产epa海洋微藻的分离筛选及培养条件优化

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1、学校代q10608*^2012071010331分赛Q942密级公开GnangxlUniversityforNationalities碩士学位办丈产EPA海洋微藻的分离筛选及培养条件优化研#学所年论究师#員文U名专学成vlft姓科姓«宪名潘艺华:nr.:/"r/>职称刘红全副教授r,.r>»•<业生物化学与分子生物学."^i/•院海洋与生物技术学院..kCj.-/•//-I<•,名*丨、••级2012a•Y..*•Ifi

2、养条件优化专业：生物化学与分子生物学研究方向：植物分子生物学研究生：潘艺华指导老师：刘红全副教授论文起止日期2013年4月至2015年5月论文独创性声明本人郑重声明i所提交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立撰写完成的•除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或其他机构己经发表或撰写过的研宄成果，也没有剽窃、抄袭等违反学术道德规范的侵权行为�对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明4本人愿意承担由本声明而弓丨起的法律责任。论文使用授权声明本人完全了解广西民族大学有关保留、使用学位论文的规定。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的

3、复印件和电子文档，可以釆用影印、縮印或其他复制手段保存、汇编学位论文•除在保密期内的保密论文外，允许学位论文被査阅和借阅，可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容曰期：年6月/矽曰s期:v/r年〈月/»曰产EPA海洋微藻的分离筛选及培养条件优化摘要近年来，EPA(二十碳五烯酸)在人类健康保健方面的应用越来越受到关注，EPA的消费市场也随着人类的需求而不断扩大。微藻由于其总脂含量丰富，不饱和脂肪酸种类多样性，EPA含量高，细胞繁殖生长快、细胞结构简单而被认为是最具潜力的EPA生产原料来源。本研究从广西北部湾海域红树林保护区中采样，利用平板涂布分离法、平板划线分离法、微吸

4、管分离法分离海洋微藻，通过尼罗红染色法初筛分离得到10株总脂含量较高海洋微藻。经气相色谱检测EPA含量，得到5株产EPA微藻，其中2株微藻HD02和HE06的EPA含量分别为0.22%和0.16%，产率分别为33.4μg·L-1·d-1和25.8μg·L-1·d-1，其倍增时间分别为2.7d和2.5d，悬浮生长，具有一定的工业化应用价值。经形态观察及18sDNA序列分析，鉴定HD02为桥湾藻属、HE06为菱形藻属。采用正交试验对这两株海洋微藻进行了培养条件优化，以提高其生物产量以及EPA产率。优化结果显示：桥湾藻HD02的最适培养条件硅元素80mg/L、硝酸钠75mg

5、/L、维生素B150μg/L、维生素B120.5μg/L、生物素8μg/L、IAA4mg/L、6-BA1mg/L、赤霉素0.4mg/L、甘油2.4g/L、葡萄糖2.7g/L、碳酸氢钠0.9g/L，在此条件下，其EPA产量提升到930.1μg·L-1·d-1，生物量产率为34.2mg·L-1·d-1，EPA含量为2.72%（占干重）。HE06的最适培养条件硅元素77mg/L、硝酸钠75mg/L、氯化铵5mg/L、尿素30mg/L、维生素B11.5mg/L、维生素B126μg/L、生物素10μg/L、葡萄糖1.2g/L、甘油2.4g/L、碳酸氢钠1.2g/L，在此条件下，

6、其EPA产量提升到503.9μg·L-1·d-1，生物量产率为32.6mg·L-1·d-1，EPA含量为1.55%（占干重）；为了提高微藻细胞内总脂含量，对分离到最高产油微藻HE07进行紫外诱变，涂布尼罗红平板，在荧光显微镜下共挑取了10株荧光强度较强藻落。扩大培养以及总脂测定后发现共有8株微藻总脂含量高于出发藻株，总脂占细胞干重在33.0%~53.3%之间，其中最高含油株为UV-7，总脂含量占到细胞干重的53.3%。总脂产率最高为UV-6，达到15.6mg·L-1·d-1。关键词：海洋微藻分离培养条件正交优化EPAIIMicroalgaeIsolatedandcul

7、turemediumoptimizationforeicosapentaenoicacid(EPA)productivitiesAbstractTheapplicationofEPAinhumanhealthcarehasreceivedincreasingattentioninrecentyears,andtheglobalconsumptionofEPAhasincreased.MicroalgaeareconsidertobepotentialsourcesforEPAproductionduetoitsstableandhighlipidco