定。非涉密文件□（请在以上方框内打“√”）论文作者签名：严向明日期：2013-09-30指导老师签名：周云日期：2013-09-30MiR-34a通过Wnt/β-catenin信号通路影响神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡中文摘要MiR-34a通过Wnt/β-catenin信号通路影响神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡中文摘要目的：应用文献检索和生物信息库预测，寻找miR-34a参与调控Wnt/β-catenin信号通路的线索。通过分子生物学

4、技术在神经母细胞瘤细胞（SK-N-SH细胞）中过表达miR-34a，而后检测Wnt/β-catenin信号通路活性的变化，以及肿瘤细胞增殖和凋亡的情况。为阐明miR-34a和Wnt/β-catenin信号通路在神经母细胞瘤发病机制中的作用提供依据，也为进一步研究神经母细胞瘤发生的分子机制和基因治疗方法提供新的思路和实验依据。方法：1、检索相关文献资料并应用生物信息学方法——靶基因预测软件(PicTar、TargetScan、microRNA.org、RNA22)预测并分析可能调控Wnt/β-catenin信号

5、通路的microRNA，同时预测miR-34a潜在的靶基因。2、构建miR-34a的模拟物并将其转入SK-N-SH细胞中，再以半定量反转录PCR（RT-PCR）、荧光定量PCR（Real-timePCR）检测miR-34a在细胞中的表达情况。3、在SK-N-SH细胞中过表达miR-34a后，虫荧光素报告实验分析Wnt1和catenin-δ-1的mRNA转录活性，以及β-catenin/TCF的转录活性；蛋白免疫印记法（Western-blot）检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白（Wnt1、β-c

6、atenin、CyclinD）的表达水平；免疫共聚焦显微镜观察β-catenin核转位情况。4、在SK-N-SH细胞中过表达miR-34a后，采用MTT法检测肿瘤细胞增殖情况，并运用流式细胞分析细胞凋亡情况。结果：1、经过文献查阅以及PicTar、TargetScan、microRNA.org、RNA22四种软件共同预测，miR-34a可能参与调控Wnt/β-catenin信号通路，catenin-δ-1为miR-34a潜在靶基因。I中文摘要MiR-34a通过Wnt/β-catenin信号通路影响神经母细胞瘤

7、细胞增殖及凋亡2、RT-PCR及Real-timePCR证实构建的miR-34a模拟物能使miR-34a在SK-N-SH细胞中过表达。3、在SK-N-SH细胞中过表达miR-34a后Wnt1和catenin-δ-1的mRNA转录活性，以及β-catenin/TCF的转录活性均受到抑制；Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白（Wnt1、β-catenin、CyclinD）的表达水平下降；同时，β-catenin的核转位也受阻。4、在SK-N-SH细胞中过表达miR-34a后，肿瘤细胞增殖水平下降，细胞凋亡

8、增多。以对照组SK-N-SH细胞为参照，实验组细胞在第24h、48h和72h的细胞生长抑制率分别为40.8%、20.9%和18.2%；实验组细胞在第24h、48h和72h的细胞凋亡率分别为对照组的2.09、2.25和1.77倍。结论：在神经母细胞瘤细胞（SK-N-SH细胞）中过表达miR-34a，miR-34a可以通过Wnt/β-catenin信号通路的经典途径，抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡。关键