金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶lysgh15外用制剂的初步研制

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1、金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysGH15外用制剂的初步研制ThetopicalformulationsofStaphyloccocusaureusbacteriophagelysinLysGH15作者姓名：王彬专业名称：兽医学指导教师：韩文瑜教授学位类别：兽医硕士答辩日期：2015年6月6日本研究由以下项目资助国家自然科学基金--重点项目（项目编号：31130072）ThisworkwassupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(KeyProgram,No.31130072)中文摘要金黄色葡萄球菌

2、噬菌体裂解酶LysGH15外用制剂的初步研制金黄色葡萄球菌（Staphyloccocusaureus）是人和动物表皮及呼吸道广泛存在的重要致病菌，对人和家畜健康有着巨大的危害。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicilin-resistantS.aureus,MRSA）的出现给该菌感染性疾病的临床治疗带来了极大的困难。噬菌体裂解酶（bacteriophagelysin）是噬菌体在感染宿主菌末期表达的蛋白质，它通过水解细菌细胞壁的肽聚糖使子代噬菌体释放，从而杀死细菌。因此，裂解酶很有潜力成为治疗细菌感染疾病的新型药物[1]。实验室前期获得了对金黄色葡萄球菌具有广谱

3、、高效裂解活性的噬菌体裂解酶LysGH15，该裂解酶尤其对耐药菌株表现出高效均一的裂解活性。本研究在前期研究基础上，继续深入研制LysGH15的外用复方膏剂，确定有效的配方，并检测获得的复方膏剂治疗金黄色葡萄球菌引起的烧伤或烫伤感染模型的效果，从而为裂解酶LysGH15的外用治疗奠定基础。首先，本研究对噬菌体裂解酶LysGH15的外用膏剂进行了配方的初步确定，并对其进行了优化和改进，最终获得了复方凝胶制剂的配方：以金黄色噬菌体裂解酶LysGH15为主药，库拉索芦荟冻干粉为辅药，配以卡波姆940、甘油、氮酮、水等。进一步对LysGH15复方凝胶制剂的安全性进行了全

4、面的评价。表明：其对小鼠皮肤不具有急性毒性，亦不能引起过敏反应。然后，进一步利用金黄色葡萄球菌USA300建立了烧烫伤的小鼠感染模型。首先利用胶带对小鼠的皮肤进行多次粘贴，造成其皮肤黏膜的破溃，然后在创口处接种一定量的USA300菌株，发现106至108cfu的菌量能够获得金黄色葡萄球菌的烧烫伤感染模型。其创面的表皮层及真皮浅层受损，创面有明显水泡，湿润，基底潮红，并有疼痛感，水泡破裂后创面呈红白色，毛细血管扩张、出血。利用所建立的金黄色葡萄球菌引起的小鼠烧烫伤感染模型对LysGH15复方凝胶制剂的治疗效果进行了检测和评价。对其治疗结果表明应用复方凝胶制剂可以在

5、治疗后七天就能使感染菌量下降4至5个数量级，相比非治疗组，治疗效果I显著；治疗组小鼠的组织炎性细胞浸润明显减少，且创面愈合良好。表明LysGH15复方凝胶制剂在烧烫伤感染动物模型的治疗方面具有良好的效果。通过本研究成功获得了LysGH15的复方凝胶制剂，该制剂安全性良好，并且对金黄色葡萄球菌引起的小鼠烧烫伤感染模型表现出了良好的治疗效果。该研究初步确定了噬菌体裂解酶LysGH15的外用剂型和配方，为LysGH15的外部治疗应用提供了研究基础。关键词：金黄色葡萄球菌；噬菌体裂解酶；复方凝胶制剂；烧烫伤感染IIAbstractThetopicalformulatio

6、nsofStaphyloccocusaureusbacteriophagelysinLysGH15Staphyloccocusaureusiswidelydistributedinnature，andaspathogenicbacteriait'swidespreadintheskinandtherespiratorytractofhumansandanimals.TheEmergenceofmethicillin-resistantStaphylococcusaureusbacteriainclinicaltreatmentofinfectiousdiseas

7、esbroughtgreatdifficulties.Andcausedtremendousthreatforhumanandanimalhealth.Phagelyaseisakindofproteinthatwasexpressedbyphageattheendofinfection,whichbyhydrolysisofbacterialcellwallpeptidoglycanmakeprogenyphagereleased,therebykillingthebacteria.Therefore,phagelyasehasgreatpotentialto

8、becomethenew