人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白的优化表达

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1、祁和皆《促中＠聲３钟３獻硕±研究生学位论文．，北京协和医学院研究生院１同等学力申请硕±学位学校代码：００２３学号：ＺＳ２０１２０４９硕ｄｔ学位论文人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白的优化表达Ｏｐｔｉ曲ｉｚｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓｍａｊｏｒｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｓ所院：医学生物学研究所姓名：杨旭指导教师：李埼涵导师小组：马雁冰姚宇蜂学科专业；免疫学研究方向：基因工程疫苗完成日期；２０巧年５月中国医学科学院北京协和医学院硕±

2、论文目录摘要ＩＡｂｓｔｒａｃｔＩｌｌ一１第章前言１１．１人乳头瘤病毒简介一１２取Ｖ１．的般情况及生活周期１１．３ＨＰＶ感染的危害性１４ＶＬＰ疫苗２．病毒样颗粒及１．５ＨＰＶ预防性疫苗研究进展２１６ＨＰＶ４．疫苗制备常用表达系统１．６．１原核表达系统４１２４．１酵母表达系统１．６．２．１酿酒酵母表达系统４１．６．２．２毕赤酵母表达系统５１６２３５．．．汉逊酵母表达系统…１ｔ３昆５．虫杆状病毒表达系统６１、．

3、７本谋题主要研究内容目的及意义第二章实验材料与方法７２．１材料７７２．１．１质粒及菌株２．１．２主要试剂７２．１．３主要仪器９么１．４常用试剂配制９２．２实验方法１６２．２．１密码子优化人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白Ｌ１（ＨＰＶＬ１）在大厥杆苗中的１６表达２．２．１．１引物设计与ＰＣＲ扩増ＨＰＶＬ１目的基因１６２２１．２ＨＰＶＩ化１ｒｘ１９．．非融合及Ｔ融合表达重组质粒的构建２．２．１．３ＨＰＶＬ１ＧＳＴ酷合表达质粒的构建２２中国医学科

4、学院北京协巧医学院硕±论文‘２．２．１．４ＨＰＶＬ１酷合蛋白３７Ｃ培养条件下的诱导表达２３２．２．１．５表达产物的分析与鉴定２４２．２．２不同密码子优化ＨＰＶ１６基因序列在毕赤酵母中的表达２４２．２．２．１ＨＰＨ化１不同基因序列的分析２４２２２２２４．．．重组质粒的构建２．２．２．３重组质粒的鉴定２６２２２４３１．．．重組质粒转化酵母感受态细胞１化１３２２．２．２．５ＨＰＶ在毕赤酵母中的表达么２．２．６表达产物的分析与鉴定３３

5、册乂乂０＞２．２．２．７１化１重组蛋白和病毒样颗粒（８）的初步纯化和电镜观察３４第Ｈ章实验结果３５３．１ＨＰＶＬ１基因在原核表达系统中的构建、表达与鉴定３５３１１ＰＣＲ３５．．产物及重组质粒鉴定－７３１３ＨＰＶＬ１ＧＳＴ３．．不同宿主菌对謡合蛋白表达的影响３Ｖ１６Ｌ１３８．１．４基因的不同核昔酸序列特征对册表达的影响３．１．５不同基因型ＨＰＶＬ１蛋白的ＧＳＴ賴合表达３９３３９．１．６不同诱导培养温度对表达的融合蛋白可溶性的影响３．１．７小结４０３．２不同密码子优化ＨＰ

6、Ｖ１化１基因序列在毕赤酵母中的构建、表达与鉴定４０３２１ＨＰＶ１化１４０．．不同基因序列的分析４３３．２．２ＰＣＲ体外扩増ＨＰｎｅＬ１基因Ｗ及重组质粒酶切鉴定３２２１４３．．．ＰＣＲ扩増ＨＰＶ１化１基因结果３．２．２．２ＰＣＲ产物及载体的酶切和回收４４３２２３重组质粒的酶切鉴定４５．．．３．２．３不同密码子优化ＨＰＶ１６Ｌ１基因序列在毕赤酵母中的表达４７３．２．３．１ＨＰＶ１化１基因序列Ｍ１６、Ｙ１６、Ｐ１６、Ｗ１６ＰｉｎｋＨＣ中在ｐ的表达４７３２

7、２ＨＰＶ１６Ｌ１基因Ｍ１６、Ｙ１１６Ｗ１６ｉｎｋＨＣ．．３．比较序列６、Ｐ、在ｐＰ和ＰｉｎｋＬＣ中的表达４７ｐ３．２４不同蛋白、ＨＰＶ１化１基因．酶缺陷雜合及截断形式对在毕赤酵母中表达的影响５０中国医学科学院北京协和医学院硕±论文３．２．４．１ＨＰＶ１６Ｌ１重组质粒Ｙ１６ＨＣ在ｐＰｉｎｋＳｈａｉｎｌ、２、３、４中的表达５０３．２．４．２ＨＰＶ１６Ｌ１不同誕合及截断形式的表达；５１３．２．５册Ｖ１６Ｌ１不同基因序列表达产物的可溶性分析和病毒样颗粒的组装能

8、为的对比５１３．么６小结５３３．３讨论５３展望５７參考雄５９６４ａ谢作者简历６５独创性