黄帚橐吾内生真菌的分离鉴定及其代谢产物抑菌活性研究

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1、分类号站进学号巧冊碰四川农业大学硕丈学位论文黄蒂豪香內生真菌的分离鉴定及其代谢产物抑菌活性研巧罗彪指导教巧朗延春投学科专化临巧兽医学研；＾方向环境公害与动物疾病＿＿＿２０１５年６月—扛？—＇＇Ｙ．Ｘ；．；■■■－＇ｒｉ■，？■？＇－＿．－．．＇？．．．，Ｔ．．，？■－．－．＇ｒ’．４＇．．可；论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研巧工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文

2、中不包含其他个人或集体己经发表或撰写巧的研巧诚果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使＾的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。■、＾／研究生签名：心月／睾／少年甲表矣关于论文使用授巧的声明’本人完全了解四川农业大学有关保留、：使用学位论文的规定，即学校有权保留并向国家有关部ｎ或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。□本论文不

3、保密。□本论文保密，在年解密后适用本授权。＿＿＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ）研究生签名：Ｔ餐年月曰一导师签名：摘要黄帯豪吾内生真菌的分离鉴定及其代谢产物抑菌活性研究摘要内生真菌是一个新的有待开发的微生物资源。不仅能从传统的药巧植物中分一离到有益内生真菌，在些特殊环境下生长的其它植物也发现大量产活性代谢产物内生真菌，内生真菌对提高作物固氮、生物防控等方面起着重要的作用。本课题选择黄哥囊吾为研究对象，对植株的根、茎、叶Ｈ种组织的内生真菌进行分离纯化及初步鉴定。选用沙口氏杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌Ｈ种病原细菌为供试菌，研究

4、黄靑妻吾内生真菌代谢产物的抑菌活性Ｗ及热、ＰＨ、紫外光对发酵液抑菌活性稳定性的影响；并对其抑菌活性较好的菌株进行了分子鉴定和发酵条件优化，研究结果如下：３１．通过组织分离法，采用ＰＤＡ、ＭＥＡ和察巧种分离培养基，共分离纯６７３６，化得到黄帝囊吾内生真菌株，从分布情况来看，根部分离最多为株茎、叶分别得到１９株和１２株，经典形态学分类方法进行初步鉴定，它们分属于５目５科９属，其中木霉属和鎌拖属为优势菌属。一２．对１８株代表菌株发酵产物抑菌活性筛选研究发现，有１４株菌对至少种供试细菌具有抑菌活性（抑菌圈＞８ｍｍ），占总数的７７．７８％。其中，２７．７

5、８％对Ｅ．ＣＯ＂＞具有较好抑菌活性（抑菌圈１２ｍｍ），１６．６７％对姑具有较好抑菌活性，４４４４％。Ｎ２进．对具有较好抑菌活性对抑菌活性最好的菌株行形态学和分子鉴定确定其分类地位，为半知菌口、丝抱目、Ａ梗抱科、木霉属、棘抱木化側－ＴＷｃＡｏｏｆｅｒｍａＬＢＮ２ＡｉＮＫＪＶＩ２０７８４２霉，最终定名为＂ｓ／ｊｅ化（ｃｃｅｓｓｏｎｏ：）。３Ｎ２一．黄靑囊吾内生真菌发醇液稳定性结果显示：抑菌活性成分热稳定性般，６（ＴＣＷ下具有较好的稳定性，在中性偏弱酸环境稳定性最佳，紫外光照对发一，不致酵液影响较小同时间紫外光照下发酵液活性基本保持。４和

6、氮源的选择上生真菌Ｎ２对小分子类碳源和有机氮．对碳源，黄靑棄吾内，在此培养基中生长最快源的利用率最高。５．对黄哥妻吾内生真菌Ｎ２发酵液使用石油離、正了醇、乙酸乙醋兰种不同极性试剂萃取，研究结果表明，Ｎ２发酵液不同萃取相对指示菌的抑菌活性大小差异显著，石油離萃取相无抑菌活性。说明活性物质，己酸乙醋相抑菌活性最佳Ｉ＾属强极性物质，主要集中于乙酸乙醋中。６，．将菌株Ｎ２发酵液乙酸石醋萃取相浓缩为浸膏进行娃胶柱层析初步分离一和抑菌活性跟踪试验，分离到２个较高活性姐分用于进步分离纯化，薄层层析一。结果显示为单的褐色斑点，物质类型初步定性鉴

7、定为生物碱和萌类物质关键词：黄靑囊吾；內生真菌；抑茜活性；分子鉴定；代谢产物ＩＩＡｂｓｔｒａｃｔＳｔｕｄｉｅｓｏｎｓｅｃｏｎｄａｒｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓａｎｄｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｏｆｙｙ．ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉｆｒｏｍ心如／ａｎ。ｖｚ＞各幻＂ｒｅ幻ＬｕｏＢｉａｏＣｌｉｎｉｃａｌｖｅｌ；ｅｒｉｎａｒｍｅｄｉｃｉｎｅ（ｙ）ＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＨｕＹａｎｃｈｕｎＰｒｏｆｅｓｓｏｒＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｅｎｄｏｐ