松果菊苷对秀丽隐杆线虫寿命的影响及分子机理研究

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1、Ａ斬Ｉ矣＊ｆＴＩＡＮＪＩＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ中固第－所现代大学ＦＯＵＮＤＥＤＩＮ１８９５点‘全日制专业学位硕±学位论文■ＩＫＷＭＭＩＷＷ］■叫ｌ＾＾＾■１■ＩＢ關■ｉＷｌＨｉｆｌＭＷＷｉｙｙＵＷＭ—ＷｑＷ＾＾Ｂ：ＭＭ学科专业：药学．作者船：ｎ指导教师：周立军副教授，＇豕＾■ｆ．；．秦非識；＾Ｐ１参天津大学研究生院匯２０１５年５月松果菊苷对秀丽隐杆线虫寿命的影响及分子机理研究TheeffectofechinacosideonCaenorhabditiseleganslifespanan

2、ditsmolecularmechanism学科专业：药学研究生：王雪指导教师：周立军副教授天津大学药物科学与技术学院二零一五年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，，除了文中特别加Ｗ标注和致谢之处外论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中。与我作Ｔ明确的说明并表示了谢意。一■签字日期：学位论文作者签名：巧年＾月％日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留

3、、使用学位论文的规定。特授权天津大学可杉、将学位洽文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索、汇编供查阅和借阅。同意学校，并采巧影印、缩印或扫描等复制手段保存向国家有关部口或机构送交论文的复印件巧磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文ｆ储签备ｊ／＇Ｊ签字日期年月日签字日期：＾５年ｒ月＾＾＾日中文摘要松果菊苷（Echinacoside，ECH）是一种植物多酚化合物，最初于北美松果菊属狭叶松果菊分离出来。后经研究发现，肉苁蓉中可以提取出大量高纯度的松果菊苷。目前报道松果菊苷的药理作用有抗氧化、抗炎、神经保护、保护肝脏、清除自由基

4、等。但是尚没有文献报道松果菊苷是否具有体内抗衰老活性。目的：本研究旨在评价松果菊苷对于线虫寿命的延长作用并探讨松果菊苷延长线虫寿命的作用机制。方法：1.寿命实验：线虫分为松果菊苷0μM（对照组）、50μM、150μM、300μM、600μM组，通过寿命实验初步判断药物的抗衰老效果，并筛选出最佳体外给药浓度。2.压力应激实验：进行37℃热应激实验、百草枯氧化应激实验,佐证寿命实验同时检测松果菊苷是否通过提高线虫压力应激能力延长线虫寿命。4.产卵实验：对比给药组线虫和空白组线虫的产卵时期和产卵量，检测松果菊苷在延长线虫寿命的同时是否影响其生殖能力。4.咽泵实验：通过对比给药组线虫

5、和空白组线虫每分钟的咽泵次数，检测药物对于线虫摄取食物能力的影响。5.daf-16(mgDf50)突变株寿命实验：线虫分为松果菊苷0μM（对照组）、300μM组，检测松果菊苷对daf-16基因缺失突变线虫寿命的影响。6.DAF-16的亚细胞定位实验：在荧光显微镜下观察DAF-16::GFP转基因虫株经300μM松果菊苷处理后DAF-16::GFP的亚细胞定位情况。7.荧光定量PCR实验：对线虫给药一段时间后，提取线虫总RNA，利用荧光定量PCR实验检测线虫体内DAF-16下游基因sod-3,hsp-16.2和ctl-1的表达量的变化。结果：1.松果菊苷在适宜的浓度范围内可以延

6、长线虫的寿命，300μM为最佳用药剂量。2.300μM松果菊苷能提高线虫在急性热应激和急性氧化应激环境下的生存率，进一步证实了松果菊苷具有抗衰老的作用。3.松果菊苷在延长寿命的同时不会损害线虫的生殖能力。4.松果菊苷不影响线虫的咽泵频率，提示我们药物的抗衰老作用不是通过热量限制途径实现的。5.分子机制研究表明：松果菊苷促进DAF-16向细胞核内聚集并因此提高了DAF-16的转录活性，从而延长线虫寿命。结论：综上所述，我们评价了松果菊苷对线虫寿命的延长作用,并对其作用机制进行了初步的探索，为松果菊苷的延寿功效提供了实验依据。考虑到daf-16是一个从线虫到哺乳动物高度保守的转录

7、因子，我们的研究有助于将松果菊苷应用于人体衰老相关疾病的治疗。关键词：松果菊苷；长寿；daf-16；秀丽隐杆线虫ABSTRACTEchinacoside(ECH)isanaturalphenylethanoidglycosides(PhGs)foundinvariousspeciessuchastheEchinaceaangustifoliaandthepopulartraditionalChineseherbalmedicineCistanchetubulosa.Ithasbeenreportedth