药用植物内生真菌的分离及其抑菌活性筛选

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1、药用植物内生真菌的分离及其抑菌活性筛选IsolationofEndophyticFungifrommedicinalplantsandScreeningActivityStrainsAgainstPathogenicFungi作者姓名：张冬静专业名称：植物病理学指导教师：张艳华副教授学位类别：农学硕士答辩日期：2014年6月1日中文摘要药用植物内生真菌的分离及其抑菌活性筛选药用植物内生菌在植物微生态系统中，与宿主建立了长期和谐的联合关系，其次生代谢产物十分丰富，具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、杀虫、调节免疫及促进植物生长等生物活性，是筛选生物活性成分或先导化合物的

2、有效途径之一，在工业发酵、生物制药、农业生产等领域具有潜在的应用价值。本研究从不同地区采集药用植物进行内生真菌的分离，对所分离的内生真菌进行抗植物病原菌的筛选，对具有抗菌活性的菌株进行形态学和分子生物学鉴定，并分离、鉴定具有抑菌活性的化学物质，获得研究结果如下：1.从吉林抚松、吉林白山、吉林长春、四川成都、河北唐山、湖北武汉等地区采集人参、平贝母、黄莲、水仙、金银花、菘蓝、芦荟、射干、月见草、肥皂草、红景天、黄芪、百合、天麻等药用植物，设计培养基进行药用植物内生真菌的分离，共分离内生真菌222株，对分离菌株进行低温保藏。2.利用平板对峙法，筛选分别对玉米大斑

3、病菌、核盘菌、烟曲霉、尖孢镰刀菌、稻瘟菌、玉米灰斑病菌、蓖麻枯萎病菌、人参锈腐病菌、腐霉菌、番茄灰霉病菌等具有抑制作用的内生菌，结果有29株内生真菌可以至少对一种植物病原菌产生明显的抑制作用，其中从黄莲中分离到的菌株Cc-3和Cc-7对植物病原菌具有广谱抑菌作用，尤其对玉米大斑病菌和核盘菌抑制效果最佳。3.利用形态学和分子生物学对具有抑菌活性的29株内生真菌进行鉴定，结果表明，它们分别为隐孢壳属、茎点霉属、小球腔菌属、镰胞菌属、毛壳菌属、曲霉属、口蘑属、异茎点霉属、青霉属、裸节菌属、炭疽菌属、黑附球菌、背芽突霉属、高山被孢霉、柄孢壳菌、赤霉菌属等15个属。其

4、中菌株Cc-7为拟隐孢壳菌(Cryptosporiopsisericae)，Cc-3为多喙茎点霉(Phomamultirostrata)。4.通过对菌株Cc-3和菌株Cc-7及其次级代谢产物的抑菌性分析，最后确定它们都可以产生具有抑菌活性的物质，利用顶空固相微萃取(HS-SPME)气相色谱、质谱(GC－MS)联用法鉴定出菌株Cc-3产生的挥发性活性物质为四甲苯，菌株Cc-7产生的活性物质为πCaryophylleneC15H24。本研究首次从药用植物中分离出内生真菌222株，从中筛选对植物病原菌具有广谱抑菌活性的菌株Cc-3和菌株Cc-7，在玉米叶片和番茄叶

5、片离体条件下Cc-7菌株和发酵液对玉米大斑病菌和核盘菌具有较强的抑制作用，经鉴定这两株菌产生的挥发性次生代谢产物分别为四甲苯和πCaryophylleneC15H24。本研究为植物真菌病害的生物防治提供了理论基础，为开发潜在有利的新型药用化合物提供科学依据。关键词：药用植物；内生真菌；生物防治；抑菌活性；活性物质AbstractIsolationofEndophyticFungifrommedicinalplantsandScreeningActivityStrainsAgainstPathogenicFungiEndophyticfungiareknown

6、toestablishaharmonizedrelationshipwithreservoirsduringthelongrunofparasitismintheplantmicroecosysteminmedicinalplants.Theyarerichinabundantsecondarymetaboliteswithbioactivitiesincludingantifungal,antitumor,insectdisinfestation,immunoregulation,promotingplantgrowthandotherbiological

7、activity.Itmakesendophyticfungianimportantsourceforscreeningbioactivecomponentsandleadcompounds,whichhavepotentialapplicationvalueinmanyareassuchasindustrialfermentation,biologicalpharmacyandagriculturalproduction.Inthisstudy,avarietyofmedicinalplantswerecollectedfromdifferentdistr

8、ictsfortheisolationofendop