金黄色葡萄球菌裂解酶LysGH15对表皮葡萄球菌生物被膜清除及其体内感染治疗的实验研究

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1、＋分类号：Ｓ８５２．６１１单位代码：１０１８３研究生学号：２０１５８５２０２８密级：公开吉林大学硕士学位论文学术学位（）金黄色葡萄球菌裂解酶ＬｙｓＧＨ１５对表皮葡萄球菌生物被膜清除及其体内感染治疗的实验研究ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓｌｙｓｉｎＬｙｓＧＨ１５ｏｎｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇｂｉｏｆｉｌｍａｎｄｔｒｅａｔｉｎｇｉｎｆｅｃｔｉｏｎｃａｕｓｅｄｐｈｙＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ作者姓名：张玉凤专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物

2、学与免疫学指导教师：韩文瑜教授培养单位：动物医学学院２０１８年６月金黄色葡萄球菌裂解酶LysGH15对表皮葡萄球菌生物被膜清除及其体内感染治疗的实验研究TheeffectofStaphylococcusaureuslysinLysGH15oneliminatingbiofilmandtreatinginfectioncausedbyStaphylococcusepidermidis作者姓名：张玉凤专业名称：预防兽医学指导教师：韩文瑜教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年6月2日国家自然科学基金（31572553，31502103）十三五国

3、家重点研发计划项目NaturalScienceFoundationofChina（31572553，31502103）Nationalkeypointresearchandinventionprogramofthethirteenth未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指

4、导下本人郑重声明，独立进行研宄工作所取得的成果Ｄ除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：□期：沐／》年６月／丨曰中文摘要金黄色葡萄球菌裂解酶LysGH15对表皮葡萄球菌生物被膜清除及其体内感染治疗的实验研究表皮葡萄球菌（Staphylococcusepidermidis）是一种凝固酶阴性葡萄球菌。是在人体的皮肤、阴道等部位寄生的常在菌，属于条件致病菌，在有些条件下

5、可引起菌血症、肺炎、皮肤感染等疾病，该菌易引起免疫力低下者和有医疗器械植入的患者发生持续性感染。虽然表皮葡萄球菌的致病力通常比较低，但该菌极易形成顽固的生物被膜，使其能抵御机体免疫系统和抗生素的清除作用，加大了其引发感染的治疗难度。同时，由于抗生素的不规范使用，表皮葡萄球菌的耐药性越来越严重，给抗生素疗法带来了巨大的挑战。综上，迫切需要研发全新作用机制的抗表皮葡萄球菌及其生物被膜的药物。噬菌体裂解酶是噬菌体感染末期编码的细胞壁水解酶，其靶点是细胞壁的肽聚糖，通过破坏细胞壁的完整性从而特异、高效地杀死细菌。课题组的前期研究表明金黄色葡萄球菌（Staphyloc

6、occusaureus）噬菌体裂解酶LysGH15在体内外对金黄色葡萄球菌表现出广谱、高效的抗菌作用，那么，LysGH15对表皮葡萄球菌和生物被膜及其体内感染是否同样具有有效的清除和治疗作用？为了回答这一科学问题，本论文开展了一系列的相关研究。首先，从临床样品中分离鉴定了25株表皮葡萄球菌、17株金黄色葡萄球菌、2株人源葡萄球菌和2株溶血葡萄球菌。进一步通过空斑实验和菌落计数等测定了LysGH15对这些菌株的杀菌活性，结果表明LysGH15在浓度为20μg/mL时，对所有的这些菌株都具有显著的杀菌活性，能够使菌量降低4个log单位。将LysGH15与表皮葡萄

7、球菌多次重复作用，菌株对LysGH15依然敏感，表明LysGH15不易导致细菌抗性的产生。LysGH15的体内应用可产生针对该酶的特异性抗体，且特异性抗体仅仅是减缓了LysGH15在体外对表皮葡萄球菌的抗菌活性，而对其最终的杀菌效果没有影响。进一步实验研究了裂解酶LysGH15对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、人源葡萄球菌和溶血葡萄球菌所形成生物被膜的作用。利用96孔微量滴定板法从I所分离菌株中筛选到了形成生物被膜能力较强的菌株，利用结晶紫染色法、电子显微镜观察法和共聚焦显微镜观察等实验，确定LysGH15在浓度为≥50μg/mL时能够有效的抑制生物被膜的形成

8、，而且在≥100μg/mL的浓度时能够有效地清除已形