靶向h、n基因sirna抑制vero细胞中cdv的增殖研究

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1、分类号：Ｓ８５２．６Ｓ５单位代码：１０１８３研究生学号：２０１２８５２００３密级：公开馨古林大学硕女学位论文学术樂化（）鞭向Ｈ、Ｎ基因ＳｉＲＮＡ抑制Ｖｅｒｏ细胞中ＣＤＶ的增殖研究ＩｎｈｉｂｉｔｉｎｔｈｅｒｅｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｎｇｐｉｎｅｄｉｓｔｅｍｅｒｖｉｒｕｓＣＤＶｉｎｖｅｒｏｐ（）ｃｅｌｌｓｂｙｓｉＲＮＡｔａｒｅｔｉｎｔｈｅｎｕｃｌｅｏｃａｓｉｄｒｏｔｅｉｎｅｎｅａｎｄｔｈｅｇｇｐｐｇｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｐｒｏｔｅ

2、ｉｎｇｅｎｅ作者姓名：袁巧专业：动物学研究方向：实验动物质量监测指导教师：任文砂教授培养单位：动物科学学院２０１５年１２月未经本论文作者的书面授权，依法收存巧保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发巧、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用。不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任吉林大学硕±学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工

3、作所取得的成果。除文中己经经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名曰期；年月｜２靶向H、N基因siRNA抑制CDV在Vero细胞上的增殖研究Inhibitingthereplicationofcaninedistempervirus（CDV）inverocellsbysiRNAtargetingthenucleocapsidprote

4、ingeneandthehemagglutininproteingene作者姓名：袁龙专业名称：动物学指导教师：任文陟教授学位类别：理学硕士答辩日期：2015年12月04日本研究资助项目吉林省科技发展计划青年科研基金（201201014）JilinprovincescienceandtechnologydevelopmentprogramYouthResearchFund（201201014）前言犬瘟热是犬科常见易患的病毒性疾病，该病具有高接触性、高传染性和高死亡性。同时该病也可以传染给其他物种，比如鼬科以及部分浣

5、熊动物。目前尚无有效治疗药物，而弱毒疫苗特异性差、容易变异等缺点，也无法使动物免受感染。因此寻找该病的预防手段和治疗方法十分重要。RNA干扰（RNAinterference，RNAi）是由双链RNA（double-strandedRNA，dsRNA）分子激发的有效防御机制。小干扰RNA（siRNA）能表达目的蛋白、保护宿主免受病毒感染、病毒基因组转录调控、抑制抗原表达，揭示病毒与宿主相互作用的影响。CDV基因编码的血凝素蛋白（H蛋白）是CDV囊膜表面的糖蛋白之一。病毒通过H蛋白使病毒囊膜和宿主细胞膜粘合，因此H蛋白

6、决定了宿主的特异性，同时融合蛋白（F蛋白）使病毒囊膜和宿主细胞膜进行融合，达到病毒入侵宿主的目的，H蛋白也可以使机体产生抗体。CDV核衣壳蛋白（N蛋白）是保守性较强的蛋白。并且，N蛋白上含有T细胞表位，病毒感染时可以引起剧烈的免疫反应。因此本实验将CDV的H基因与N基因作为RNAi的目的基因，通过RNAi技术进一步了解靶向siRNA如何影响CDV在vero细胞中的增殖。本实验证明犬瘟热病毒在Vero细胞中的增殖特点。设计合成靶向CDVH基因和N基因的siRNA，转染细胞后检测siRNA对CDV的抑制效果；结果表明靶

7、向N基因和H基因siRNA均能有效抑制CDV增殖。实验结果能为CDV的防控提供新的思路以及为研究CDV复制和感染机制提供参考依据。I中文摘要靶向H、N基因siRNA抑制Vero细胞中CDV增殖效果研究犬瘟热（caninedistemper，CD），是由犬瘟热病毒（caninedistempervirus，CDV）感染犬科等动物引起的一种高接触性的烈性传染病。该病传染性强，死亡率高，范围遍布全世界，给动物保护和经济养犬业造成了巨大的损失。目前该病以预防为主，尚无有效治疗手段。RNA干扰（RNAinterference

8、，RNAi）是一种由双链RNA诱发的基因沉默现象，是古老的生物体内的自我防御机制。RNA干扰技术现已经广泛应用于病毒病、治疗和靶点选择、保护宿主免受病毒感染、病毒基因组转录调控、表达目的蛋白、抑制抗原表达，揭示病毒与宿主相互作用的影响。CDV核衣壳蛋白（nucleocapsid，N）是包裹在RNA外的一层螺旋状蛋白，是CDV基因中最保守的区域。N蛋白基因组中