nm23在肝细胞增殖过程中的作用

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1、学术学位硕±学位论文单位代码：１０６７８分类号：Ｒ：３４学号；２０１２４目２密级：見略种大常硕壬学位论文ＮＭ２３在肝细胞增殖过程中的作用Ｖ院係）、所昆明医科大学附属甘美医院研究生姓名王海雷学科、专业外科学（肝胆外科学）学位类型学术学位指导教师李立教授—二〇五年五月尾种文常硕±学位论文ＮＭ２３在肝细胞増殖过程中的作用研究生姓名王海雷学科、专业外科学（肝胆外科学）申请学位类型学术学位指导教师李立教授完成日期二０—五年五月；，堯Ａ４辞Ａ令研究

2、生学位论文研究撰写声明本人郑重声明：本学位论文是我本人在导师指导下，独立进行学位课题研究所取得的研究成果。论文中除特别加Ｗ标注和致谢的地方外，不包含他人或其他机构己经发表或撰写过的研巧成果。对本研究和论文做过贡献的同道我均在论一文中作了明确的说明并表明谢意，。该学位论文资料若有不实之处本人愿承担切相关责任。（学位论文作者签名）：１４１＞焉月曰＾牌ｒｆ兔４５辞＊、常研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解昆明医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件

3、和电子版，允许论文被查阀和借阅。学校可公布论文的全部或部分内容（确属保密内容已注明，并在解密后遵守此规定）；学校可采用影印缩印或其他手段保存本学位论义。（）学位论文作者（签名）：指导教师签名：沪ｎｒ年巧ｒ日５＾Ｉ许ｒ月Ｊ０＂本人及导师同意将学位论文提交至清华大学中国学术期刊（光盘版）电子＂杂志社进行电子和网络出版，并编入ＣＮＫＩ系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。学位论文作者（签名）：Ｍ唯指导教师（签名）；皆年：ｒ月ｒ日ｏＭ

4、ｒ串ｒ月Ｊ日目录中文摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ３符号说明６一－第部分Ｅ２过表达和干扰载体的构建、扩增、鉴定７：ＮＭ２３前胃７材料和方法８Ｓ果２３Ｕ论３０小结３２参考文献巧－第二部分；ＮＭ２３Ｅ２在巧细胞増殖过程中的作用３５前胃３５材料和方法％结果４３讨＂论５０小结５３参考文献５４综述５６攻读学位期间发表文章情况６０ｍ．ｍ６１昆明医科大学硕±研究生学位论文ＮＭ２３在肝细胞増殖过程中的作用中文摘要一部分ＮＭ２

5、３－Ｅ２第：过表达和干扰载体的构建、扩増、鉴定－目的：、扩増、鉴定、筛选ＮＭ２３Ｅ２过表达和构建干扰载体，为后续实验奠定理论基碰。－－方法：１．ＮＭ２３Ｅ２ＨＰＶ化Ｅ６、Ｅ７慢病毒构与建慢病毒载体并测序；２．重组障病毒质粒的提取；ＮＭ２３－Ｅ２慢病毒转染邸Ｋ２巧Ｔ细胞３；．构建的４－．ＰＣＲＱ检测病毒滴度；－５．重组的ＮＭ２３Ｅ２慢病ＨＥＫ２９３Ｔ细胞及奉感染筛选；－６－．ＮＭ２３Ｅ２ｍＲＮＡ的艮ＴＰＣ民检测；７－．ＮＭ２３Ｅ２蛋白Ｗｅｓｔｅｒｎｌｏ。ｂｔ检测ＮＭ２－结果；成功构建３Ｅ２过表达和干扰慢

6、病毒载体并测序验证无误；通过转染－ＰＣＲ－ＨＥＫ２９３Ｔ细胞，测定病毒滴度应用Ｑ、Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ检测从ｓｈＲＮＡｌ、；ｓｈＲＮＡ２、ｓｈＲＮＡ３、ｓｈＲＮＡ４四个干扰序列中筛选出干扰效果最佳的ｓｈＲＮＡｌ作为干扰载体。－：成功构建ＮＭ２３Ｅ２的慢病毒载体，测序正确结论，筛选出干扰效果最佳的干扰载体及高表达的过表达载体。－－ｅｓｔｅｍ－关键词：ＮＭ２３Ｅ２质粒邸Ｋ２巧Ｔ细胞转染ＱＰＣＲＷｂｌｏｔ１昆明医科大学硕±研巧生学位论文二部分－Ｅ２在巧第：ＮＭ巧细胞増殖过程中的作用目的３－Ｅ２基因在ＢＲＬ－３Ａ

7、：研究ＮＭ２细胞增殖过程中的作用１（ｃｏｎｔｒｏ）方法：实验分五组：、对照组ｌ，未经任何处理２、过表达组（ＥｘｐＮＭ２３－Ｅ２－ＮＣ组２３－Ｅ）转染ＮＭ２３Ｅ２过表达载体３、过表达ＥｘＮＣ，２；转染ＮＭ，（ｐ）过表达阴性对照载体－，４、干扰ＮＣｓｈＲＮＡＮＣ，转染ＮＭ２３Ｅ２干扰阴性对照载（）ｓ－体５、干扰组ｈＲＮＡｌ，转染ＮＭ２３Ｅ２干扰载体。将包装；（）好的上述五种载体－－ＢＲＬ－分别转染大蘭３Ａ细胞，转染后第五天应用ＱＰＣＲ检测ＢＲＬ３Ａ细胞ＮＭ２３－Ｅ２、ｃｍＲＮＡ－－、ＰＣＮＡＣｌｉｎＤｌ的表达，应用Ｗｅｓ

8、ｔｅｍｂｌｏｔＢＲＬ３Ａｙ检测细－胞ＮＭ２３－Ｅ２、ＰＣＮＡ、ＣｃｎＤＣＫＢＲＬＡ细胞ｙｌｉｌ蛋白