猪伪狂犬病毒糖蛋白b细胞表位编码序列的克隆及融合表达

《猪伪狂犬病毒糖蛋白b细胞表位编码序列的克隆及融合表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号UDC密级编号专业硕士学位论文猪伪狂犬病毒糖蛋白B细胞表位编码序列的克隆及融合表达CloningandFusionExpressionofporcinepseudorabiesvirusglycoproteinB-cellepitopecodingsequences学位申请人：张冲指导教师：李学伍研究员合作教师：张春杰教授专业领域：兽医学位类别：兽医硕士2015年06月独创性声明本人声明，所呈交的论文是我个人在导师指导下完成的研究工作及取得的研究成果。据我所知，文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河南科技大学或其它

2、教育机构的其他学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：摘要摘要猪伪狂犬病（porcinepseudorabiesPR）是由伪狂犬病毒（Pseudorabiesvirus,PRV）引起的、严重危害我国养猪业健康发展的重要传染病之一。该病毒属于疱疹病毒科甲型疱疹病毒亚科，线性双链DNA病毒，基因组DNAG+C含量高达72%，编码70-100种蛋白。目前已知的编码糖蛋白有11种，其中gB、gC、gD糖蛋白，在病毒与宿主细胞的相互作用中发挥着重要的功能。gB、gC、gD糖蛋白均为囊膜蛋白，广泛分布于

3、病毒颗粒的囊膜表面，不同疱疹病毒的gB、gC、gD糖蛋白基本一致，具有高度保守性。gB、gC、gD糖蛋白均具有多个空间表位和线性表位，每种蛋白诱导产生的抗体均能单独能中和病毒，阻止病毒对细胞的感染。gB、gC、gD糖蛋白的优势空间表位和线性表位，能够诱导机体产生高水平的中和抗体，gB、gC或gD蛋白的亚单位疫苗均可保护小鼠或猪免受PRV感染，具有良好的免疫原性和反应原性，是构建重组DNA疫苗和疫苗免疫检测的首选蛋白。本研究以临床分离的PRV流行毒株做为研究材料，对PRV病毒进行细胞培养后，提取病毒DNA。依据Genbank中PRVgB、gC、gD蛋白B细胞表位编码序列，利用

4、融合PCR技术，分别设计gB、gC、gD蛋白B细胞表位编码序列融合扩增引物，将gB、gC、gD蛋白B细胞表位编码序列有机的融合为gB-C-M、gB-C-N、gB-D表位编码序列，将gB-C-M、gB-C-N、gB-D表位编码序列分别克隆于PMD19-T载体中，构建质粒PMD19-T-gB-C-M、PMD19-T-gB-C-N、PMD19-T-gB-D。应用BamHI和HindIII限制性内切酶酶切上述克隆载体，琼脂糖电泳回收酶切产物，并将其克隆于PET-28a表达载体，将构建的重组载体进行酶切鉴定，并对插入片段进行序列测定和分析，成功构建了pET-28-gB-C-M、pET

5、-28-gB-C-N、pET-28-gB-D表达载体。分别挑取含有上述表达载体的阳性克隆，对阳性克隆进行诱导表达并对其表达条件进行优化，成功表达了PRV糖蛋白融合B细胞表位编码序列；并对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western-blot免疫印迹试验，初步鉴定了表达产物的生物活性，结果显示该表达蛋白能够被PRV阳性血清识别，具有良好的生物学活性，为猪群免疫水平检测及亚单位疫苗的构建奠定了基础。I摘要关键词：猪伪狂犬病病毒；gB、gC、gD蛋白；B细胞表位编码序列；融合表达论文类型：应用基础研究选题来源：国家自然科学基金项目(No.31172348)IIABSTRACT

6、ABSTRACTPorcinepseudorabies(PR)iscausedbypseudorabiesvirus(PRV),whichoneofthemajorinfectiousdiseasescausingseriousdamagetothehealthydevelopmentofswineindustryinourcity.ThePRVbelongstotheherpesvirusfamilyherpesvirussubfamily,lineardouble-strandedDNAvirus,genomicDNAG+Ccontentashighas72%,codi

7、ngprotein70-100.Atpresentthereare11speciesofknowncodingglycoprotein,includinggB,gC,gDglycoprotein,thereplayanimportantfunctionbetweenthevirusandhostcellinteraction.gB,gC,gDglycoproteinsarecapsulemembraneproteins,whichwidelydistributedincapsulemembranesurfaceof