苦马豆素降解菌的筛选与鉴定

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1、苦马豆素降解菌的筛选与鉴定摘要疯草是豆科棘豆属和黄芪属有毒植物的总称，是危害畜牧业最严重的有毒植物之一。其特点是耐贫瘠，耐干旱，返青早，繁殖力强等。动物采食疯草表现为具有嗜瘾性，蓄积性中毒。其毒性成分主要为苦马豆素（Swainsonine，SW）。SW能够抑制细胞中α-甘露糖苷酶，影响糖蛋白的代谢，引起动物细胞空泡样变性，导致动物中毒死亡；造成母畜流产，畸形，弱胎等，引起动物繁殖性能障碍。研究表明，疯草含有丰富的营养成分，其营养价值与苜蓿相当，对其合理开发，不但能解决饲草料短缺问题，还可以降低疯草中毒所带来的经济损失。本实验对新疆南疆小花棘豆不同生长时期营养成分及与SW含量的关

2、系测定；并从土壤中筛选能够降解SW的细菌，对筛选得到的SW降解菌进行16SrDNA鉴定。本实验的进行为小花棘豆的开发利用奠定基础。1小花棘豆不同生长时期营养成分与SW含量的关系对新疆南疆小花棘豆，不同生长时期的营养成分与SW含量之间的关系进行测定，发现随着小花棘豆的生长，其营养成分有不断增加的趋势。其中粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和钙含量在盛花期时达到最大值，干物质和磷含量在结荚期达到最大值，NDF和ADF含量在落叶期达到最大值。小花棘豆SW含量随生长时期的发生明显变化，其中结荚期SW含量均高于其它时期。2.土壤处理采集阿合奇县小花棘豆生长地0～30cm的土壤，去除砂砾后称取10g，

3、加入90mL灭菌水，充分混匀静置，取上清液，加入牛肉膏蛋白胨液体培养基中37℃过夜培养。将提取得到的小花棘豆生物碱加入无机盐液体培养基中，每4天转接一次，转接3次，将液体培养基均匀涂布到含生物碱的无机盐固体培养基中，挑取菌落形态不同的菌进行纯化培养。3.土壤降解菌的筛选与降解测定取已分离纯化后的菌株在LB液体培养基中37℃，200r/min过夜培养，移取菌液加入无机盐培养基中在无机盐培养基中加入SW使无机盐培养基中含量由30mg/L每4天转接一次，逐渐增加SW含量，最后转接到含100mg/L的无机盐培养基中，发现有两株菌具有降解能力，XJAHQ5、XJAHQ26菌株的降解效率为

4、20.86%和30.12%。4.对SW降解菌的鉴定将具有降解能力的菌株XJAHQ5、XJAHQ26的16S保守序列在NCBI上进行BLAST对比，下载相似菌株利用MEGE6.0软件建立无根进化树，了解菌株的进化关系，鉴定发现两株菌为假单胞菌科假单胞菌属的恶臭假单胞菌。在不同pH条件下培养，发现菌株XJAHQ26在5~10可以生长，XJAHQ5在pH为4~10能够生长，其适应范围广有一定的开发价值。关键词：小花棘豆；苦马豆素；降解菌；鉴定ScreeningandIdentificationofSwainsonineDegradingBacteriaAbstractLocoweed

5、,themostseriouspoisonousplantswhichwasharmtothesustainabledevelopmentofanimalhusbandryintheworld,isthecommonnameofthegeneraAstragalussp.andOxytropissp.Itscharacteristicisbarren,droughtresistant,earlier,strongreproduction.Animalfeedlocoweedperformancehasaddictedtoaddiction,accumulationofpoiso

6、ning。Locoweedscontainswainsonine,whichistheprincipalagentresponsibleforlocoisminanimals.SWisaninhibitorofmannosidaseincell,whichcanaltermetabolismofglycoprotein,leadstocellularvacuolationandcellulardeath,finalycanresultsinanimaldeath.Infuenceonthepropertiesofanimalbreeding,easytoabortion,mal

7、formation,weakfetalandothersymptomscausedbyanimalreproductiveperformancebarriers.Bringstheseriouseconomiclossestolivestockindustry.Researchshowsthatlocoweedcontainsrichnutritionandmineralelements,itsnutritionalvalueandalfalfarather,itsreasonabledev