甲型流感病毒不同亚型混合感染分析及n9亚型流感病毒na基因进化分析

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1、分类号：R373.13学校代码：10062密级：学号：2012702008硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：甲型流感病毒不同亚型混合感染分析及N9亚型流感病毒NA基因进化分析TITLE：AnalysisofinfluenzaAvirusesdifferentsubtypesmixedinfectioncaseandneuraminidasegeneticevolutionofinfluenzaAsubtypeN9viruses一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：万勇指导教师：汤华天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：

2、R373.13学校代码：10062密级：学号：2012702008学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：甲型流感病毒不同亚型混合感染分析及N9亚型流感病毒NA基因进化分析TITLE：AnalysisofinfluenzaAvirusesdifferentsubtypesmixedinfectioncaseandneuraminidasegeneticevolutionofinfluenzaAsubtypeN9viruses一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：万勇指导教师：汤华导师组

3、成员：刘民天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：2015年3月4日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和

4、借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：2015年3月4日导师签名：日期：2015年3月4日中文摘要流感病毒可引起急性呼吸道传染病并且该病毒每年都有不同规模的小流行，若干年一次全球范围的大流行，给人类健康和经济的发展带来负面影响。作为流感病毒表面包膜主要的两种糖蛋白血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)，不但与病毒的致病性有关，同时HA和NA还要承受着外界环境的选择压力，在这些选择压力

5、之下往往会引起HA和NA的变异，也会增加产生新型病毒的可能性。本研究共分为两个方面对流感病毒不同亚型的共同感染及流感病毒的进化进行描述。希望借此为阐明流感病毒流行规律提供新的依据。第一部分目的：了解一例新甲型H1N1和季节性H3N2亚型流感混合感染病例中季节性H3N2亚型流感病毒和新甲型H1N1亚型流感病毒的HA和NA基因的变异情况。方法：鼻咽拭子的核酸样本和细胞培养物100倍稀释的核酸样本经实时荧光PCR方法鉴定流感病毒亚型。病毒经MDCK细胞培养后进行红细胞凝集试验（HA）和红细胞凝集抑制试验(HI)。分离病毒毒株，提取核酸经逆转录聚合酶链反应（RT-PC

6、R）方法扩增HA和NA基因，获得测序结果与WHO推荐的疫苗株和疫苗相似毒株同源比对，使用生物信息软件绘制种系发生树。结果：鼻咽拭子和细胞培养物实时荧光PCR检测为季节性H3N2阳性（CT值25.837VS15.675）；新甲型H1N1阳性(CT值20.267VS25.169)。季节性H3N2HI滴度为>1280，新甲型H1N1HI滴度为80。通过与2013至2014年WHO推荐的疫苗株比对结果分离毒株的HA与A/Victoria/361/2011(H3N2)和A/Texas/50/2012(H3N2)的HA片段比较,氨基酸残基其同源性分别为96.7%和97.1

7、%。与A/Texas/50/2012(H3N2)的NA片段同源性为99.6%。分离的新甲型H1N1亚型流感病毒毒株中HA与NA氨基酸残基与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)比对，HA与NA片段的同源性分别为97.9%和97.8%。同时比对中发现无论季节性H3N2亚型还是新甲型H1N1流感病毒分离毒株HA和NA蛋白都出现了一些氨基酸位点的变异，而且一些位点涉及抗原决定区域。在NA序列比对中未发现如奥司他韦和扎那米韦等神经氨酸酶抑制类药物的耐药位点变异。结论：通过本研究说明在两种亚型共同流行期间，采用实时荧光PCR方法可I检测人季节性H3N

8、2和新甲型H1N1混合感染病例。并希望