中国林蛙皮肤抗菌肽的分离纯化及生物活性研究

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1、分类号：Q514+.3单位代码：10193密级：公开学号：2012194硕士学位论文中国林蛙皮肤抗菌肽的分离纯化及生物活性研究Studyonpurificationandbioactivityofskin-antimicrobialpeptidesinRanachensinensis作者姓名：王雅丽学位类别：学术型硕士专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：免疫生物化学指导教师：魏峰教授所在学院：生命科学学院2015年05月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知

2、，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版

3、权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要抗菌肽（Antimicrobialpeptide

4、s）也称为肽抗生素，是一类小分子多肽，广泛分布于生物体内。两栖类动物皮肤湿润、裸露，可分泌大量具有抑菌活性的物质，其中以抗菌肽为主。本研究旨在从中国林蛙皮肤分泌的活性物质中提取并进一步分离纯化出新型的抗菌肽，并对其生物学活性进行研究，为两栖类动物抗菌肽的研究奠定基础。实验蛙间断性电刺激，超纯水收集产生的分泌物，反相高效液相色谱对分泌物分离纯化，将金黄色葡萄球菌（ATCC25923）作为活性试验指示菌进行抑菌效果检测，获得1种抑菌效果较强的抗菌肽，经MALDI-TOFMS质谱鉴定，该抗菌肽纯度达95%以上，序列鉴定表明

5、该抗菌肽的氨基酸序列为FLPFFAACAITKKC（8和14位之间形成二硫键），将其命名为AMP-1。利用多肽固相合成中国林蛙抗菌肽AMP-1、分离纯化，经抑菌活性检测及质谱鉴定，获得目的抗菌肽AMP-1。MIC结果表明：AMP-1对金黄色葡萄球菌（ATCC25923）和大肠杆菌（ATCC25922）有抑制作用，对多重耐药菌株也有一定的抑制效果；溶血试验结果表明：AMP-1最高浓度时溶血率仅为1.108%；抗肿瘤活性试验结果显示：AMP-1对人乳腺癌细胞MCF-7的生长有很强的抑制作用，最高浓度时抑制率可达75.8%

6、，且最低浓度时仍有抑制作用；抗弓形虫活性试验结果显示：AMP-1对弓形虫的抑制作用随浓度的增大而增强，随着时间的延长也会增强。作用72h，50μg/mL的AMP-1对弓形虫的抑制率高达72.5%，而最低浓度时对弓形虫仍具有抑制作用。关键词：抗菌肽，中国林蛙，分离纯化，抑菌活性IAbstractAntimicrobialpeptidewhichwaswidelydistributedinvivo,alsoknownaspeptideantibiotic,wasaclassofsmallpeptide.Amphibian

7、skinwhichcouldsecretelargeamountsofsubstanceswithantibacterialactivitywhichthemaincomponentwasantimicrobialpeptidewasmoistandbare.ThisstudywasdesignedtoextractedandisolatedandpurifiedthenewantimicrobialpeptidesfromtheactivesubstancesofRanachensinensisskinsecret

8、ions.Wewouldmakeastudyofitsbiologicalactivity,sothatwecanlaythefoundationforthestudyofamphibianantimicrobialpeptides.Experimentalfrogshadbeeninducedbyintermittentelectricals