厚朴杂交亲本及子代遗传多样性分析

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1、分类号S567.1+1密级公开UDC学位论文厚朴杂交亲本及子代遗传多样性分析GeneticDiversityAnalysisofHybridProgenyandHybridParentsofMagnoliaofficinalis麦静指导教师姓名杨志玲研究员申请学位级别农学硕士专业名称森林培育研究方向药用植物选育论文提交日期2015年5月论文答辩日期2015年6月学位授予日期2015年7月答辩委员会主席评阅人北京·中国林业科学研究院学位论文厚朴杂交亲本及子代遗传多样性分析学位论文作者麦静指导教师姓名杨志玲研究员指导小组成员杨旭助理

2、研究员申请学位级别农学硕士专业名称森林培育研究方向药用植物选育论文答辩日期2015年6月中国·北京DissertationfortheDegreeGeneticDiversityAnalysisofHybridProgenyandHybridParentsofMagnoliaofficinalisCandidate:MaiJingSupervisor:Prof.YangZhi-lingAssociateSupervisor:YangXuAcademicDegreeAppliedfor:MasterofAgricultureSpe

3、ciality:SilvicultureDateofDefence:June，2015Degree-conferring-institution:ChineseAcademyofForestry独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中時别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书一而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表

4、巧谢意。学位论文作者签名：日期；年７月＜日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中国林业科学研巧院有权保留并向国家有关部口或化构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阔。本人授权中国林业科学研究院可＾将学位论文的全部或部分内容编入＾＾有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名；＞ｒ以（年７月＾曰年＾月曰摘要厚朴（Magnoliao

5、fficinalis）为落叶乔木，隶属于木兰科（Magnoliaceae）木兰属（Magnolia），为我国三大木本药材之一，国家二级保护植物，广泛分布于我国长江流域的亚热带及北热带地区。厚朴因其具有重要药用价值，在20世纪80年代被过度采挖利用，致使野生植株数量骤减，生境呈现片断化，近年来的研究表明厚朴自然居群间的基因交流受阻，生存现状令人担忧，开展厚朴种群遗传多样性保护和恢复工作迫在眉睫。基于对厚朴遗传多样性及遗传结构的了解，本研究在厚朴不同种群间进行杂交授粉试验，利用SSR分子标记手段对获得的厚朴杂交子代，杂交亲本以及亲本

6、的自由授粉子代个体检测其遗传多样性，从分子水平揭示厚朴子代和杂交亲本的遗传多样性水平及差异，并提出下一步保护策略，主要研究结果如下：（2）厚朴SSR引物筛选及反应体系优化在SSR引物筛选基础上，利用正交设计对影响PCR反应的5个因素浓度（模板DNA、引物、Mg2+、dNTPs及Taq酶）进行4水平的优化，并通过温度梯度优化引物退火温度。在厚朴和近缘物种的70对引物中，筛选出13对扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物。PCR各因素在不同水平下对反应体系的影响大小依次为：引物>Taq酶>Mg2+>dNTPs>模板DNA；PCR最佳优

7、化体系为：25μL体系中，模板DNA2ng•μL-1，引物0.6μmol•L-1，Mg2+2.0mmol•L-1，dNTPs0.5mmol•L-1，Taq酶0.03U•μL-1；最佳扩增程序：94℃预变性4min，94℃变性30s，48~59℃（退火温度随引物不同而定）退火30s，72℃延伸1min，35个循环后72℃延伸10min。通过生物信息学手段设计了40对厚朴SSR引物，其中有6对表现出多态性；在筛选出的引用鹅掌楸、单性木兰和日本厚朴近缘种的7对多态性引物中，有6对来自日本厚朴，1对来自星花木兰，引用鹅掌楸的引物均无多态

8、性，说明引用近缘种引物是选择物种SSR引物的重要来源，且亲缘关系越近，引物通用性越高。本次试验筛选出的13对厚朴SSR引物在10个样品中均能扩增出特异性条带，并具良好的稳定性及较高多态性，但此次获得的引物数量偏少，还远不能满足研究的需要，在后续试验中会继续筛选出