nf-κb圈套策略对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响

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1、硕士学位论文论文题目NF-κB圈套策略对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响研究生姓名黄思红指导教师姓名周云教授专业名称儿科学研究方向泌尿外科论文提交日期2013年3月NF-κB圈套策略对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响中文摘要苏州大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其他教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，

2、均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明引起的法律责任。学位论文作者签名：黄思红日期：2013-05-27I中文摘要NF-κB圈套策略对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学有关收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手

3、段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密文件□本论文属于在年月解密后适用本规定。非涉密文件□（请在以上方框内打“√”）论文作者签名：黄思红日期：2013-05-27指导老师签名：周云日期：2013-05-27IINF-κB圈套策略对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响中文摘要NF-κB圈套策略对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响中文摘要目的：本实验研究环状哑铃形圈套寡核苷酸（Circulardumbbelloligodeoxynucleotides，CD-ODN）转染对核因子-κB（Nuclearfact

4、orkappaB，NF-κB）活性和神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖及细胞凋亡的影响，进一步检测凋亡抑制蛋白Survivin的表达情况，探索神经母细胞瘤基因治疗的新靶点。方法：电穿孔法将CD-ODN转染神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系，以未转染基因的SK-N-SH细胞为空白对照。本实验大致分三个部分：1、转染CD-ODN后NF-κB活性的变化：免疫激光共聚焦显微镜下观察细胞内NF-κB核转位情况变化；酶联免疫分析法（Enzyme-linkedimmunoassay，ELISA）检测细胞内NF-κBp65表达的变化。2、转染CD-ODN后

5、SK-N-SH细胞生物活性的变化：四甲基偶氮唑蓝比色法(methylthiazolyltetrazolium，MTT)检测转染CD-ODN后SK-N-SH细胞体外增殖活性的变化；流式细胞仪技术（Flowcytometry，FCM）检测转染CD-ODN对SK-N-SH细胞凋亡的影响。3、NF-κB活性抑制后凋亡抑制蛋白Survivin的表达变化：蛋白免疫印迹法（Westernblotting）检测NF-κB活性抑制后凋亡抑制蛋白Survivin的表达情况，初步研究NF-κB与Survivin的关系。每个实验重复三次。采用统计学方法分析实验数

6、据。结果：免疫激光共聚焦显微镜观察显示转染CD-ODN组SK-N-SH细胞细胞核荧光较空白对照组明显减弱；NF-κBp65ELISA结果显示转染24、48、72h后转染CD-ODN组SK-N-SH细胞吸光度值A明显低于空白对照组（p<0.05），表明转染CD-ODN后SK-N-SH细胞NF-κBp65蛋白表达下降，NF-κB活性受到抑制。MTT检测细胞增殖力，结果发现，转染CD-ODN组细胞MTT曲线幅度更小，以正常SK-N-SH细胞为对照，转染后24、48、72h的细胞生长抑制率分别为12%、29%、42%（p<0.05）；流式细胞仪A

7、nnexinV/PI双染色法检测结果发现转染CD-ODN48h后，转染CD-ODNIII中文摘要NF-κB圈套策略对神经母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响细胞组和空白对照组的细胞凋亡率分别为（23.01±0.71）%和(15.84±0.36)%（p＜0.05），转染CD-ODN后细胞早期凋亡率增加。Westernblotting结果发现与正常对照组比较，转染CD-ODN组SK-N-SH细胞凋亡抑制蛋白生存素（Survivin）的表达明显下降。结论：CD-ODN能抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞内NF-κB活性，抑制肿瘤细胞增殖，诱导神经母细胞

8、瘤肿瘤细胞早期凋亡，并且下调凋亡抑制蛋白Survivin的基因表达。这些实验结果表明，CD-ODN可能通过阻断NF-κB信号传导通路来诱导神经母细胞瘤细胞凋亡，为以NF-κB为靶点的神经母细胞