《利用厌氧菌制备agagcl复合纳米粒子的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
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ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ：１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：ＳＩ５４２８ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｂｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓ１；ｅｒ民ｅｓｅａｒｃｈｏｎｒｅａｒａｔｉｏｎｏｆＡ／ＡＣｉｃｏｍｏｓｋｅｐｐｇｇｐｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｂｙａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔ；ｅｒｉａＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＷａｎＪｉａｏｇＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＺｈａｎＪｉｅｐｇＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｒｅｅＡｌｉｅｄｆｏｒ：ＭａｓｔｅｒｇｐｐＳｅｃｉａｌｉｔ：ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｐｙｇｙＤａｔ：ｅｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｊｕｎｅ２０１５．，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔ：ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｙｙＩ 摘要摘要一本研究利用硝酸银浓度梯度法从大庆油田污水中分离得到株耐银的厌氧菌菌株，利用形态学观察及分子生物学方法对该茵株进行鉴定，并该菌株作为生物材料合成Ａ－ｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子，通过紫外全波长扫描（ＵＶｖｉｓ、Ｘ射线衍射（ＸＲＤ、透射电子显））微镜（ＴＥＭ）、高分辨透射电子显微镜（Ｈ民ＴＥＭ）及傅里叶红外分析（ＦＴＩＲ）等手段对Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子进行表征，研究其合成反应条件及合成机理，并对Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的光催化性能进行了初步硏究，为生物合成金属纳米复含材料开嘛了新的途卷。主要实验内容如下：（１）耐银厌氧菌菌株筛选本研究通过对大庆油田水处理站的含油污水样品中菌群富集并利用硝酸银浓度梯度一法筛选出株耐银厌氧菌菌株。形态学观察结果显示其菌落大多为楠圆形，，黑色半透明，边缘整齐，表面光滑。显微镜观察结果显示该菌株革兰氏染色反应呈阴性，菌体为？ｘ￣短杆状，．０１ｉ，，长度为１．６畔０．２０．８Ｈｍ无芽抱能运动。生理生化实验结果表明该菌’株最适生长温度为３７Ｃ，最佳生长ｐＨ为８．０，能在Ｗ蛋白胳、酵母膏、葡萄糖和乳酸钢等为碳源的培养基上生长，硝酸盐为菌株良好氮源。分子生物学鉴定结果显示该菌株－与Ｇｗ地化ｊｓ．ＥＭＺＹ１同源性高达９９％。综合其形态学ｐ、生理生化特征及１６ＳｒＤＮＡ’分析，确定该菌属于仿ｓ．／ｅ舶！．ｗｘｚＯｌ。ＪＴＴｚｅ加ｆｐ，并命名为Ｇａｒｃｓｐ２Ａ／ＡＣｌ复合纳（）ｇｇ米粒子的生物合成及合成条件探究本研究Ｗ筛选的厌氧菌作为生物材料，利用其菌体培养液与硝酸银溶液海合培养合／Ｃ－成ＡｇＡｇｌ复合纳米粒子，并利用ＵＶｖｉｓ、ＸＲＤ、ＴＥＭ、ＨＲＴＥＭ及巧化等表征手段Ｖ－ｖ￣７００对产物进行了表征。Ｕｉｓ光谱图显示在３５０ｎｍｎｍ之间出现了宽而强的吸收峰：°°°ＸＲＤ图谱显示２０值对应３８．１１６，４４．２７７，６４．４２６嘴７７．４７２的衍射峰与银的标准图谱。。°。ＰＤＳｆｉ５－１２７１２４３，５４７８，卡片（ＪＣｌｅ：６２８７）吻合，而２目值对应．８３，３２．４６．２３３，．４。。。－５７，６１，１４ＣＰＤｆｉｌｅ：１．４７８７．４７７４．４７哪％．７３的衍射峰与氯化银的标准图谱卡片ＪＳ３（１巧８吻合，证明合成了Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子ＴＥＭ照片显示Ａ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子）；ｇ一？ＴＥＭ形状为球形或近球形，般为单分散性，粒径分化在１０５０ｎｍ之问；ＨＲ照片中可Ｗ看到相邻的Ａ（ｌｌｌ与ＡＣｌ２００晶面的晶格条纹，Ａ／ＡＣｌ复ｇ）ｇ（）；依据巧Ｍ照片计算ｇｇ合纳米粒子平均粒径约为２７ｎｍＦＴＩＲ结果分析提示生物法合成可提高纳米粒子的稳定；性和分散性。对于产物合成条件的探究结果表明：合成反应发生的适宜温度范围在’？？１５３７Ｃ之间，培养基初始ｐＨ在６９范围之间，说明温度与ｐＨ是影响Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子制备的重要条件根据原子光谱化收化测定的结果可知Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子；ｇｇ的转化率为７９．６８％，接近于目前化学方法合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的转化率。（３）Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子合成机理探讨及光催化活性研究－－Ｉｔ ＾－ＰＡＧＥ技本研究通过ＳＤＳ术对Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的合成机理进行了初步探索－。ＳＤＳＰＡＧＥ电泳结果显示添加硝酸银溶液的菌体发酵液中产生了两种新蛋白，相对分子量分别为８０ｋＤａ和１４０ｋＤａ。Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子表面附着蛋白的电泳图谱显示经过ＳＤＳ和尿素及煮沸处理后，８０瓜ａ左右的蛋白分子可Ｗ被处理下来，而经过蒸偕水处理的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子则没有条带出现，说明８０ｋＤａ左右的蛋白质对于一Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的稳定具有重要的作用。硝酸还原酶活化测定结果表明：定浓度的硝酸银溶液能够诱导硝酸还原酶产生，硝酸还原酶活性随着ＮＣＶ浓度增大而增大，＂浓度达到一但当Ｎ０３定的值后，硝酸还原酶活，由于菌液中的重金属离子产生抑制作用性降低。本文通过甲基澄（ＭＯ）的降解实验对Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的光催化性能进行了研究。结果表明：当在可见光下照射并且添加Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子时，７０ｍｉｎ甲基燈溶ｇｇ％一液的降解率达到９６。由此可见，Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子可作为种高效光催化剂应用于光催化降解领域。关键词厌氧菌；生物合成；Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子；光催化－－１１ ＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｔｒａｄＡｎａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉｕｍ化ｓｉｓｔａｎｔ化ｓｉｌｖｅｒｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｅｔｒｏｌｅｕｍａｓｔｅｗａｔｅｒｏｆｗｐＤａｉｎｏｉｌｆｉｅｌｄｕｓｉｎｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｓｉｌｖｅｒｎｉｔｒａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏ打ｇｒａｄｉｅｎｔ．Ｔｈｅｓｔｒａｉ打ｗａｓｑｇｇｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｏｒｈｏｌｏｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏ打ａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｍｅｔｈｏｄａｎｄｉｔｗａｓｕｓｅｄａｓ泣ｍｐｇｇｙｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｍａｔｅｒｉａｌ化ｓｙｎｔｈｅｓｉｓＡｇ／ＡｇＣｌｃｏｍｐｏｓｉｔｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．Ｔｈｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅｃｈａｃ－－ｍｔｅｒｉｚｅｄｂＵＶｖｉｓｓｅｃｔｒｕｍＸｒａｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎＸＲＤＴｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｅｌｅｃｔｒｏｎｍｉｃｒｏ化ｏｙｐ，ｙ（），ｐｙＴＨＭｈ－ｉｈｒｅｓｌｕｔｉｏｎｒａｎｓｍｉｉｏｎｅｌｅｃｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏｅＦｏｕｒｉ巧ｔｒａｎｓｆｏｒｍ（），ｏｔ巧ｔｒ（ＨＲＴＥＭ）ｇｐ，ｎｆｒａｅｃｔｔｃｉｒｅｄｓｐｔｒｏｓｃｏＦＴＩ民ｅｃ．Ｉｎｔｈｉｓｗｏｒｋｂｏ化ｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｎ出ｔｉｏｎｓａｎｄｃａａｌｔｉｐｙ（），，ｙｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＡ／Ａｌｃｏｍｏｓｉｔｅｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓａｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．ＴｈｉｓｓｔｕｄｏｅｎａｎｅｗｒｏｕｔｅｆｏｒｇｇＣｐｐｙｐｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｍｅ化１打ａｎｏｃｏｍｏｓｉ化ｓ．ｐＴｈｅｍａｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｔｅｎｔｓａｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：她ａ打ａｅｃ化ｕｍｓｔｔ１Ｓｃｒｅｅｎｉｎｒｏｂｉｃｂａｒｉｒｅｉｓｔａｎｏｓｉｌｖｅｒ（）ｇＡｎａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃｔｅｒｉｕｍ巧３１５１站１《化ｓｉｌｖｅｒｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｐｅｔｒｏｌｅｕｍｗａｓｔｅｗａｔｅｒｏｆｗａｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｔａｔｉｏｎｓｉｎＤａｉｎｏｉｌｆｉｅｌｄｕｓｉｎ化ｅｍｅｔｈｏ过ｏｆｓｉｌｖｅｒｎｉｔｒａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｑｇｇｇｒａｄｉｅｎｔ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｍｏｒｈｏｌｏｉｃａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｍｏｓｔｏｆｉｔｓｃｏｌｏｎｉｅｓｒｅｓｅｎｔｏｖａｌｐｇｐ，ｂｌａｃｋ，ｔｒａｎｓｌｕｃｅ打ｔ，ｎｅａｔ，ｓｍｏｏｔｈｓｕｒｆａｃｅａｐｐｅａｒａ打ｃｅ，了ｈｅｒｅｓｕｌｔｏｆｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄ化ａ－？ｘ？ｔｉｔｗａｓａＧｒａｍｎｅａｔｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａａｓｈｏｒｔｒｏｄａｂｏｕｔ１．０１．６ｉｍ〇．２０．８ｉｍｉｎｇ，，｜｜ｌｅｎ化ｏｔｉｖｅ打０ｓｏｒｅｓ．Ｒｅｕｌｔｏｆｈｉｏｌｏｉｃａｌｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｔｅｔｈｏｗｅｄ化ａｔ化ｅｇ，ｍ，ｐｓｓｓａｎｓｓｐｙｇ〇ｏｐｔｉｍｕｍｇｒｏｗｔｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｐＨｖａｌｕｅｓｆｏｒｓｔｒａｉｎｗｅｒｅ３７Ｃａｎｄ８．０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ－ｓ－ｔｒａｉｎｃｏｕｌｄｕｓｅＬｌｉｎａｌｙｌａｃｅｔａｔｅ，ｐｅｔｏｎｅｌｕｃｏｓｅｓａｃｃｈａｒｏｓｅａｎｄＳｏｄｉｕｍＳｌａｃｔａｔｅａｓｐ，ｇ，（）ｃａｒｂｏｎｒｅｓｏｕｒｃｅａｎｄｎｉｔｒａｔｅａｓｎｉｔｒｏｅｎｒｅｓｏｕｒｃｅ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙｉｄｅｎｔｉｆｌｃａｔｉｏ打ｒｅｓｕｌｔｓｇ－ｎｄｃａｅｄｔｓｔｒａｗａｓｃｒｔｅｔｏｔｒ．ｅｕｅｎｃｉｉｔｈａＵｈｅｉｎｌｏｓｅｌｙｅｌａｄ化ｅｓａｉｎＧｗｒ／Ｗ／幻ｓＥＭＺＹ１９９％ｓｅｐ（ｑｓｉｍｉｌａｒｉｔ．Ｔｈｅｓｔｒａｉｎｗａｓｉｄｅｎｔｉ巧ｅｄａｓＧ幻成沁化ｓ－ｗｘｚＯｂｔｍｏｒｈｏｌｏｉｃａｌｈｓｉｏｌｏｉｃａｌ）／ｐｌｙｈｅｙｐｇ，ｐｙｇ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｔｈｅｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆ１６ＳｒＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅ．２区ｉｏｓｎｔｈｅｓｉｓｏｆＡ／ＡｌｃｏｍｏｓｈｅｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓａｎｄｔｈｅｓＵｉｄｏｆｓｎｔｈｅｓｉｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ（）ｙｇ呂ＣｐｐｙｙＴｈｉｓｓｔｕｄｙｒｅｐｏｒｔｅｄｏ打ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＡｇ／ＡｇＣｌｃｏｍｐｏｓＵｅｎａ打ｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｕｓｉｎｇｔｈｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎａｅｒｏｂｉｃｂａｃ化ｒｉａａｓｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｍａｔｅｒｉａｌｍｉｘｅｄｗｉｔｈｓｉｌｖｅｒｎＵｒａｔｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．ＴｈｅｒｏｄｕｃｔｓｗａｓｐｃｈａｒａｃｔｏｉｚｅｄｂＵＶ－ｖ－ｉｓＸ民ＤＴＥＭＨＲＴＥＭＦＴＲｅｔｃ．ｖｉｓｓｅｃｔｒｕｍｓｈｏｗｅｄ也ａｔａｙ，，ＩＵＶ，，，ｐｗｔ？ＴＸＲＤｉｄｅａｎｄｓｒｏｎｇａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｅａｋｂｅｔｗｅｅｎ３５０７００ｎｍｈｅａｔｔｅｒｎｏｆｔ：ｈｅｒｏｄｕｃｔｓ；ｐｐ°°°°＝ｅｘｈａｃｔ．２７７．ｗｈｔｏ化ｉｔｅｄｄｉｆｒｉｏｎｅａｋｓａｔ２０３８．１１６４４６４．４２６ａｎｄ７７４７２ｉｃｈａｒｅｉｎｄｅｘｅｄｐ，，，。°０。°二－ｗｔｈｅｍｅｔａｌｓｉｌｖｅｒＪＣＰＤＳｆｉｌｅ：６５２８７１．Ｈｏｅｖｅｒ２０２７．８３１３２．２４３４６．２巧５４．４７８５７．４７８（），，，，，，。。。化－６７．４７１７４．４７１ａｎｄ７６．７３４ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｉｎｄｅｘｅｄｔｈｅＡＣｌｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌＣＰＤＳｆｉｌｅ：３１，，ｇｐｙｙｔ１２３８．ＩｔｒｏｖｅｓｔｈａｔＡ／ＡＣｌｃｏｍｏｓｉｔｅｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｓｎｈｅｓｉｚｅｄ．ＴＥＭ）ｐｇｇｐｐｙｙｍｉｃｒｏｇｒａｐｈｓｈｏｗｅｄＡｇ／ＡｇＣｌｃｏｍｐｏｓｉｔ；ｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅｓｐｈｅｒｉｃａｌｏｒｎｅａｒｌｙｓｐｈｅｒｉｃａｌｓｈａｐｅ，ｍ 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目录目录摘要ＩＡｂｓｔｒａｃｔＩＩ１绪论１１１．纳米材料１１．２纳米复合材料１１．３Ａ／ＡＣＩ复合纳米粒子ｇｇ１１Ａ．４Ａｇ／ｇＣｌ复合纳米粒子的应用２１．５Ａｇ／ＡＣｌ复合纳米粒子的制备方法２ｇ．１．５１化学法２１１１．５．．光化学还原法２１．５．１．２化学还原法３１．５．．１３微乳液法３１．１．４．５直接沉淀法３１．．．５１５氧化法３１．．５．１６水热溶剂法４１２生物法４．５．１５．２．１细菌４．１．５．２．２真菌５１．５．．２３植物５１．６研究的日的与意义５１．７课题的研究内容６２耐银厌氧菌的筛选与鉴定７２．１实验材料７．２１．１样品来源７２１．２．实验仪器７２．１．３主要生化试剂７２．１．４实验试剂配制８２．１．５实验培养基及配制８２２实．验方法８２．２．１耐银厌氧菌的筛选８２．２．２菌株的形态学观察９２．２．３生理生化特性研究９２．２．４分子生物学鉴定９－Ｖ－＊ ａｓｔ２．２．４．１总ＤＮＡ提取９２．２．４．２ＰＣＲ扩增１６ＳｒＤＮＡ９２２４ＳＰＣＲ０．．．扩增目的片段的纯化１２１０．２．４．４目的片段的克隆测序与系统进化树的构建２．２．５生长特性研究１０２．２．５．１生长曲线的测定１０２２Ｓ２０．．．温度对茜株生长的影响１２２Ｓ３培养基初Ｈ对菌．．．始ｐ株生长的影响１０２．３结果与分析１１２３１．．耐银厌氧菌的筛选１１２３２１．．形态及生理生化特性１２．３．３分子生物学鉴定１２２．３．４生长特性研究１４２３４．１菌株ＷＸＺ０１的生长．．曲线１４２．３．４２湿度对ＷＸＺ０１生长的影响１５．菌株２３．４Ｈ．．３培养基初始ｐ对苗株ＷＸＺ０１生长的影响１５２４１６．本章小结３Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子的生物合成及合成条件探究１７ｇｇ３１．实验材料１７３．１．１实验菌株１７３．１．２实验仪器１７３．１３１．实验试剂７３．１．４实验培养基及配制１７３．２实验方法１８３．２．１Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子的生物合成１８ｇｇ３．２．２Ａ／Ａ１８ｇｇＣｌ复合纳米粒子的表征３－－．２．２．１紫外可见（ＵＶＶｉｓ扫描分析１８）５．２．２２ＸＤ８．射钱衍射（ＸＲ分析１）３．２．２．３透射电镜ＴＥＭ）和高分辨率透射电镜（ＨＲＴＥＭ分析１８（）Ｓ．２．２．４粒径分布１８Ｓ．２．２．５傅里叶红外ＦＴ１Ｉ９（巧光谱分析３．２．３Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子合成条件探索１９ｇｇ３．２．３．１反应时间对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成的影响１９．２Ｓ．３．２不同温度对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成的影响１９３．３．２．３培养基初始ｐＨ对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成的影响１９Ｓ．２２．４ＡＩ．ｇ／ＡｇＣ复合纳米粒子转化率的测定１９－Ｖ－Ｉ ３．３结果与分析２０３３１．．Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的生物合成２０３３２Ａ／．．ｇＡｇＣｌ复合纳米粒子的表征２０－３－．３．２．１紫外ＵＶＶｉｓ扫描分析可见（２０）５３２２．．．Ｘ射线衍射ＸＲＤ分析２１（）Ｓ．３．２．３ＴＥＭＨＲＴＥＭ透射电镜（和高分辨率透射电镜（２２））分析Ｓ．３．２．４粒径分布分析２３Ｓ３２．．．５傅里叶红外ＦＴＩＲ光谱分析２３（）３３３Ａ．．Ａｇ／ｇＣｌ复合纳米粒子合成条件探巧２４３．３．３．１反应时间对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成的影响２４３．３．３．２不同温度对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成的影响２５Ｓ３３３Ｈ对Ａ／ＡＣＩ．．．培养基初始ｐｇｇ复合纳米粒子合成的影晌２５Ｓ．３．３．４Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子的转化率分析２６３４本章．小结１１４Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子合成机理探讨及光催化活性研究２８４１．实验材料２８４．１．１实验菌株２８４．１．２实验仪器２８４丄３实验试剂２８４．１．４实验试剂配制２９４．２．１菌体二次发酵液蛋白样品的制备２９４．２．２表面蛋白样品的制备３０４．２．３蛋白电泳实验３０．４．２４硝酸还原酶活性ＮＲＡ测定３０（）４．２．５Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子光催化巧性研究３０４．３结果与分析３１．．４３１菌体二次发酵液蛋白样品电泳结果分析３１４３．２ＡＡ．ｇ／ｇＣｌ复合纳米粒子表面蛋白电泳结果分析３２４．３．３硝酸还原酶ＲＡ测定结果分析活性（Ｎ３３）４．３．４厌氧菌合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的机理探讨３４４３５ＡＡ．．ｇ／ｇＣＩ复合纳米粒子光催化巧性分析３４４．４本章小结３５５结论３７５．１本７硏究结论３５．２创新点３７５．３展望３７－Ｖ－ＩＩ ＾参考＊献３８巧读学位期间发表的学术论文４４致谢４４－－ＶＩＩＩ １绪化１绪论１．１纳米材料纳米材料是指由纳米数量级？ｒｎｎ（１１００）的极细颗粒组成的固体材料，根据纳米粒子Ｗ的组合方式和形态，通常分为纳米粉体、纳米纤维、纳米膜和纳米块体材料等四类。？纳米材料的基本单元按照空间维数可１＾１分为Ｈ类町（１）零维纳米材料，空间Ｈ维尺度均一在纳米巧寸范围，如纳米颗粒、原子团簇、人造原子，；（巧维纳米材料在空间范围内有两维处于纳米尺寸范围，如纳米棒、纳米线、纳米管；（３）二维纳米材料，指在空间范一围内有维处于纳米尺寸范围，如纳米薄膜、多层薄膜、超晶格等。纳米材料具有很多Ｐ１ＷＷ与宏观材料不相同的特殊性质，，如量子尺寸效应，小尺寸效应表面效应和宏观Ｗ量子隧道效应。目前，纳米材料广泛应用在傕化材料、防静电材料、低温超导材料、ｎ电子浆料Ｗ及生物传感器材料等领域，具有非常广阔的应用前景。１．２纳米复合材料？复合材料－－，是由两种或两种上物理和化学性质不同的物质组合而成的种多相固体材料一一，复合材料中的相为连续相，另相为分散相，分散相Ｗ独立相态存在于整个Ｗ连续相中，两相么间存在相界面。随着纳米科技的不断革新，，纳米复合材料迅速发展起来成为纳米材料中最重要的成员。１９８４年Ｒｏｙ和Ｋｏｒｍａｍｅｎｉ等首次提出了纳米复合材料（Ｎａｎｏｃｏｍｐｏｓｉｔｅｓ）的概念ｗｅｉ一，它是指由两种或两种Ｗ上的固相至少在维Ｗ纳米尺度复合而成的材料。纳米复合材料的种类繁多，按照纳米复合材料组成成分的不同分为无机纳米复合材料、有机纳米复合材料－１＾及无机有机纳米复合材料，按照纳米复合材料的不同结构分为内部混合型纳米复合材料和核壳型纳米复合材料，还有按照构成纳米复合材料的具体物质名称分ＵＩ１类，如半导体纳米复合材料等。纳米复合材料不仅保持了各个组分材料的基本性能，＂＂而ｎ在各组分原来物理、化学特性基础ｈ．取长补短实现不同材料之间的巧能复合、ｔｗ互补和优化，。纳米复合材料综合了纳米材料和复合材料的优点由于两相界面问强烈的相互作用，产生许多宏观尺寸体系所不具备的力学、热学、光学、电学等新的性能Ｍ－ｗ广泛应用在催化ｔ、能源、环境和生物医药等领域。１．３Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子ｇｇ？ｉｗｇＡＡＰＲｌｉｇ／ｇＣｌ复合纳米粒子是种具有表晒等离子体共振（Ｓ）效应的纳米复合材ＰＷＡＡ料，具有很好的稳定性和光催化活性。ｇ／ｇＣｌ复合纳米粒子的ＳＰＲ效应与表面存在的自由电子运动有关一定频率的入射光波的电场诱导其外层自由电子产生极，当具有化后，Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子的极性增强，Ａ／ＡＣｌ复合纳米ｇｇ，假设电场中正电荷稳定ｇｇ？粒子内部的负电荷会发生重置，，因而导致其表面出现净电荷该净电荷产生个新建电－－Ｉ 东北林业大学硕±学位论文一场，通过给体系施加种静电回复力使电子产生了偶极振荡，当振荡频率与电磁波的频ｉｕ一Ｐ’ｉＡ／ＣｌＳＰＲ。率致时会产生锅合共振，送就是ｇＡｇ复合纳米粒子效应的发生过程Ａ一／ＡＣｌ复合纳米粒子由于其独ＳＰＲ效应在可见区域有较强的吸收为ｇｇ特的，可作种ｐｓｉ高效的新型等离子光催化剂用于处理废水中的有机污染物。１．４Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的应用随着现代化工业的迅猛发展，全球面临着日益严重的水污染问题。含有多种有机染料的有机工业废水是水体污染的主要来源。由于这类废水化学成分复杂，颜色深、浓度高、产量大，并且有很强的毒性，所直是各大工厂、矿业亟需解决的难题。目前，物理吸附法和混凝法是常用的染料废水处理技术，但是由于这两种方法去除率低、处理成本高，不适宜大规模推广。化学法具有破坏性，而且在使用过程中会造成二次污染。而纳米复合材料能够利用部分太阳能作为反应的驱动力快速降解水中有害污染物，因此４Ｐ１引起了各国环境工作者的兴趣。Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子处理废水具有成本低、效率高、反应条件温和、可减少二次污染等优点，使有机污染物完全转化为Ｃ化和Ｈ２化Ｗ２＇３？及Ｓ０４＼Ｎ０３、Ｐ〇４等无机小分子物质。Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子光催化降解的原理在可见光照射下，染料分子中共觀发色体系的结构被破坏，激发了吸附在其表面上Ｃ一的染料，Ａｇ／Ａｇｌ复合纳米粒子的价带得到个电子生成正碳自由基，而价带中的电子一与溶解在水中〇？？２的生成〇２，并进步转化成Ｈ００或£？自由基，这些活性氧类物质在进攻染料自由基后一，释基与发色基团经过系列复杂的化学反应，染料最终被分解成小的有机及无机矿化物质。１５Ａ．ｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子的制备方法１．５．１化学法化学法制备纳米复合材料的工艺技术已发展的较为成熟，主要包括光化学还原法、化学还原法、微乳液法、沉淀法、氧化法和水热溶剂法。化学法制备纳米复合材料具有操作简单和形貌可控的优点，但也存在着如高能耗、对环境和人体、副产物多、易聚集有害的缺点，限制了其在生物医药领域的广泛应用。１．５．１．１光化学还原法该法是利用氯化银在光照或福射《件下能够自发分解进而产生金属银的特征来获得ＡＰｇ／ＡｇＣｌ纳米复合材料。２００８年，Ｈｕａｎｇ等哨Ｕ用离子交换法制备出ＡｇＣｌ，然后利用一，ＡＣＡ光致还原反应使部分ｇｌ分解产生定含量的ｇ纳米粒子，从而获得了分散性好Ｉ＂－／ＡＣ。－的ＡｌＬａｎ１ｇｇ复合纳米粒子ｉｇ等噪用化学沉积光还原法制备出粒径分布在００２００ｎｍ的Ａｇ＠ＡｇＣｌ／ＫＪｉ４化复合光催化剂，这种复合光催化剂在２ｈ内对罗丹明Ｂ染料降解率达到８２．７％，具有优异的光催化性能。－２－ １绪论１．５．１．２化学还原法化学还原法是利用还原性化学试剂，将银盐中的银离子部分还原，从而得到ＰＳＡｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子。Ｓｈｕ等哦ＮａＨＣ〇３逐滴加入等体积的ＡｇＮ〇３溶液中反应生成Ａｇ２Ｃ〇３，在磁力揽拌的条件下加入石二醇作为还原剂使Ａｇ２Ｃ＆部分还原成Ａｇ２Ｃ〇３＠Ａｇ，再加入适量稀ＨＣ１，最后收集沉淀，得到ＡｇＣｌ＠Ａｇ复合光催化剂。这种ＡｇＣ晦Ａｇ光催化剂在可见光的照射下对甲基檀（Ｍ０），亚甲蓝（Ｍ巧和罗丹明Ｂ表现Ｐ９＋出良好的光催化活性。Ｗａｎｇ等咱ＮａＢＨ４为还原剂将Ａｇ还原为Ａｇ，然后与ＦｅＣＵ溶？／液混合，最终制备出粒径分布在２０２００ｎｍ且均匀分散在ｒＧＯ表面的ＡｇＡｇＣｌ复合纳米粒子。１．５．１．３微乳液法微乳液是由Ｈｏａｒ和ｓｅｈｕｌｍａｎ首次报道并命名的，它指的是两种互不相溶的液体形ＰＷＺ成的具有热力学稳定性的、均匀透明或半透明的分散体系。ｈｕ等利用十六婉＝基Ｈ甲基氯化钱（ＣＴＡＱ和十六焼基甲基漠化锭（ＣＴＡ巧分别作为氯源和漠源，设计了一Ａ种新的油化微乳液体系，并通过与ＡｇＮ〇３水溶液反应，合成了ｇ／ＡｇＣｌ和Ａｇ／ＡｇＢｒ３３纳米复合结构［］。民ｏｎｇ等将配制好的ＡｇＮ〇３和ＮａＣｌ水溶液分别加入乙醇、十二持基横酸轴（ＳＤＳ）、正下醇和异辛持的海合物作为乳化剂的混合物中进行超声分散。在超一声分散均匀状态下起，Ｃｌ纳，将两种泥合液混合在利用光诱导法制备出球形Ａｇ＠Ａｇ米粒子，并研究了不同反应物浓度对纳米粒子纳米粒子尺寸和形貌的影响。微乳液法能够控制纳米粒子的粒径大小和形状，但是此方法合成的纳米粒子产量低，并且不易从微乳液体系中分离出来，制约了其工业化推广和应用。１．５．１．４直接沉淀法一般是通过Ａ直接沉淀法ｇＮ〇３的水溶液或者银氨溶液直接与含有氯离子的水溶液反应，ＡＣ／ＡＣｌＺｈｕ得到ｇｌ沉淀，然后经过脱水或加热分解得到Ａｇｇ复合纳米粒子。等ＰＷ利用氧化石墨巧作为保护剂和催化剂，通过ＡｇＮ〇３和ＮａＣｌ沉淀反应制备了ＷＡ／ＡＣ一Ａｇｇｌ复合纳米粒子。Ｙｕ等利用化学沉积光还原法合成出Ａｇ＠ｇＣｌ／ｒＧＯ表面等离＾子光催化剂，并探讨了其在光催化降解过程中的使用可能性与局限性。直接沉淀法虽然反应过程简单，但是很难控制粒径的大小和均匀性，需要与其它合成方法结合使用。１．５．１．５氧化法在诸多制备银／面化银的方法中，通常可Ｗ利用银的弱还原性来获得Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子。Ｘｕ等首次通过ＦｅＣｋ液体氧化法将Ａｇ负载在Ａｇ＠ＡｇＣｌ表面合成ＡＡＣ－ｇ＠ｇｌ核壳结构，并通过观察甲基澄和四氯苯酌在可见光照射下的降解效果探究了其光催化活性的强弱。Ｌｉ等首先利巧Ａｇ２〇Ａｌ８〇作为银源，形成多孔纳米银，然后Ｗ战化和ＨＣ１作为氧化剂和氯源，盾（Ｉ烈揽拌后制得多孔ＡｇＣｌ／Ａｇ纳米粒子。此法王艺简单，产率高，但是获得的纳米复合材料易团聚，稳定性差。－３－ 东北林业大学硕±学位论文１．５．１．６水热溶剂法所谓水热溶剂法是指在密封亟力容器（髙压蓋）中，水或者有机溶剂作为反应溶剂，在高温高压下发生化学反应，该类方法获得的纳米粒子具有物相均匀、纯度商、分一ＰＷＰ９散性好的特点Ｈａｎ：！二氯甲烧为，是制备各种无机纳米材料的有效方法之。等利用＋氯源通过水热溶剂法合成ＡｇＣｌ，经偏巧照射后使部分Ａｇ转变为Ａｇ从而制备出Ａ＾ｇ／ＡｇＣｌ纳米复合材料。Ｓｕｎ等化ＷＣ１６作为反应前躯体，环己醇作为有机溶剂，成功合成出ＷＡｇ／ＡｇＣｌ负载的Ｗｉ８〇４９納米棒。Ｌｉａ〇等通过简单的水热法制备了也形Ａｇ＠ＡｇＣｌ纳米晶体Ｗ及也形和立方形貌的Ａｇ＠ＡｇＣｌ泥合纳米晶体，通过甲基搭的降解对比实验证实也形Ａｇ＠ＡｇＣｌ纳米晶体比也形和立方混合纳米晶体表现出更强的可见光催化性能。１．５．２生物法一＂＂近几年来，生物合成纳米材料作为种绿色合成方法已经引起了研究者的广泛关注。生物合成主要是利用生物分子、微生物、植物及其提取物的还原特性参与纳米材料的合成，具有原料来源广，反应条件温和，产物纳米颗粒分布均匀，不易团聚及合成体系不需添加有毒化学试剂等优点生物合成法所采用的生物材料主要包括微生物如细菌、真菌和植物及其提取物等。１．５．２．１细菌细菌是结构简单的原核生物，，，种类繁多，来源广泛便于进行基因工程操作有利于合成多种多样的纳米材料。迄今为止，细菌可合成的纳米材料有金扇单质（Ａｕ，Ａｇ，巧，Ｐｄ），金属合金（Ａｇ／Ａｕ，Ａｇ／ＡｇＣｌ），氧化物（ＺｎＯ，Ｔｉ〇２，Ｓｉ〇２，Ｆｅ］〇４），硫化物脚＇＋（ＣＭＳ，ＺｎＳ，ＰｂＳ）等。１９９９年口ａｕｓ等从银矿中分离到株能在含有５０ｍｍｏ化Ａｇ＞ｍ的培养基中生长的施氏假单胞菌／ｓ／ｚｅｎＡＧ２巧，培养４８ｈ后发现菌体在周质空间积（）累了大量的银纳米粒子，粒径从几纳米到几百纳米不等，他们认为这些纳米粒子的产生是菌体耐受银离子杀伤作用的结果，银纳米粒子粒度的不同，可能是由于菌体细胞培养和生物还原条件的差异造成的。自从Ｋｌａｕｓ利用施氏假单胞菌合成银纳米粒子Ｗ来，细苗介导纳米材料制备法受到了广泛的重视。Ｓｏｕｔｈａｍ等通过研究证实枯罕杆菌公．（？ｗＡ＂似菌株与氯金酸溶液共解育后，在菌体细胞壁和周质空间内可合成粒径分布在）’’？ｎｍ的Ａｕ纳５２５米粒子。Ｈｅ等研究发现芙膜红假单胞菌脚ｅ化／ｏｗｏｎ化ｓ能够通过控制培养基中的ｐＨ值合成不同大小和形状的Ａｕ纳米粒子。除了合成银纳米粒子和金纳米粒子外，细菌还被开发制备不同种类的金属纳米复合材料。Ｎａｉｒ和Ｐｒａｄｅｅｐ等利用从牛奶中分离巧来的普通乳酸菌菌株制备出Ａｇ，Ａｕ和不同类型的Ａｇ／Ａｕ合金，他们认为乳酸菌上的蛋白质与银纳米晶结合形成银颗粒，银＋颗粒不断增长降低了银纳米粒子的比表面积，导致Ａｇ对乳酸杆菌的毒害降低，从而使乳酸巧菌源源不断地生成银纳米粒子。刘闯利用醋酸杆菌菌体与１００ｍＬ１０ｍｍｏｌ／Ｌ？硝酸银溶液混合培养４８７２ｈ．／八（：１，用０２２微孔滤膜除茵，获得了纯度较好的人３３－４－ １绪论复合纳米粒子。ＴＥＭ图片显示醋酸杆菌合成的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子为类球形且均匀分散在溶剂中，ＨＲＴＥＭ图片中可看到纳米粒子的晶格间距为０．２７１ｎｍ，对应于ＡｇＣｌ的（２００）晶面，同时发现有的纳米粒子的晶格间距为０．２３２ｎｍ，证明了合成的纳米粒子中既有ＡｇＣｌ纳米粒子又有Ａｇ纳米粒子。１．５．２．２ＭＭ最近的研究表明真茵具有合成纳米复合材料的能力。真菌具有比细菌更加复杂的生理系统，可分泌大量的酶，而且实验室处理更为简单。Ｍｕｋｈｅｉｊｅｅ等首先利用轮枝抱苗似格曲細削［］（ｓｐ．）合成了Ａｇ和Ａｕ纳米粒子。他们对不同种类的微生物进行筛选，发’ＳＭｔＷ现尖抱嫌刀茵（ＦＭｉｎＭＷ０ＷＭＷ可Ｗ在胞外合成Ａｕ、Ａ粒子。巧巧）ｇ和合金等金属纳米此后，研究者开始尝试利用不同种类真菌制备金属纳米复合材料。化Ｖｉｇｎｅｓｈｗａｒａｎ等ＰＵ利用黄曲霉ｅｒ，经过７２ｈ心侃和硝酸银溶液共同培养，在黄曲霉的细（ｐｇ胞壁上发现直径约为８．９２±１．６１ｎｍ左右的Ａｇ和ＡｇＣｌ纳米粒子，红外分析表明蛋白质２＾１附着在纳米粒子的表面，起到防止纳米粒子聚集的作用。李广泉利用±曲霉的二次发°酵液与１０ｍｍｏｌ／Ｌ的硝酸银溶液按照９：１的比例混合，于２５Ｃ避光反应４ｈ，最终获得１？了粒径分布在２０ｎｍ的Ａｇ纳米粒子。ＸＲＤ图谱上可观察到ＡｇＣｌ的吸收峰，证ｉＨ体实发酵液中同时生成了ＡｇＣｌ纳米粒子。１点２．３植物Ｋ＂－除了微生物外，植物也可ｙ？被用来合成纳米复合材料。ＧａｒｄｅａＴｏｒｒｅｓｄｅｙ等从植物采矿（如卿ＷＷ切ｇ）角度出发首次报道了利用紫花首精（０［诉／／ａ）种子制备Ａｕ／Ａｇ纳米粒子．，开创了植物介导的纳米材料制备法。ＶＧｏｉｎａｔｈ等吏用方茎青紫葛（Ｏｍｗｐｗａ－ｇｃ／ｒａｎｇＭ／ｏｚ的的叶片浸化物与１ｍｍｏｌ／Ｌ硝酸银溶液在室温、黑暗条件下共同赠育，合？１５２３ｎｍ的Ａｌ纳米粒子，反应过程中同时产生了Ａ纳米粒子成了粒径分布在ｇＣｇ。ＭＶｉｌｌ．ａｎｕｅｖａ等啼」用玉米叶提取物绿色合成ＡｇＣ］纳米粒子和Ａｇ纳米粒子，ＸＲＤ分析验证氯化银纳米粒子和银纳米粒子的巧在，ＴＥＭ分析表明合成的纳米粒子平均粒径为２０ｎｍ，红外光谱表明，玉米叶片里的植物化学物质与纳米粒子的还原和稳定有关。此外■，他们还发现提取液的体积和Ｈ值对纳米粒子的合成有很大影响ｐ。１．６研究的目的与意义，环境污染问题愈发严重，随着全球化进程的快速发展，保护和改善生态环境实现人类社会的可持续发展已成为人类面临的紧迫而艰巨的任务。半导体光催化材料具有催化氧化还原反应的能力，能够有效氧化分解有机汚染物、还原重金属离子，常巧于处理ｐｅｌ废水、废气中有机污染物。在不同的半导体光催化材料中，二氧化铁由于良好的光学ｐｗｇｉ一和电子特性己彼广泛研究。然而，二氧化铁是种宽带隙半导体材料，只能吸收紫ｔｗ－－，外光导致太阳光谱利用率低。因此，寻找到种具有高催化活性的新型可见光催化剂成为一项重要的研究课题。－５－？ 东北林业大学硕±学位论文最近的研究表明，Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子由于其独特的表面等离子共振（Ｓｕｒｆａｃｅｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｏｎａｎｃｅ，ＳＰＲ）效应，具有优异的可见光催化性能，可用作高效可见光催化Ｍ’ｆＷ剂。目前，国内外科研工作者己采用多种方法成功制备出Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子。＋其中，常用的制备方法为化学法，但是化学法合成过程中Ａｇ与ｃｒ的反应速度很难控制，并且使用的化学试剂易对环境造成污染。而生物法制备金属复合纳米材料具有操作一简单、反应温和、绿色环保、原材料丰富等特点，并且合成的纳米粒子形状均，粒径小，稳定性好。文献中曾报道利用细菌、真苗和植物合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子。然而，关于厌氧菌合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的研究尚未见报道，因此本课题的提出对实现生物法合成Ａｇ／ＡｇＣｌ纳米复合材料具有重要指导作用。１．７课题的研究内容本研究利用硝酸银浓度梯度法从大庆油田采油厂水处理站的含油污水样品中筛选出耐银的厌氧菌菌株，通过形态观察、生理生化实验及分子生物学手段鉴定得到的厌氧菌茵株；利用耐银厌氧菌菌株与硝酸银溶液混合培养合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子，运用紫－ｖＸＲＤ外全波长扫描（ＵＶｉｓ）、Ｘ射线衍射、透射电子显微镜（ＴＥＭ）及高分辨透射电子显（）微镜（ＨＲＴＥＭ）、傅里叶红外分析（ＦＴＩＲ）等表征方法对产生的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子进行Ａ－分析，Ａ／Ｃｌ复合纳米粒子的理化性质ＵＶｖｉｓ手段对巧究ｇｇ；通过紫外全波长扫描（）通过聚丙帰醜氨凝胶电泳－Ａ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的合成条件进行探究ＳＤＳＰＡＧｇ；（巧技术，Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的合成机理ＩＶ的，探讨；Ｗ甲基澄（）染料作为实验对象评价ＡＡ－／Ｃｌ复合纳米粒子的光催化。具体的试验流程见图１。ｇｇ降解能力１本研究方法可为绿色环保的金属纳米复合材料制备提供科学依据，为纳米生物合成技术探索新的发展方向，并为新型高效光催化剂的应用积累经验。采集灿田水样Ｘ菌种富集ｒ耐银菌株筛选Ｉ￣＊—的菌株￣Ｉ巧得目；菌鉴定１ｈＨＡｇｌ立子的合成及表征／ＡｇＣ复合纳米＾１￣￣￣＋ｊ－ｉ茵种１Ｉ保存ｆｊ生合合形下ｆ萍聖理．ｉ成成没掌生物条机巧命化１件理结疯覺实擎硏拇石杆—驗究讨Ｉ窒國Ｍ具体实验流轉閣－Ｆｉｇ．１１化己ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｆｌｏｗｃｈａｒｔ－６－？ ２耐银厌氧菌的筛选与鉴定２耐银厌氧菌的筛选与鉴定２．１实验材料２．１．１样品来源本研究中用于筛选耐银厌氧菌的环境样品取自大庆油田采油厂的水处理站。２．１．２实验仪器２－表Ｉ实验仪器－Ｔａｂｌｅ１２Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｐｐａｒａｔｕｓ仪器名称仪器型号及厂家电子天平ＰＬ２０２－Ｌ姊阳龙腾电子有限公司）ＹＱＸ－Ｉ厌氧培养箱Ｉ上海新苗医疗器械有限公司（）－旋渦振窝器化９０１海口其林贝尔仪器有限公司）（电热恒湿水浴锅ＤＫ－８Ｄ上海森新实验仪器有限公司（）ＴＥ２０００－ＳＮ光学显微镜ＩＫＯＮｅｃｌｉｓ（ｐ句透射电子显微镜Ｈ３６００Ａ（ＨｌＴＡＣｆｌ）ＰＣＲ扩增仪ＧｅｎｅＡｍｐ９７００读国应用生物系统中国公奇）一稳压稳流电泳仪ＤＹＹ－８Ｂ北京六仪器广（）全自动凝胶成像系统Ｓｙｎｇｅｎｅ，Ｇ削ｅＧ州山Ｓ（ＵＳＡ）超净工作台ＦｒｏｍａＳｃｉｅｎｔ出ｃｌ８２９（上海森信仪器有限公司）ＭＬＳ－３０３２ＳＡＮＹＯＪａａｎ高圧蒸汽灭菌锅，（叩）、ｈ１民Ｘｒｍ高速冷冻离也机ｉｍａｃＣＦ６正ｐｐｅｎｄｏｆＧｅａｎｙ（）、Ｅ５４１７ＲｄｏｆＧｅｎｎａｎ小型台式离也机，ｐｐｅｎ（ｙ）高纯氮气罐哈尔滨卿华；１：：业气体有限公巧ＨＰＨＳ－２５±海精密仪器有暇公司ｐ计（）ＦＭ－制冰机ｌ２０ＤＨＯＳＨＩＺＡＫｎ，Ｋｈｐａ）－４（ＴＣ超低溫冰箱ＳＡＮＹＯ２．１．３主要生化试剂２－２本研究所用的主要生化试剂如表所示：表２－２本研究所Ｗ的主要生化试剂－ｈｅｍａｈＴａｂｌｅ２２ｔｉｎｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｒｅａｇｅｎｔｓｉｎｔｉｓｓｔｕｄｙ￣名称生产公司细茵ＤＮＡ小量提取试剂盆全式金生物工程有限公司凝胶Ｎ收试剂痛北京庄盟生物科技有恨公司ＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ北巧ＴＩＡＮＧＥＮ公巧ｄＮＴＰｓ北巧ＴＩＡＮＧＥＮ公司ＤＮＡＭａｒｋｅｒ北京ＴＩＡＮＧＥＮ公司ｘｌＯＰＣＲＢｕｆｆｅｒａＲａ大连化Ｋ公司６ＸＬｏａｄｉｎｂｕｆｆｅｒａＲａｇ大连化Ｋ公司－ＫＭＤ１８Ｔ载体大连ＴａａＲａ公巧ｐ＇Ｅ－５ａＲ．ｃｏｌｉＤＨ大连ＴａＫａａ公司Ａｍ、Ｘ－ＩＰＴＧＳｐｇａｌ、ｉｇｍａ公司硝酸银（ＡｇＮ化）天萍科密欧化学试剂有限公司－７－ 东北林业大学硕王学位论文么１．４实验试剂配制１硝酸银溶液；称取８．５硝酸银溶于５００ｍＬ去离子水中Ｉ配置成０．１ｍｏｌ／Ｌ的母液，（）ｇ使用前需稀释成不同的浓度并过滤除菌。２５〇ｘＴＡＥｓ－电泳：称取９７．６Ｔｒｉ和１４．９ＤＴＡＮａ２＾Ｈ２〇与２２．９ｍＬ冰乙酸混（）缓冲液ｇｇＥ合，加入蒸馈水定容至５００ｍＬ。（３）＾ＴＡＥ电泳缓冲液：将５〇ｘＴＡＥ电泳缓冲液稀释５０倍。６［习４Ａｍ－（）ｌ００ｍ／ｍＬ、Ｘａｌ２０ｍ／ｍＬ日ＩＰＴＧ２０ｍ／ｍＬ：配。ｐ（＾ｇ）ｇ（ｇ巧（ｇ）制方法见文献５染色液和试剂：革兰氏染色液、芽抱染色液、Ｌｅｉｆｓｏｎ鞭毛染色液、甲基红染色剂、（）Ｖ－６％％漠伏普（巧试剂、接触酶反应试剂、嘲巧反应试剂、１．漠甲龄紫乙醇溶液和１香草Ｍｌｔ酪蓝溶液的配制方法见《微生物学实验》。２．１．５实验培养基及配制－１富集培养基良ＰＲＡＳ培养基，其配制方法如下．０，ＭＮ〇３６Ｈ〇（）喊）；＆册〇４１ｇｇ（）２２２．０ｇ，ＮＨ４ＮＯ３１．０ｇ，Ｎａ２ＨＰ〇４２．０ｇ，酵母膏２．０ｇ，蛋白腺５．０ｇ，蒸馈水１０００ｍＬ，调节ｐＨ值为７．８，加入２％刃天青溶液（还原指示剂）５００阵，培养基煮沸后，通入高纯氮气驱氧３０ｍｉｎ，１２１ｔ高压灭茵１５ｍｉｎ。固体培，加入以半化氨盐酸盐征原齐！０．５１）ｇ养基为上述液体培养基中加入２％的琼脂。巧筛选培养基：在上述改良的ＰＲＡＳ培养基中加入不同浓度的ＡｇＮ〇３溶液。（３）生理生化实验培养基：葡萄搪培养基、薦糖培养基、蛋白腺培养基、葡萄糖蛋白膝培养基、明胶培养基、淀粉培养基、巧樣酸盐培养基和苯丙氨酸培养基的配制参照《微生６６［］物学实验》。乳酸钢、甲酸納和苹果酸培养基的配制方法是利用乳酸钢、甲酸钢或苹果酸替代改良ＰＲＡＳ培养基中的原有碳源，其它药品成分不变。２．２实验方法２．２．１耐银厌氧菌的筛选用水样取样器在大化油田水处理站取１０ｍＬ含油污水样品立即装入１００ｍＬ螺口密５１封厌氧瓶内，在震荡器ｈ／允分源匀，逐级进行０倍系列稀释至（Ｔ，制成不同浓度的１ｊ胃４—５样品稀释液。取ｌ〇、１〇和１０样品稀釋液各ＩｍＬ接种于含有固体富集培养基的厌氧＂＂管中进行滚管培养，挑取生长较好的菌落到液体富集培养基中富集和活化。当富集培养液变浑浊后，向其中加入ＡｇＮ〇３溶液，使得ＡｇＮ〇３溶液的终浓度为化１ｍｍｏｌ化，避化培养２ｄ，取５ｍＬ上述培养液接种于１００ｍＬＡｇＮ〇３终浓度为０．２ｍｍｏｌ／Ｌ的液体筛选￣培养基中避光培养，，Ｌｈ．，维续避光培养２３ｄ待其长出少量菌体时再取５ｍ述培养液接种于１００ｍＬＡｇＮ〇３终浓度为０．３ｍｍｏｌ／Ｌ的液体筛选培养基中避光培养。采用相同方ｍｍｏ．法逐步提高ＡＮ〇浓度０．５ｍｍｏｌ／Ｌ、０．７ｌ／Ｌ、１０ｍｍｏＶＬ、１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、２．０ｇ３ｍｍｏｌ／Ｌ，进行耐银菌株筛选并对菌株驯化。取２ｍＬ经２．０ｍｍｏｌ／ＬＡｇＮ〇３驯化的培养液涂布于固体夹层平板进行浓度梯度稀释划线分离，最终得到１株能在含有２．０ｍｍｏｌ／Ｌ－８－ ２耐巧厌氧茜的筛选与验定＋Ａｇ的改良ＰＲＡＳ培养基中存活的耐银厌氧菌茵株。将筛选出的菌株置于加有液体石蜡°的改良ＰＲＡＳ培养基中进行保藏－，保藏湿度为４０Ｃ。么么２茵株的形态学观察用无茵注射器吸取１ｍＬ对数生长期菌液涂在载玻片上，采用常规染色方法对菌株ｗｘＯ２０００－Ｓ型光学显微ｌ进行简单染色、革兰氏染色和芽袍染色，在ＴＥ镜下观察菌体的形状、革兰氏染色和芽抱染色情况Ｗ及运动特征。另取适量对数生长期新鲜菌液在４０００ｒｍ下ｍｉｎＡＣＨＩｐ离也１０，收集菌体，利用透射电子显微镜（Ｈ３６００Ａ，ＨＩＴ观察菌体的显）微形态。么么３生理生化特性研究－Ｐ试验甲基红试验、Ｖ、嘲巧反应、接触酶试验、淀粉水解试验、明胶液化试验、梓樣酸盐试验、硝酸盐还原试验、苯丙氨酸脱氨酶试验，乳酸钢、甲酸钢、苹果酸、葡萄糖和藤糖利用试验参照文献的方法进行。么么４分子生物学鉴定２．２．４．１沒ＤＮＡ提取将筛选得到的耐银厌氧菌菌株在厌氧条件下接种至００ｍＬ，３７ｔ１的液体培养基中培养２４ｈ，使菌体活化，采用细菌基因组ＤＮＡ小量提取试剂盒（全式金生物王程有限公司）提取其总ＤＮＡ，利用化８％琼脂糖凝胶电泳检测提取总ＤＮＡ的质量。提取的基因组总°ＤＮＡ保存在－２０Ｃ冰箱备用。么２．４．２ＰＣＲ护増１６ＳｒＤＮＡＷ基因组ＤＮＡ为模板，选用细茵通用引物在ＧｅｎｅＡｍｐ９７００型ＰＣＲ仪读国应用生＇＇－－物系统中国公司）＞．进行ＰＣＲ扩增，２７Ｆ：５ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ３和１４犯＇＇Ｒ－－：５ＧＧＴＴＡＣＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ３１６ＳｒＤＮＡ序列的引物，ｈ工程有限作为由．海生物°’－２ｉ公司合成。ＰＣ民反应体系３，ＰＣＲ扩增程序９４Ｃ预热３ｍｎ９４Ｃ变性２见表：，（）°°°ｍ，６，２ｍ，，ｎ，ｉｎ５Ｃ复性１ｍｉｎ７２Ｃ延伸ｉｎ倆环次数为３０次最后７２Ｃ延伸８ｍｉ４’Ｃ保巧。然后取３ｉＬ８％＿扩增产物进行０．琼脂糖凝胶电泳检测。｜２－３表ＰＣＲ反应体系（２〇ｌＬ＾）Ｔ－ａｂｌｅ２３化ｅｓｙｓｔｅｍｏｆＰＣ民ｒｅａｃｔｉｏｎ反应液体巧￣ｘＰ２ＬｌＯＣＲｂｕｆｆｅｒ含１５ｍｍｏｌ／ＬＭＣｂ．０．ｌ（ｇ））－ｉｄＮＴＰ＇ｓｌＯｍｍｏｌＬ２．０（）－ｉ．．０ｌ上游引卿１〇ｍｏＬ１ｌｐｎ）Ｍ－ｉ．１．－Ｌ下游引物（１０ｍｏｌｎＬ０Ｍｐ）ＤＮＡＭ板１＾Ｌ．０ＩＴａ５Ｕ０．４ｉＬｑ酶（／ｘＬ＾ｊ）ｄｄＨ〇１２．６Ｌ２ｎ－９－？ 东北林业大学硕±学位论文２．２．４．ＳＰＣＲ扩増目的片段的纯化ＰＣＲ化８％扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后，在紫外灯光下切下含有目的条带的胶块装入１．５ｍＬ的邸管中，采用ＤＮＡ琼脂糖凝胶回收试剂念（北京庄盟国际生物基因．。有限公司）回收目的片段，取３阵回收产物用１０％琼脂糖凝胶电泳进斤检测２．２．４．４目的片段的克隆测序与系统进化树的构建ＭＤ－－按照Ｐ１８Ｔ载体试剂盒（大连ＴａＫａＲａ公司）的说明将ＰＣＲ纯化产物与ＰＭＤ１８Ｔ－４。载体连接，连接反应体系（１０ｍＬ）（见表２）表２－４连接反应体系０（１阵）Ｔａｂ－ｌｅ２４Ｌ巧ａｔｉｏｎ＂ａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ＇姐分体积－ｒＭＤ１８Ｔｖｅｃｔｏ１ｘＬｐ｜胶回收产物４叫＾Ｓｏｌｕｔｉｏｎ１５ｐＬ－ａ中－将连接产物转入Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５，转化菌液涂布于ＷＡｍｐ，Ｘｇａｌ，ＩＰＴＧ为抗性的的平板上进行ａ－互补蓝白斑筛选克隆子。挑取白斑茜落进行摇菌后，取茵液作为模板直。接进行ＰＣＲ反应，Ｗ消除假阳性结果。将阳性克隆子送到华大基因公司进行测序将所测得的序列与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中己登录的序列进行ＢＬＡＳＴ同源性序列比对，从数据库中得到相关种属１６ＳｒＤＮＡ序列信息，利用ＭＥＧＡ５．２进行系统发育分析并构建系统进化树。２．２．５生长特性硏究２．２．５．１生长曲线的测定将保藏的菌种按接种量１０％分别接种到各组平行的初始ｐＨ７．８的液体培养基中，‘一Ｃ一３７，，置于温度厌氧箱内培养，接入茜第天每６ｈ取次样其后不定时取样用紫外分光光度计测茵体在６００ｎｍ处的ＯＤ值。（液体筛选培养基作为空白对照）。重复３次取平均值。２．２．Ｓ．２温度对菌株生长的影响将保藏的菌种按接种量１０％分别接种到各组平行的初始Ｈ７乂的液体培养基中，ｐ’‘°’°°分别置于１５Ｃ、２０Ｃ、２５Ｔ：、３０Ｃ、３５Ｃ、４０Ｃ、４５及５０Ｃ的恒厌氧箱内培养４ｄ，然后取出用紫外分光光度计测菌体在６００ｎｍ处的ＯＤ值。液体筛选培养（基作为空白对照）。实验重复３次，取平均值。２．２．Ｓ．３培养基初始ｐＨ对菌株生长的影响将保藏的菌种按接种量１〇％分别接种到初始值分別为３．０、４．０、５．０、６．０、°一７．０、８．０的液体培养基中，置于温度３７Ｃ厌氧箱内培养，从接入菌开始毎隔２４１１取次样，用紫外分光光度计测菌体在６００ｎｍ处的ＯＤ值。液体筛选培养基作为空白对（照）。重复３次，取平均值，实验周期为１０ｄ。－－ｉＯ ２耐ｉｆｌ＂天说巧的筛选ｊ轮化２．３结果与分析２．３．１耐很厌氧菌的筛选经过对大庆油円水处理站的含油污水样品中菌群的富集，并利用抓酸银浓度梯度化＋一筛选出株长势较好的厌氧菌菌株，将其命名为ｗｘｚＯｌ。由于Ａｇ对大多数细茵足巧靑＋＋的，筛选菌株时在培养基中添加Ａｇ可抑制多数细菌的生长，耐受Ａｇ的细菌被富集，这样可Ｗ达到获得耐银菌株的目的。２．３．２形态及生理生化特性前株ｗｘｚＯｌ在厌氧巧内培养５ｄ后的菌落多为楠圆形，黑色，半透明，边缘整齐，一表面光滑。接触空气－段时间后，菌落变成白色，菌体大部分死亡。ＴＥ２０００Ｓ型光学－显微镜观察显示菌株ｗｘｚＯｌ２１革兰氏染色反应呈现淡红色，为阴性结果（见图。透射）Ｈ３Ａ？电子显微镜６００，ＨＩＴＡＣＨＩｘｚＯｌ为短巧茜，１１观察显示菌株ｗ长度为．０．６（）ｘ？－１０，２阳．２０．８牌１无芽化，能运动（见图２。）ｆ。ｉ去？Ｈ．？々、ｉ？、？ｔ’ｆ‘电＇？？＞？Ｉ—ｉ２－ｘ國１菌株ｗｘｚＯｌ的革兰氏染色结果ｌＯＯＯ（）Ｆ－ｎｉ．２１ＧｒａｍｓａｏｆｒａｎｘｚＯｌｇｔｉｓｔｉｗ％０．２ｕｍ－ｗｘＸ圍２２菌株ｚＯｌ的透射电镜圈２００００（）Ｆ－２ｉｇ．２ＴＥＭｉｍａｇｅｏｆｓｔｒａｉｎｗｘｚＯｌ－１１－ 东北林业大学硕＋学位论文ｚＯ－菌株ｗｘｌ的生理生化時性测定结果见表２５，这株厌氧菌能在Ｗ蛋白腺、孰酸钢、甲酸钢，、苹果酸、葡萄糖、薦糖和酵母膏为碳源Ｗ硝酸盐为氮源的培养基上生－长，Ｖ，，。甲基红和吗峨试验为阳性Ｐ试验阴性明胶液化阳性淀粉水解阴化贿酸瑞■还原试验阳性，仔樣酸盐试验阴性，不产接触酶和苯丙氨酸脱氨酶。参照《伯杰氏细菌ｌ鉴定手册》，Ｗ上生理生化特征与梭菌科的理化特征最为接近，初步鉴定菌株ｗｘｚＯ属于梭茜科表２－５菌株ｗｘｚＯｌ的生理生化特征Ｔｌ２－５ＢｉｏｃｈｅｍａｂｅｉｃａｌａｎｄｈｓｉｏｌｏｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｓｔｒｉｎｗｘｚＯｌａｐｙｇ￣试验项日阳＋／－试验项目阳朋性＋／／阴性（）（子￣甲基红试遊＋苯丙氨酸脱氨酶－－＋伏谱－（Ｖ巧试验蛋白腺嘲採试验＋现酸铜＋明胶液化试验＋甲酸钢＋淀粉水解试验－苹果酸＋接触酶－葡萄糖＋硝酸盐还原试验＋庶糖＋－＋梓樣酸盐试验酵巧膏２．．３３分子生物学鉴定菌株ｗｘｚＯ－３ｌ的总ＤＮＡ提取结果见图２，由电泳图可见基因组ＤＮＡ片段完整且无２－断裂，Ｗ其作为下步ＰＣＲ反应模板扩增ｗｘｚＯｌ菌株１６ＳｒＤＮＡ基因，扩增结果见图４。从图中可看出，ＰＣ艮扩增出的目的基因条带清晰明亮，无弥散和非特异性扩增，扩増片段长度为１３９０ｂｐ。Ｍｌ２３４ｍｍｊ２－－閣３ｗｘｚＯｌ；Ｍａｒｋｅｒ１４ｘｚＯｌ菌株总核酸电泳團（Ｍ；泳道：菌株ｗ的总核酸）－－Ｆ．２３ＴｏｔａｌＤＮＡｏｓｔｒａｘｚＯｌＭｅｒ１：ＴａｌｎｕｃｅｃａｃｏｆｓｔｒａｎｗｘｚＯｌｉｇｆｉｎｗ：ＤＮＡＭａｒｋ４ｏｔｌｉｉｄｉ（；）－－１２ ＇２耐银Ｉ义柏菌的筛选与賠定１２３Ｍｍ２０００ｂ＾ｐｌＯＯＯｂｐ７Ｓ０ｂｐ５００ｂｐ１＾２００ｂｐｂＨ－Ｍ図２４茜株ｗｘｚＯｌ的１６ＳｒＤＮＡＰＣＲ屯泳凶：ＭａｋｅｒＫ２、３ＰＣ民产物（；均为）Ｆ－－ｉ．２４１６ＳｒＤＮＡＰＣＲｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓｈａｉｎｗｘｚ０１Ｍ：ＤＮＡＭａｒｋｅｒ１３：ＰＣＲｒｏｄｕｃｔｓｇ（；ｐ）菌株ｗｘｚＯｌ的１６Ｓ瓜ＮＡ测序结萊如下：１ｇｔｃ呂ａ客ｃｇｇｔｃｔａａ客ｔａａｇｃａａｃｃｔａｇｔｔｇａａｔａｃｔｔａｇ过ｔａｇｃｇｇｃｇｇａｃｇｇｇｔｇａｇ卡ａ６１ａｃｃｔａａｃｃｔｃｒｉｔｉｔａａａｔａｃｃｔｃａａａｃｃａｔｔａａｔａｃｃｃｇｇｇｇ呂呂ｇ：ｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇ１２１ａｔｇ过ａｇｃｔｇａａａｔａｃｃｇｃａｔｇｇｔａａｔｔｇａｇｃｃａａａｇｃｇａｇａａａｇｃｇｃｔａｃａａｇａｔｇｇｃｃｃｃｃｔｃｃｃａｔａｃｔａｔａａｔａａｃａｃｔｃａｃｃａａｃａａｃａｔｔａｃｃａｃ１８１ｇｇｔｇｇｔｔｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇ２４１ｃ十ｇａｇａｇｇｇ卡ｇａｔｃｇｇｃｃａｃａｔｔｇｇｇａｃｔｇａｇａｃａｃｇｇｃｃｃａａａｃ十ｃｃｔａｃｇｇｇａｇｇｃａｇ３０１ｃａｇｔｇｇｇｇａａｔａｔｔｇｃｇｃａａｔｇｇ客ｇｇａａａｃｃｃｔｇａｃｇｃａｇｃａａｃｇｃｃｇｃｇ１：貪ａｇｃｇａａｇａ３目１ａｇｇｃｃｔ卡ｅｇｇｇｔｅｇｔａａａｇｅｔｃｔｇｔｇａｔａａｇｇｇａａｇａａｇａａｇｔ呂ａｃａｇｔａｃｃ十十ａａｇａｇｇ４２１ａａｇｃｃｃｃｇｇｃｔａａｃｔａｃｇｔｇｃｃａｇｃａｇｃｃｇｅｇｇｔａａｔａｅｇｔａｇｇｇｇｇｃｇａｇｃｇｔｔｇｔｃｃｇ＂４８１ａａｔｔａｃｔｃｔａａａｔｃｔａｃｃｃａａａｔａａｔｃａｉｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇａｔｇｉｇａａａｇｔｃｃａａｇｇ５４１ｃｔｔａａｃｃａｔｇｇａａｔｔｇｅａｔｔｔｇａａａｃｔｇｔａｔｇｇｅｔｔｇａｇｔｇｃａｇｇａｇａ各ｇａｇａｇｅｇｇａａｔ６０１ｔｅｅ卡ａｔｔａｃｔａａ：立十ａｃａａｃｃｃｇｇｇｇｇｇ－ｇｅｇｔａｇｇａｔ卡ａｇｇａａｇａａｃａｃｃａｇｔｇｇｇｇｇｇｇｔ６目１ｔｃｉｉｇｇａｃｔｇｔａａｃ卡ｇａｅｇｅｔｇａｇｇｅａｅｇａａａ呂ｃｇｔｇｇｇｔａｇｃ宜ａａｃａｇｇａｔｔａｇａｔ过ｃｃｃ了２１ｔｇｇ卡ａｇｔｃｃａｃ客ｃｃ星ｔａａａｃｇａｔｇａｇｔｇｅｔａｇｇｔｇｔｃ吕舍ｇａｇｇａａｔｅｔｅｇｇｔｇｅｅｇｇａｇｔ７Ｓ１ｔａａｃａｃａａｔａａｃａｃｔｃｃｃｃｔａａｃａｃｃｃａａｉｃａａ互ａａｔｔｇｇｇｇｇｇｇｔｇｇｇ：ｇｔｔａａａａｃｉｇｇｇ８４１ａｃ呂ｇｇｇ另ｃｃｃｇｃａｃａａｇｅａｇｅｇｇａｇｅａｔｇｔｇｇｔｔｔａａｔｔｃｇａａｇｃａａｃｇｃｇａａｇａａｃｅｔｔ９■０１ａｃｃａｇｇｇｅｔｉ；ｇａｃａｔｃｃｃｔｔｇａｃａａｃｃｔａａｇａｇａｔｔａｇｓａｔｔｃｔｃｔｔａｔａｃａｃａａｇ呂ｇｇｇ９艮１吕ｇａｇａｃａｓｇｔｇｇｔｇｃａｔｇｇｔｔ呂ｔｃ呂ｔｃ互吕：ｃｔｃｓｔｇｔｃｇｔｇａｇａｔｇｌｔ呂ｇ呂ｔｔａａｇｔｃｃｃｇ１０２１ｃａａｃａｃｃａａｃｃｅｔｔａｔａｔｔｔａｔｔｃｃａｃａａｔａａａｔｔｃａｃｔｃｔａａａｔａａｃｇｇｇｇｇｇｇ呂ｇｇｇｇ卡ｅｅｅａａａａｔｅａａａｔｔａｅｔｅ过ａａｔｃａｉｉｃａｔｃｃｃｃｔｔａｔｃｃｃ１０８１ｇｇｇ吕ｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇｇａｇｇｇｇｔｃｔａｃａｃａｃｃｔａｃａａｃａａａａ过ｃａａａａａｔｅａｃ１１４１ｇｇ客ｇｔｇ：ａｔ音ｇｔｃｔｇｔ百言宮ｇｇｇｇｔｇｔ呂＾＾ｇｉ１２０１ａａｔｃｃｃａａａａａｇｃａｇａｔｃｉｃａｇｔｔｃｇｇａｔｔｇｃａｇｇｅｔｇｃａａｃｔｃｇｃｃｔｇｃａｔｇａａｇｇａｇｇ１２目１ａｔｔｃｉｉａｔａａｔｅｅａｔｃａａｔｅｅｅｔａａｔａｃｔｔｃｃｃｃｃｉ：十ｔａｃａｃａｇｇ呂ｇｇｇｇａｇｇｇ邑ｇ吕ｇｇｇｇ１３２１ｃｃｇｃｃｃｇｔｃａｃａｃｃａｃｇａｇａｇｔｔａｇｃａａｃａｃｃｃｇａａｇｔｃａｇｔｇａｇｃｃａａｃｃｔ立ｇａａａｔａｇｉ１３８１ａｅａｃｒｇｇｇ夏ｇ该菌株的１６Ｓ瓜ＮＡ序列在ＧｅｎＢａｎｋ的登记注册号为ＫＭ０４４２６４，将获得的序列利‘用良ＬＡＳＴ进行同源性分析，发现簡株ｗｘｚＯｌ与梭簡科Ｇ幻ｒａｅ／／（ｖ属中的Ｇｃｒｃ／ｃ／／ａｓｐ．－ＥＭＺＹｌＧｅｎＢａｎｋ注册号ＥＧＡ．２：ＥＵ２巧３６７同源性最高（９９％。通过Ｍ５软件构建系统（））２－５，进化树（见图，结合其形态整定及生理生化实验结果确定该菌属于梭茜科中的）Ｇ幻ｎ：／ｅ／／ａ属，并命名为Ｇａ化如／／口ｓｐ．ｗｘｚＯｌ。－－１３ 东北林业大学硕±学位论文ＩＣ／ＯＳ的讯ｕｍ／化０２巧３１Ｕｎｅｎｓｅ（ＮＲ）Ｃ／ＯＳ折出ｕｍｕｒｔｕｎｅｎｓｅＧＱ４８７６６４（》＾ＣＧＱｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｕｌｔｕｎｅｎｓｅ４６１８２５（）ＩＴｅ．ｉ讯们ｉｃｒｏｂｉｕｍｓｐＪＦ７２７７４９ｐＩ）’‘。〇５化油ｕｍＡＢ４３巧４１ｓｐ．）（ＩＴｅｉ曲ｆｃｒｏｂｉｕｍｆｅｒｈｈＷｕｍＮＲＱ４３０７７ｐｍｐＩ）Ｉ＾Ｃ／ｏｓ的沈ａｃｅａｅｉｂＥＵ１７８８３０ａｃｆｅｎｕ讯）（ＩｆＣ／曲ａｃｅａｅｂａｃｆｅ打＂ｍ１７８Ｓ３６ｏｓ打（ＥＵ）Ｇａｒｄｅ舶帮．ＡＢ５巧９７９）（Ｉｗｘｚ０１Ｉ‘－—Ｇａｒｃ／／的机ｅｄｕｃｅｎｓＮＲ０２５６８８／ｅａ。＇）（Ｉ—Ｇａｒｃｉｅｌｌａ．ＥＵ２７５３６７＿ｓｐ（）—ａｒｃＧｉｅｌｌａｓｐ．ＨＭ５６５２４０（）’化—Ｇａｒｃ／ａｅ貼．ＥＵ１９７３部（）—Ｇａｒｃｉａｅｌａｓｐ．ＤＱ００５７１３（）Ｈ１１１１１１１０．０７０．０６００５０．０４０．０３０．０２０．００００．１．圏２－５基ＴＭ６ＳｒＤＮＡ序列同源性构建的系统发育树Ｆ－．２５Ｐｈｏｅｎｅｃｒｅｅａｓｅｄｏｎ１６ＳｒＤＮＡｓｅｕｅｎｃｅｓｏｍｏｏｉｇｙｌｇｔｉｔｂｑｈｌｇｙ２．３．４生长特性研究２．３．４－１菌株ＷＸＺ０１的生长曲线°将菌种按接种量１０％分别接种到初始ｐＨ７．８的液体培养基中，置于温度３７Ｃ厌氧－，２ｌ，箱内培养测定菌体的生长曲线（结果见图６）。前０．５ｄ菌株ｗｘｚＯ处在生长延滞期０．５ｄ后进入対数生长期，３ｄ菌体密度达到最大值０．７５并进入稳定期，４ｄ后开始进入－巳期衰。－０．８－—一一？？一？？ｆ、。－ｘ．＼－０．６Ｉ．＼置０．４。／＃Ｏ－０．３Ｊ－０．２＾－０．１Ｉ￣—————￣————００＋■■■－■ＩＩＩＩＩ０２４６８１０ｔ／ｄ－ｗｘｚＯ凶２６幽株ｌ的生Ｋ邮线－Ｆｉ６化ｅｆｉ．２ｒｏｗｔｈｒａ化ｏｓｔｒａｎｖｖｘｚＯｌｇｇ－－１４， ｉ２耐很巧的饰选ｊ巧巧２．３．４．２温度对菌株ＷＸＺ０１生长的影响°－？５０Ｃ温本文选取，２１５度范围对茵株ｗｘｚＯｌ生长情况的变化进行研究（结果见图‘°￣７，菌株在３０４０Ｃ时０〇值最大Ｃ。在温）６〇〇，最大值达０．７Ｗ上，最适生长温度为巧°°？￣〇？度为１５２０Ｃ、４５５０Ｃ范围时，菌株生长缓慢，活性相对较低，０６〇〇值在０．２０．３５之间。０．８Ｉｕ＼－０．２ｉ．ｔ１１１１１１．．．，．．，．１０巧２０２５如３５仙巧说巧Ｔ产Ｃ－ｗｘｚＯ凶２７溫度对閒株ｌ生长的影响巧－．２７ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ化ｍｔｔｔｔｌ呂ｐｅｒａｕｒｅｏｎｈｅｒｏｗｈｏｆｓｒａｉ打ｗｘｚＯｇ２．３．４．３培养基初始ｐＨ对菌株ＷＸＺ０１生长的影响ｚＯ－￣菌株ｗｘｌ在不巧Ｈ《件下生长状况见图２８，由图可见在ｐＨ为５８的条件下菌ｐ株都能较好地生长，最佳生长ｐＨ为８．０，菌液ＯＤｗｏ最大值达到〇．方。当初始ｐＨ为ｙ＇３．０、４．０Ｄ．３Ｈ５，时菌株极少生长，巧Ｏ６００不超过００；菌株ｌ巧养基初始ｐ分别为时的延滞期较长，菌株接种４ｄ后才达到最大生长量０．６３Ｈ为６．、７．０，：初始ｐ０时菌株延滞期相对较短，接种２ｄ后进入对数生长期３，，ｄ后达到最大化长量ＯＤ６００分别为日．６８和０．７３Ｈ为．，，，Ｉｄ后；当ｐ８０时菌株延滞期最短接利徊迪速进入对数化长期便－达刮抵人凿体密度，此时ＯＤｍｋ０，为７５。－－Ｉ５ 东北林＃．大学硕±学位论支，０．９Ｉ（－？－Ｈｐ３－．一０３＿ｐＨ４０．７＾二萌言＿￣ｏ■ｎｔ：ｆ亡？ｆ？＊？＿０２４６８１０ｔ／ｄ２－ＨｗｘｚＯ圈８初始对曲株ｌ化长的影响ｐＦ－ｉ２ｆｉｎｉｔｉｌＨｏｎ化ｒ化ｆｓｒａｉｎｗｘｚＯｌｇ．８ｅｅｃｔｓｏｆａｅｏｗｏｔｐｇ２．４本章小结一银离子作为ｉｗ种抗菌剂，对细菌有很强的毒害作用。筛选厌氧菌菌株时在改良的＋＋ＰＲＡＳ培养基中添加Ａｇ可Ｗ抑制多数厌氧菌的生长，耐受Ａｇ的厌氧菌被富集，从而＋利用硝酸银浓度梯度法分离得到一株能在含有２ｍｍｏｌ化Ａｇ的改良ＰＲＡＳ培养基中存活的耐银厌氧菌菌株，黑，，边缘整。形态学观察显示其菌落大多数为補同形色半透明一。齐，表面光滑。接触空气段时间后，菌落变成白色，菌体大部分死亡革兰氏染色反？ｘ？，菌体为短杆状，长度为１１ｍ１，，应呈阴性．０．６ｉ〇．２０．８肿无芽袍能运动。菌株在ｔ°Ｈ￣Ｈ为￣￣ｐ为５８的条件下都能较好地生长，最佳生长８．０。在温度为１５２０Ｃ、４５５０ｐ’°〇范围时，菌株生长缓慢，最适生长温度为３７Ｃ。蛋白胳、乳酸納、甲峻钢、苹巧酸、葡萄糖、庶糖和酵母膏可Ｗ作为菌株生长的良好碳源，硝酸盐为齒株生长氮源。符合伯杰氏平册（第八版）对梭茜科的描化。使川细簡逝用引物２７Ｆ１４９２Ｒ＾ｌＡ为模板，扩增出了相应和，义两株ｖｖｘｚＯ总ＤＮ－－的１６ＳｒＤＮＡ基因，将该基因片段与ｐＭＤ１８Ｔ截体连接，转入￡．ｃｕ／／ＤＨ５ａ感受态Ｉ中，巧接对前液进行荫巧ＰＣＲＯｌ１ＤＮＡ片１，，视化结义衣明，ｗｘｚ６Ｓｒ３９０ｂＪ的段为ｐ在Ｇ州Ｂａｎｋ的登记注册号为ＫＭ０４４２６４。ｊ｜ＢＬＡＳＴ搜索软件化ＧｅｎＢａｎｋ数据库中进行ｊ＇比对ｗｘｚｗ如化ｓ－，发现菌株Ｏｌ与Ｇｃ．ＥＭＺＹ】ｅｎＢａｎｋ：２７；３／ｐＧ注册巧ＥＵ：５６７同源性为（）９９％。利用ＭＥＧＡ５．２软件对和似巧列的Ｎ源性进行分巧并构建《统化待树。综合其巧瓜ＮＡ分析－态学特征１，、生理生化特性及６Ｓ，确化该巧厲ｈ梭巧科中的属—并命名为Ｇｗ（７ｓｐ．ｗｘｚＯｌ。－－１６． ３Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的生物合成及合成条件探究３Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子的生物合成及合成条件探究ｇｇ３．１实验材料３．１．１实验菌株厌氧茵苗株Ｇａｒｄｅ航！ｓｐ．ｗｘｚＯｌ采用改良的ＰＲＡＳ培养基厌氧管保存于东北林业大学微生物实验室中。３．１．２实验仪器表３－１实验仪器Ｔａｂｅ－ｘｅｒｍｅｎａａａｒａｔｕｓｌ３１Ｅｐｉｔｌｐｐ￣仪器名称仪器型号及厂家￣ＬＳ－３０３２ＳＡＮＹＯｎａｎ高压蒸汽灭苗锅Ｍ，Ｊａ（ｐ）ＹＸ－Ｉ厌氧培养箱Ｉ上海新苗医疗器械有限公司Ｑ（）ｐＨ计ＰＨＳ－２５上海精密仪器有限公司Ｃ）高纯氮气罐哈尔演卿华工业气体有限公司＇ＣＦｌ６ＲＸＥｎｄｏｆＧｅ：高速冷冻离！＞机ｈｉｍａｃｅｒｍａｎ，，ｐｐ（ｙ）５４１７ＲＥｅｎｄｏｆＧｅｒｍａｎｙ小型台式离也机，ｐｐ（）超薄切片机ＬＥ１ＣＡＵＬＴＲＡＣＵＴＵＣＴ（德国）ｕ－紫外可见分光光度计Ｔ１９０１北京普析通用仪器（）＇２－－马弗炉ＳＸ４１０让海登峰电炉厂）Ｘ－射线衍射仪ＢＢｒｕｋｅｒＤ８德国ｒｕｋｅｒ公司（）超声清洗器ＫＱ－２５０Ｂ慶山市超声仪器公司（）－７６５０透射电子显微镜Ｈｎ本ＨＩＴＡＣＨＩ公司）（－商分辨華透射电镜ＪＥＭ１０１Ｋ口本电子株式会社）傅里叶红外光谱仪ＳｐｅｃｔｒｕｍＯｎｅ（美国ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公巧）原子吸收光谱仪ＧＦＡ－７０００日本岛泮（）３．１．３实验试剂刃天青指示剂购自上海研臣实业有限公司；心半化氨盐酸盐购自北京华越洋生物生物科技有限公司；醇母膏和蛋白腺购自北京奥博星生物技术有限公司；琼脂购自北京智杰高远科技有限公司；其它化学药品均为国产分析纯。３．１．４实验培养基及配制合成培养基改良的ＰＲＡＳ培养基，其配制方法如下，：ＮＨ４ＣＩ１ｇＫ２肿Ｏ４１．０（）－，Ｎ〇６Ｈ〇２０，Ｎ化ＨＰＯ２．ＯＣｋ０．０８２．０ｇＭｇ（３２．４，无水Ｃａ，醇母膏，蛋白脉）２ｇｇｇｇ５．０ｇ，蒸馈水１０００ｍＬ，调节脚值为７．８，加入２％刃天青溶液原指示剂５００阵，诏）培养基煮沸后，通０，１２Ｃ入高纯氮气驱氧３０ｍｉｎ，加入心半腕氨盐酸盐（还原剂．５１）ｇ高压灭菌１５ｍｉｎ。固体培养基为上述液体培养基中加入２％的琼脂。－－１７ 东北林业大学硕±学位论文３．２实验方法３．２．１乂ｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的生物合成（１）用无菌注射器将１０％ＧｗｃＭａｓｐ．ｗｘｚＯｌ茜液接种于１００ｍＬ含２ｍｍｏｌ／ＬＣｒ的合成培’养基（改良的ＰＲＡＳ培养基中，置于３７Ｃ的厌氧培养箱中静置培养２ｄ。）°巧向培养液中加入２ｍＬ０．１ｍｏｌ／Ｌ的ＡｇＮ〇３溶液在巧Ｃ厌氧条件下避光培养１０ｄ。定时检测菌体培养液的颜色变化，同时设置未添加硝酸银的菌体培养液作为空白对照。３－（巧！］用ＢＩＬＯＮ９６ＩＩ型超声波细胞破碎仪（上海比朗仪器有限公司）对发生颜色变化的混°，工作参数设置为超声１５ｓ５ｓ０Ｃ８０％。合培养液超声破碎，间隔，温度，功率（４）超声破碎后的混合培养液在５０００ｒｐｍ的条件下离也５ｍｉｎ，取离也后的上清液在１４０００ｒｍ下再次１０ｍｉｎ３ｐ离也，收集固体沉淀，用无苗水洗次，于烘箱烘干并用于后续的检测。３．２．２Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的表征３－．２．２．１紫外巧见ＵＶＶｉｓ（伯描分析取４ｍＬ未添加硝酸银溶液的菌体培养液和４ｍＬ加入硝酸银溶液培养１０ｄ的菌体培养液分别加入比色皿中－，Ｗ蒸馈水作为对照，采用紫外可见分光光度计Ｔｕ１９０１北京（普析通用仪器对合成的Ａｇ２００￣／ＡｇＣｌ复合纳米粒子进行扫描分析，扫描范围为８００）ｎｍ，检测Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子表面等离子体吸收峰。３．２．２．２Ｘ射线衍射ＸＲＤ分析（）将超声破碎后获得的固体沉淀研磨成粉末，置于马弗炉中３０（ＴＣ锻烧２ｈ，利用ＢｍｋｅｒＤ８－ＲＤ４０ｋＶ型Ｘ射线衍射仪进行Ｘ分析：工，。本实验的检测条件作电压扫描°°－速度为１０７ｍｉｎ，２０角度范围为２５９０，饥Ｋａ射线。３．２．２．Ｓ透射电镜ｒＴＥＷＯ和高分辨率透射电镇（ＨＲＴＥＭ）分析取避光培养１０ｄ的部分培养液于６０００ｒ／ｍｉｎ下离也１０ｍｉｎ，蒸馈水清洗３次，收集－Ｉ．５ｍＬ离必管中，７６５０型透射电Ａｇ／Ａ蛋ｊ１，超薄切片化切片利用Ｈ子显微镜观察ｇＣｌ复合纳米粒子的形貌，加速电压为８０ＫＶ；将充分研磨并灼烧过的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子－－粉术溶解于己醇中，Ｋ２５０Ｂ型超声清沈器分散，１０＿止滴在铜网上，利用圧ＭＱ取｛１０１１型高倍透射电子显微镜对Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的晶格和超微结构进行分析，工作电拒为１５０ｋＶ。Ｓ．２．２．４粒径分布根据Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的ＴＥＭ照片，巧Ｏｒｉｇｉｎ软件进行粒径分布统计，计算平均粒径。－－１８， ３Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的生物合成及合成条件探究３．２．２．Ｓ傅里叶红外（ＦＴＩＲ）光谱分析：１ｒ将培养液离也并干燥后所得的沉淀粉末，按照６０的质量比与干燥的ＫＢ粉末混，将研磨好的粉末悬浮于去离子水中制成悬浮液合，研磨均匀，用干净的牙签鶴取少量悬浮液尽量均匀的涂抹于氣化巧窗片上，利巧ＳｐｅｃｔｒｕｍＯｎｅ型傅里叶红外光谱仪（美国ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ公司）测定样品的红外光谱。３．２．３Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成条件探索３．２．３．１反应时间对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成的巧响Ｎ’培养液与１ｍｍｏｌ／ＬＡｇ〇３溶液按照１００：１（Ｖ／Ｖ）比例混合，在避光、厌氧、３７Ｃ条－件下静置培养，Ｉｄ，３，５４ｍＬ，１９０１于不同时间阶段（，２ｄｄ，４ｄｄ取出样品利用Ｔｕ）型紫外可见分光光度计￣（北京普析通用仪器）对样品进行检测，检测范围为３５０７００ｎｍ，扫描间隔１ｎｍ。３．么３．２不同温度对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成的巧响’培养液与１ｉｍｎｏ：比例混合Ｃ，２５ｌ／ＬＡｇＮ〇３溶液按照１００１（Ｖ／Ｖ），在不同温度°°°ＣＣ－，Ｘ４ｍＬ，３７５０：，６０Ｃ条件下避光厌氧培养５ｄ），分别取出样扁，利用Ｔｕ１９０１－型紫外可见分光光度计北京普析通用仪器对样品进行检测，检测范围为３５０７００（）ｎｍ，扫描间隔Ｉｎｍ，检测样品表面等离子体吸收峰。３．２．３．Ｓ培养基初始ｐＨ对Ａｇ／ＡｇＣＩｇ合纳米粒子合成的影响使用初始ｐＨ分别为４．０，５．０，６．０，７．０，８．０（ＮａＯＨ调节）的改良ＰＲＡＳ液体培养基接入１０％原始菌液培养２ｄ，培养液与１ｍｍｏｌ／ＬＡｇＮ〇３溶液按照１００：１（Ｖ／Ｖ）比例混合，’３７Ｃ避光５ｄＬ－厌氧培养，分别取出４ｍ样品，使用Ｔｕ１卵１型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器）对样晶进斤检测，设定波长为５５０ｎｍ，测定样品吸光度。３么３．４Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子转化率的測定参照文献方法测定银离子浓度与吸光值关系标准曲线：首先，丽制浓度分别为０、２．５＾ｉｇ／Ｌ、５．０雌／Ｌ、１０．０＾ｇ／Ｌ、１５．０＾ｉｇ／Ｌ、２０．０＾ｉｇ／Ｌ的確酸银标准溶液，采用原子吸收光谱仪分别检测不同浓度硝酸银的吸光值，检测元素为Ａｇ，检测波长为３２８ｎｍ，工作电流为１０ｍＡ，Ｗ吸光度为纵坐标，对应银离子浓度为横坐标，绘制标准曲线。Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子转化率的测定：将在上述优化条件获得的菌体培养液在４０００ｇｇｍｎｍ、ｎｒｐｍ下离也１０ｉ，收集上清液，置于１４０００ｒｐ转速下离屯３次，每次１０ｍｉ，弃沉入－淀１％的ＨＮ０，取适量上清液，加３稀释１０００倍，采用ＧＦＡ７０００型原子吸收光谱仪日本岛津测定此时银离子的浓度。取等量刚添加１ｍｍｏｌ／Ｌ硝酸银溶液的ｗｘｚＯｌ胞外（）滤液１％的ＨＮ０－１，同样采用３稀释１０００倍，测定银离子的浓度。按照公式３）计算（Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子的转化率Ｔ。ｇｇ１－－１９ 东北林业大学硕＋学位论文Ｃ－Ｘ，ｘ内，Ｃ２化＝－＂邏％口１）ＣｌＸｍ公式中…：Ｃ反应前ｗｘｚＯｌ胞外滤液的银离子浓度ｌ；ｎ…ｉ反应前ｗｘｚＯｌ胞外滤液的稀释倍数；Ｃ…ｘｚＯｌ２反应后ｗ胞外滤液的银离子浓度；…反应后ｗｘｚＯ巧ｌ胞外滤液的稀释倍数。３．３结果与分析３．３．１Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的生物合成金属纳米粒子表面自由运动电子在光的电磁场作用下发生扰动产生表面等离子体共振效应巧Ｐ民效应，送种效应使自然光被其特异性吸收，因此当溶液呈现出颜色变化）ＰＷ时，意味着金属纳米粒子的产生。ｗｘｚＯｌ菌体培养液在加入ＡｇＮ〇溶液避光反应２ｄ３后，体系颜色从浅黄色变为红掠色，而未添加硝酸银的菌体培养液则无此现象产生（见图３－１１０）。这种明显的颜色变化可Ｗ初步判定反应溶液中金属纳米粒子的形成。反应ｄ后，溶液颜色不再改变，这个现象说明生成的金属纳米粒子较为稳定。兴戶费泌仪前娩巧＾除．禮育３－圓１ｗｘｚＯｌ菌体靖养液加入硝酸银溶液后颜色变化情况Ｆ－ｉ．３１ｔｈｅｃｏｌｏｒｃｈａ打ｇｅｏｆｘｚＯｌｃｕｕｒｅａｆｔｅｒｅｄｓｖｅｒｎｒａｓ呂ｗｌｔｓａｄｄｉｌｉｔ化ｏｌｕｔｉｏｎ３．３．２Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的表征－３－．３．２．１紫外可见ＵＶＶｉｓ扫描分析（）－－Ｖ－紫外可见ＵＶｉｓ光谱分析是根据不同结构的物质对２００８００ｎｎｉ波长范围内电磁（）一波的吸收特性不同来鉴定物相的种测试方法。不同的物质分子吸收光的波长范围与强度不同－Ｖ，吸收曲线也不相同。由于金属纳米粒子特巧的ＳＰ民效应在ＵＶｉｓ光谱上会出现不同的等离子共振吸收峰，其吸收峰位置受金属粒子形状和大小的影响，吸收强度可Ｗ代表溶液中纳米粒子的浓度，因此紫外可见扫描是对金属纳米粒子进行定性或定量分析的有效手段。－２０－ ３Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的生物爸成及合成《件探究ＵＶ－Ｖｉｓ进行全波长扫描培养１０ｄ后的含硝酸银的ｗｘｚＯｌ菌体培养液使用，结果见图－￣３２，在３５０７００ｎｍ范围存在大而强的吸收峰，这个吸收峰范围与文献中报道的制一Ａ备Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子光谱致，而未添加ｇＮ〇３溶液的菌体培养液则没有出现此，初步证明菌株ｗｘｚＯｌ可制备Ａ／ＡＣ现象ｇｇｌ复合纳米粒子。由于吸收曲线较为平滑，峰形对称ｌ，表明溶液中Ａｇ／ＡｇＣ复合纳米粒子分布均匀。２．５ＪＰ１１—ａ未添加硝酸银的菌体培养液—ｂ添細酸麵菌体培养液－２．０＇ＩｏＴ１－．５－￣＝０．０；Ｉ＾２００３００４００５００６００７００８００Ｗａｖｅｌｅｎｇ化（ｎｍ）－幽３２ＡＣ－ｇＭｇＩ复合纳米粒子的紫外可姐光吸收光谱阁＾－－Ｆｉ．３２ＵＶｖｇｉｓｓｐｅｃｔｉａｗｉ化ｒｅｓｐｅｃｔ化Ａｇ／ＡｇＣｌｃｏｍｐｏｓｋｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ３．３．２．２Ｘ射线衍射ＸＲＤ分析（）／Ａ－为了确定合成ＡｇｇＣｌ复合纳米粒子的晶体结构，我们进行了Ｘ射线衍射分析，３图３为ｗｘｚＯｌ制备Ａｇ／ＡｇＣｌ纳米粒子的ＸＲＤ图谱，图上所有的峰很强且没有发现杂质峰，。°°说明结晶度较好。其光谱２０值在３８．１１６，４４．２７７，６４．４２６啼１７７．４７２，分别对应１１１、（）口００）、（２２０）和（３１１）［巧个晶而，观紫到Ａｇ衍刺峰的巧在，这与Ａｇ标准間谱卡片（ＪＣＰＤＳ。。。。。。－ｆｉｌｅ２８７２０２７乂３１３２．２４３４６．２３３５４．４７８５７．４７８７．４７１：６５＾相吻合；值在，，，，，６，。。７４．４７１和７６．７３４分别对应１１１、００、２２０、３１１、２２２、４００、３１１１１４２０（）口）（）（）（）（）（巧（）晶＇ｔ－怔，ＡｌＣＣＰＤＳ１１２Ｉ观察到ｇＣ衍射峰的存化，这些数据ｊＡｇｌ极准阁谱卡片Ｕｆｉｌｅ：３３如一ｗｘｚＯ致，进步证明了利用苗株Ｉ确实可化則备Ａ／Ａ口复合纳米粒子。ｇｇ－２－１＊ 东北林仙大学硕±学位论文６００．１Ｓ？Ａｇ５００■ｅ★Ａ口Ｈｇ４００－－：３００Ｉｒ芒ｏ．尝ｓＳ＾２００－ｔＨＫｉＩＩＩＩ．．．．．．２０３０４０如６０７０８０２目／ｃｌｅｇｒｅｅ３－３Ａ／ＡＣ凹ｇｌ复合纳米粒子的ＸＲＤ衍射幽谱ｇ－Ｆ．ＸＲＤｅｒｎＡ／ＡＣｃｏｍｏｓ化ｎａｎｏａｒｔｃｅｓｉｇ３３ｐａ打ｏｆｇＩｐｉｐｉｌｇＳ．３．２．３透射电镜（ＴＥＭ）和高分辨率透射电镜（ＨＲＴＥＭ）分析为了观察Ａｇ／ＡｇＣｌ复合如米粒子的大小和形貌，利用透射电镜对获得的样品粉末进－－行了分析，结果如圈见图３４。通过透射电子显微镜ＴＥＭ照片３４ａｙＡ（）（）中可看到许多呈－－灰黑色的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子。这些纳米粒子形状为球形或近球形，般为单分散化？，偶有团聚，在菌体周围分布较为均匀，粒径大小约为１０５０ｎｍ。从高分辨率透射电镜照片３－４ｂ中可ｙＡ（）？看出异质连接的Ａｇ／ｇＣｌ复合纳米粒子的晶格条纹，其中Ａｇ的１１晶格条纹与Ｕ晶面相吻合，ＡＣｌ的晶格条纹与２００晶面相吻合）ｇ）。这种异质结构能够（有效改善Ａｇ／ＡｇＣｌ纳米复合材料的光催化巧性结果表明，本研究利用厌氧菌与硝酸银溶液混合培养在不甫添加任何巧毒的化学试剂的情况下制备出粒径小、稳定性好的Ａ呂／ＡｇＣｌ复合纳米粒子，这可能与厌氧菌生长过程中产生的某些物质对银离子的还原速度有关。參鴻ｆＰ沒碱《护殘讀｜；謹崇章游賴雜巧乱蠢驚’气兮之證參如０嚷車別＂請与缘一３－４Ａ／ＡＣＴＥＭ和ＨＲＴＥＭ阁ｇｇＩ复合纳米粒子的阁片Ｆ－ｍｍ．４ＴＥＭａｎｄＨＲＴＥＭｅｓＡ／Ａｓｅｎａｎｏａｒｌｅｉｇ３ｉａｇｏｆｇｇＣＩｃｏｐｏｉｔｐｔｉｃｓ－２２－， ３Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的生物合成及合成条化探究Ｓ．３．２．４粒径分布分析根据ＴＥＭ图片中的标尺－，能够绘制出Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的粒径分布图见图３（－５￣？）。由图３５可知，２０％的粒子尺寸分布在１０２０ｎｍ６０％的粒子尺寸分布在２０３０；ｎｍ２０３０？４０ｎｍＡＣＡｌ２７％的粒子尺寸分布在。／；合成ｇｇ复合纳米粒子的平均粒径约为ｎｍ〇３－５＾：：ｉ：１！ｍｌＰｒ。「气Ｉ？Ｉｋ０１５２０２５３０３５４０１ａｒｔｉｃｌｅｓｉｚｅｎｍｐ（）真凶３－５恨据ＴＥＭ箇片绘制的粒径分布柱状圓Ｆ－化ｉ．３５Ｐａ門ｉｃｌｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｉｈｉｔｄｉ行化ｅｉｈｓｇｔｏｎｓｏｇｒａｍｅｒｍｎｅｄｏｍＴＥＭｍｃｒｏｇｒａｐ３．３．２．Ｓ傅里叶钉外ＦＴＩＲ光谱分析（）－－ｉｉ３－６可见ＡＡｌ４３６２９３１ｃｍ由图：ｇ／ｇＣ复合纳米粒子的红外光谱分别在３ｃｍ、和ｉ—２８５２ｃｎｆ出现特征吸收峰——Ｈ，这些是与氨原子相结合的官能团０Ｈ，ＣＨ和Ｎ键－＇５００？２０００的伸缩振动化收带。波长为ｃｍ之间存在着些明显吸收峰，１０６９ｃｍ＼－—ｉｉｉ一＿——＿＝１２５３ｃｎｆ、１４１０ｃｍ和１６４５ｃｍ处的吸收峰分别是Ｃ—０、Ｃ０、Ｎ０Ｃ３＾Ｃ一等化学键的伸缩振动峰，这些化学键的存在表明Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的表面吸附着＇Ｃ些蛋白质和糖类化合物，它们可能在Ａｇ／Ａｇｌ复合纳米粒子的的稳定方面起着重耍作用。ＦＴＩ民结果分析提示生物法合成可提高Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒了的稳定性和分散性。－２３－ 东北林业大学硕±学位论文（０內Ｉ．．Ｉ．Ｉ．．ＩＩＩ．．４０饥巧００３０００巧００２０００化邮１０邮５００＊＇ａ＊ｖｅｅｎｔＷｌｇｈ（ｃｍ）３－６Ａ图Ａｇ／ｇａ复合纳米粒子的红外光谱Ｆ－ＴＩＲＡＡＣｒ．ｉｉｇ３６Ｆｓｐｅｃｔｒａｏｆｇ／ｇＩｃｏｍｐｏｓｉ化ｎａｎｏｐａｔｃｌｅｓ３．３．３Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子合成条件探究３３１．．３．反应时间对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳张粒子合成的影响关于微生物既能合成Ａｇ又能合成ＡｇＣＩ纳米巧子很少在文献中报道Ｉ而本研究利用厌氧菌ｗｘｚＯｌ菌体培养液在厌氧条件下与硝酸银溶液反应即可获得Ａ／Ａｌ复合ｇｇＣ－７－纳米粒子。通过紫外可见全波长扫描对反应进行监测见图３，反应１ｄ观察到ＵＶｖｉｓ（）％０？７００ｎｍ光谱在范围存在吸收，反应２ｄ出现表面等离子共振巧Ｐ巧吸收峰，随着时间延长，ＳＰ民吸收峰强度增加，培养液颜色逐渐加深，反应５ｄ后可Ｗ观察到明显的ＳＰＲ败收峰，此时培养液呈现稳定的红栋色，因。整个过程无需高温加热和催化剂催化此具有低能耗与无污染的优点，而且可从利用菌体进行发酵生产，Ｗ达到工业化耍求。１－．５｜１１－言＇。￣—一＇－￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣￣０．０■■■－－－－—１ＩＩＩ１１Ｉ３如４００４如如０５５０６００６如７００ｎＷａｖｅｌｅｔｈｎｍｇ（）－７反巧／ＡＣ－凶３时间对ＴＡｇｇ］复合纳米粒子ＵＶｖｉｓ吸收光谱的变化憎况Ｆ－．３７ｅｆｆｅｃｔｏｆｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎｓ化ｅｉｏＡＡＣｌｃｏｍｏｓｉ化ｎａｎｏｔｉｃｌｅｓｉｇｙｎｓｓｆｇ／ｇｐｐａｒ．２４－ ３Ａ／ＡＣｌ复合纳米巧子的生物合成及合成《件探究ｇｇＳ．３．３．２不同温度对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成的影响Ｃ一通过紫外可见全波适宜的温度是影响Ａｇ／Ａｇｌ复合纳米粒子合成的重要因素之，３－８长扫描对反应进行监测表明（见图，当环境温度技低时，菌体培养液无法与硝酸银溶）°？液发生反应，而当环境温度在１５３７Ｃ范围时，反应能够顺利进行，随着湿度的升‘ＰＲ高，，且３７Ｃ时，等离子共振（Ｓ）吸收峰强度增加特征峰位置几乎不变当温度达到ＳＰ民吸收峰的强度最大，这可能由于菌体处于最适生长温度，此时菌体在生长的同时分一Ｃ泌些酶类的生物大分子，能够将银离子还原，从而生成Ａｇ／Ａｇｌ复合纳米粒子，送对我们进一步推测反应机理有着重要的提示。－１．６｜－—ｉ＂４Ｃ－￣￣￣￣—■—￣￣￣￣ｏ．ｏ￣￣￣￣—■■■■■■ｌＩＩＩｔ１Ｉ３说仙０４如如０５５０阳０６饥７００ａｖｅｅｎｎｍＷｌｇｔｈ（）－３８Ａ－図Ａ／ＣｌＵＶｖ不同温度对于ｇｇ复合纳米粒宁ｉｓ吸收光谱的变化情况－Ｆｉ．３８ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｔｉＡＣｎａｒｃｅｓｇｔｅｐｅｒａｕｒｅｏｎｓｙｎｔｈｅｓｓｏｆｇ／Ａｇｌｃｏｍｐｏｓｉｔｅａｎｏｐｔｉｌ３．３．３．Ｓ培养基初始ｐＨ对Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子合成的影响Ｈ是影响纳米粒子？ｐ形成的另个重要因素，由于考虑到菌液与硝酸银反应合成一Ａ／ＡＣｌｇｇ复合纳米粒子的过程中有还原酶类的生物大分子参与，因此我们选择般还原？９３－９可见？酶作用ｐＨ范围５探究其对反应的影响，Ｈ５９范围内合成反应都可。由图ｐＷ发生？，随着ｐＨ升高，３５０７００ｎｍ处的吸光度增大，当ｐＨ为５时，吸化度值较小，Ｈ处于６？９但当ｐ范围内时，吸光度增加幅度较大，最适ｐＨ为８，说明偏碱性环境有助于Ａ？ｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒了的形成。这可能由于ｐＨ在６９之间，加入菌液中的硝酸锻溶液更易诱导菌体产生可还原银离子的酶。－２５－？ 东北林业大学硕±学位论文１．５Ｐ°－ｒ＾．０．３Ｉ．Ｉ．Ｉ．１．Ｉ，５６７８９Ｈｐ３－９Ｈ／ＡＣ图培养基初始对Ａｌ复合纳米粒子合成的影响ｐｇｇ－ｍｅｄＦ３ｆｉｎｉｔｉａｌｉｕｍｏｎｎｉＡ／Ａｌｃｉ化ｎａｎｏａｒｌｅｉｇ．９ｅｆｅｃｔｏｐＨｏｆｓｙ化ｅｓｓｏｆｇｇＣｏｍｐｏｓｐｔｉｃｓ３．３－３．４Ａｇ／ＡｇＣＩ复合细米粒子的转化率分析ＧＦＡ－７０００型原子吸收光谱仪３－２采用（日本岛津）测定的不同银离子浓度的吸光值如表所不：表３－２不同银离子浓度的吸光值Ｔａ－ｂｌｅ３２ＯＤｖａｌｕｅｏｆｉｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｒａｉｏｎｓｆＡｄｆｆｅｔｔｏｇ＋Ａ浓度／Ｌ吸光值ｇ（峭）００２５０１２５．．５００．２１２．１０．００．４８４１５．００．６５３２０．９０７＾＋Ａ３－ｇ的标准曲浅见图１０。原子吸收光谱仪测定的反应前菌体胞外滤液的ＯＤ值为＋１．５３２，由回归方程计算出Ａ浓度为３４．１ｉ／Ｌ，反应后ｗｘｚＯｌ胞外滤液ＯＤ值为ｇ［ｇ＋’〇－０．３１５Ａ．９Ｌ３银离子的转化率７９．６８，对应ｇ浓度为６３ｉ／，根据公式；／〇。该｜ｇ（〇计算得ｎ为计算结果接近于日前化学方巧合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米转子的转化率，但是本研究利用厌氧菌菌体培养液与硝酸银溶液混合培养方法在不添加任何衷面活性剂、保护剂和交联剂的条件下即可制备出粒径小、稳定性好的Ａｇ／Ａｇ口复合纳米粒子。－２６－ｔ ３Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的生物合成及合成条件探究■１＝０ｙ．０４４８ｘ＋０．００４４！＝Ｒ．０９９６７．０．８ｒ０■．４？０．２Ｘ＾？０４１１１０５１０ＩＳ２０＊Ａｇ＊／Ｌ（ｊｇ）＋－凹３１０Ａ浓度与光吸收值的标准曲线ｇ＋Ｆ－ｉｇ．３１０ｓ化ｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｏｆＡｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎａｎｄＯＤｖａｌｕｅ３．４本章小结本章详细介绍了利用厌氧菌制备ＡＡ－ｇ／Ｃｌ复合纳米粒子的方法，通过紫外可见ｇ－Ｖ全波长扫描ＵＶｉｓ、Ｘ射线衍射ＸＲＤ、透射电子盈微镜（ＴＥＭ）、高分辨率透射电子显（）（）微镜（ＨＲＴＥＭ）、傅里叶紅外（ＦＴＩＲ）光谱等乎段表征合成的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子，结果证明生成的产物确实是Ａｇ／ＡＣｌ复合纳米粒子。含有Ａｇ／ＡＣｌ复合纳米粒子溶液的ｇｇ－ＵＶｖ￣ｉｓ光谱显示在３５０７００ｎｍ范围出现大Ａ／ＡＩ复合纳米粒子吸收峰而强的ｇｇＣ；产物°。°°的ＸＲＤ衍射图谱在２日值为３８．１１６，４４．２７７，６４．４２６和７７．４７２处化现Ａｇ的特征峰，。。。。。。。。２９值在２７．８３１，３２．２４３，４６．２３３，５４．４７８，５７．４７８，６７．４７１，７４．４７１和７６．７３４处巧现ＡｇＣｌ的特征峰；产物的ＴＥＭ及ＨＲＴＥＭ照片显示；Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的形状大多为球形或近球形＇，般为单分散性，偶有团聚，在菌体周围分布较为均匀，粒径大？０５０ｎｍ。／Ｔ妃航ｓ小约为１傅里叶红夕ｈ（ＦＴＩＲ）分析提示Ｇ口ｐ．ｗｘｚＯ１菌液中的里白在Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的稳定方面发挥了重要的作用。对于合成条件探究结果表明：当？５？３７ｒ范围时６９范环境温度在１，合成反应能够顺利进行，培养基初始ｐＨ在围之间，吸光度增加幅度较大，说明偏碱性环境有助于Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子的形成。根据原子光谱吸收仪测定的结果可知Ａ／ＡＣＩ７９．６８％ｇｇ复合纳米粒子的转化率为，接近于日前化学方法合成Ａｇ／ＡＣ，ｇｌ复合纳米粒子的转化率但是本研究利用厌氧菌菌体培养液与硝酸银溶液混合培养方法在不添加任何衷晒活性剂、保护剂和交联剂的条件下即可制备出粒径小、稳定性好的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子。－２７－Ｉ 东北林业大学硕±学位论文４Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子合成机理探讨及光催化活性研究４．１实验材料４．１．１实验菌株厌氧菌苗株Ｇｉｊｒｃｋ化［ｓｐ．ｗｘｚ０１采用改良的ＰＲＡＳ培养基厌氧管保存于东北林业大学微生物实验室中。４．．１２实验仪器表４－１实验仪器Ｔａｂ－ｌｅ４１Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｐｐａｒａｔｕｓ￣仪器名称仪器型号及厂家￣￣一－Ｆ恒温振荡培养箱ＨＺＱ１６０Ａ上海恒科技有限公司（）ｈ１ＲＸ高速冷冻离必机ｉｍａｃＣＦ６ＥｅｎｄｏｆＧｅｒｍａｎ，ｐｐ（ｙ）、５４１７ＲＥｄｏｆＧ小型台式离也机，ｐｐｅｎ（ｅｒｍａｎｙ）超声波清洗器ＫＱ－２５０Ｂ昆山市超声仪器公司（）一稳圧稳流电泳仪ＤＹＹ－犯仪器厂徘京六）全自动凝胶成像系统Ｓｙｎｇｅｎｅ，ＧｅｎｅＧｅｎｉｕｓ（ＵＳＡ）ＭＬＳ－３０３２ＳＡＮＹＯａｎａｎ高压湿热灭菌锅，Ｕｐ）ＰＬＳ－ＳＸＥ３００北京泊菲莱科技有限公司Ｗ（）４．．１３实验试剂表４－２实验所需试剂－ｔＴａｂｌｅ４２Ｌｉｓｏｆｒｅａｅｎｔｓｉｎｅｘｅｒｉｍｅ打ｔｇｐｐ试剂名称生产厂家涵银天潍科密欧试剂公巧丙猜醜胺Ｓｉｇｍａ公司’Ｎ－Ｎ甲叉双丙婦醜胺Ｓｏｉｌａｒｂｏ公司，Ｔｒｉｓ碱Ｓｏｌａｒｂｉｏ公巧过硫酸馈Ｓｏｌａｒｂｉｏ公巧．ＴＥＭＥＤＡｍｏ化ＳＣＯ公司ＳＤＳＳｏｌａｒｂｉｏ公司考马斯亮ＭＲ２５０Ｓｏｌａｒｂｉｏ公巧甲醇北京国药试剂厂冰醋酸北京国药试剂ｒＨＣＩ北京国药试剂ｒ鞭醜盤Ｓｏｌａｒｂｉｏ公巧甘油北京国药试剂厂化氨酸Ｓｏｌａｒｂｉｏ公司甲幕輕北京園药试剂ｒ－ＴＧＥＮＭＥＤＳＣＩＩＥＮＩＦＣＳＮＣＵＳＡ细菌异化型硝酸盐还原酶活性检测试剂盒（）ＥＮＭＥＤ－ＧＳＣ１ＥＮＴＢＣＡＡ质浓度巧量试剂盒ＩＦＣＳＩＮＣＵＳＡ）蛋（－２８－Ｉ ４Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子合成机理探讨及光催化活性研究４．１．４实验试剂配制（１）硝酸银溶液：配制方法见第二章。＝２ｍｏｌ／Ｌｒｉ－（）１．５ＴｓＨＣｌＨ８．８：称取化２ｇＴｒｉｓ，加入６０ｍＬ的去离子水，缓慢滴加浓（ｐ）ＨＣ１直至ｐＨ达到８．８，溶液冷却至室温后ｐＨ有所升高，将阳再次调回８．８并将溶液定容至１００ｍＬ。高温高压灭菌于室温保存备用。书Ｃ＝巧１ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓｌＨ６．８：称取１２．１Ｔｒｉｓ溶于６０ｍＬ去离子水中，缓慢滴加浓ＨＣ１（ｐ）ｇ直至ｐＨ达到６．８，溶液冷却至室温后ｐＨ有所升高，将ｐＨ再次调回６．８并将溶液定容至１００ｍＬ。高温髙压灭菌于室媪保存备用。％丙帰醜胺ｗｖ帰醜胺－００（４片０（／）溶液：称取２９．１ｇ丙，０．９ｇＮＷ甲叉双丙帰醜胺于１，’ｍＬ烧杯中，加水溶解后定容至ｌＯＯｍＬ，置于踪色瓶中于４Ｃ保存备用。‘（５）１０％ＳＤＳ（ｗ／ｖ）溶液；称取ｌＯｇＳＤＳ，加入约８０ｍＬ的去离子水，在６８Ｃ的条件下加热溶解，将溶液定容至ｌＯＯｍＬ，室温保存各用。％过硫酸按’６１０：称取１１０ｍＬ去离子水中，封口膜密封后于４Ｃ保存（）ｇ过硫酸镑溶于备用。５ｌｘＳＤＳ电泳３Ｔｒｉｓ、１ＳＤＳ和１４（）缓冲聽称取ｇｇ．４ｇ甘氨酸，加去离子水定容至１°Ｌ，４Ｃ保存备用。（７）＾Ｌｏａｄｉｎｇｂｕｆｅｒ：称取０．５ｇＳＤＳ，２５ｍｇ漠酷蓝，加入２．５ｍＬ甘油，１．２５ｍＬ１°ｍｏｓ－＝，Ｃ保存备。ｌ／ＬＴｒｉＨＣｌＨ６．８加入去离子水溶解后定容至５ｍＬ，４用（ｐ）８－）考马斯亮蓝染色液；称取１考马斯亮藍Ｒ２５０加入１００ｍＬ冰醋酸和４５０ｍＬ甲醇，（ｇ溶于４５０ｍＬ蒸饱水中，用滤纸过滤除去颗粒状物质，最终定容至１Ｌ，置于踪色瓶中保存备用。９１考马斯亮蓝脱色液：分别用量筒量取００ｍＬ冰醋酸和１００ｍＬ甲醇（），加蒸傭水定容至１Ｌ，室温保存。１－，４３（巧聚丙娇巧胺电泳凝胶的配制方法见表：表４－３配制方法－ｍＴａｂ４ｒｅｒａｎｌｅ３Ｐｐａｔｉｏｅｔｈｏｄｓ洛液分离胶（１２％）浓缩胶口％）．．去离子水１６５ｍＬ１４２ｍＬ３０％聚丙稀蘭胺洛液２ｍＬ３３０［ｘＬ１．５ｍｏ＾ＬＴｒｉｓ１．３ｍＬ无ｍｏＴｒＩ．Ｏｌ／Ｌｉｓ２５０ａＬ巧｜１０％过硫酸按州冲２０ＬｎＴＥＭＥＤ５？６６￣７此山４．２．１菌体二次发薛液蛋白样品的制备将５００ｍＬ培养好的菌液在室温下１＾４０００ｒｐｍ离屯２０ｍｉｎ，收集茵体，用０．１ｍｏｌ／ＬｐＨ７．５麟酸缓冲溶液洗３次，将菌体沉淀分别转入含有５ｍＬ蒸溜水和５ｍＬ１ｍｍｏｌ／Ｌ硝酸银溶液的厌氧管中振荡培养７２ｈ，５０００ｒｐｍ离也２０ｍｉｎ，得到的上清液即为菌体－２９－ 东北林业大学硕±学位论文二次发酵液蛋白样品。采用离也超滤管对上清液浓缩２次Ｗ提高样品浓度。４．２．２表面蛋白样品的制备将获得的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子用５０ｍｍｏＬ／Ｌ的ｐＨ７．５磯酸缓冲液洗缓３次，然‘后利用８１１１〇１／１＾的尿素和１％８〇８混合液进行处理，６５（：水浴保湿２０１１１如离也，使Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子表面蛋白变性分离出来，１４０００ｒｐｍ离也２０ｍｉｎ收集上清液，得到的上清液即为Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子表面蛋白样品。经过蒸觸水处理的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子作为空白对照。４．２．３蛋白电泳实验将浓缩后的蛋白样品置于电泳仅中，用质量浓度为１２％分离胶和５％浓缩胶进行－ＳＤＳＰＡＧＥ垂直板电泳８０Ｖ１２０Ｖ。电泳结束后，，电泳浓缩胶电运为，分离胶电皮为’加入考马斯亮蓝染色液覆盖凝胶，于３５Ｃ水平摇床上缓慢振荡３０ｍｉｎ。取出凝胶将其放到适量脱色液中进行脱色，脱色时间为２４ｈ。脱色完成，在此过程中更换２次脱色液后，在凝胶成像仪中观察得到的蛋白条带。４．２．４硝酸巧原酶活性（ＮＲＡ）测定硝酸还原酶（Ｎｉｔｒａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＮＲ）广泛存在于高等植物和微生物活细胞内，该酶是一种底物诱导酶，在硝酸盐溶液中诱导产生，可催化硝酸根离子还原成亚硝酸根离子硝酸还原酶可分为同化型硝酸还原酶和异化型硝酸还原酶，异化型硝酸酶存在于许ｔＷ多厌氧菌和兼性厌氧菌中，大多为膜结合酶。为了研究不同浓度硝酸银溶液对ＮＲＡ的影响，参照文献方法对硝酸还原酶活性进行测定。具体巧程如下：１（）菌悬泌？制备取１０％菌种接种于含有１００ｍＬ改良ＰＲＡＳ培养基的厌氧瓶中，分别加入１Ｎ〇°ｍｍ〇ｙＬ、１．５ｍｍｏｌ／Ｌ和２ｍｍｏ＾ＬＡｇ３溶液，置于３７Ｃ、１３０ｒ／ｍｉｎ的摇床上振荡培养，在不同时间点リ２ｈ，２４ｈ，３６ｈ，４８ｈ，６０ｈ，７２ｈ，９６ｈ）取样，经４０００ｒｐｍ离也１５ｍｉｎ，收集菌体沉淀，无菌水清洗再离也，反复进行３次，重悬于蒸觸水中制成菌悬液－。口）硝酸还原酶活性测定按照相关实验试剂盒说明进行细胞裂解，分析菌体总蛋白浓度和硝酸盐还原酶活力一个酶巧力单位。Ｕ定义为每毫克菌体蛋白毎分钟生成的ＮＣＶ的量，单位为（）＇＇＇＇？－ｎｍｏｌｍｇｍｉｎ〇４．２．５Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子光催化活性研究由于偶氮类染料是工业废水的主要来源之…，因而我们选用定浓度的甲基澄（ＭｅｔｈｙｌＯｒａｎｇｅ，ＭＯ）溶液为反应降解物来测定Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的光催化活性。称取反应制得的Ａ／ＡＣｌ样品粉末化１分散于５０ｍＬ２０ｍ化的甲基燈水溶液中，放入ｇｇｇｇ直径为５ｃｍ的培养皿反应器中形成悬浮液－Ｂ型超声，置于黑暗环境中利用ＫＱ２５０波清－３０－， ４Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子合成机理探讨及光催化活性研究３０ｍ－洗器（昆山市超声仪器公司）超声分散１０ｍｉｎ，磁力攪拌ｉｎＷ达到吸附解吸平衡。－然后，开启功率为３００Ｗ的氣灯ＰＬＳＳＸＥ３００作为可见光源进行照射，每隔１５ｍｉｎ取（）出５ｍＬ反应液进行离也分离－，取上层清液，采用Ｔｕ１９０１型紫外可见分光光度计测量ＰＷ４６０ｎｍ波长处吸收光谱强度。同时设置无催化剂和未进行光照的甲基澄水溶液作为７７［空白组Ｗ及用Ｐ２５作催化剂的甲基澄水溶液作为对照组１通过公式４－１计算甲基澄的（）ｔＷ光催化降解率。＝＾￡＾Ｘ〇〇ｉ〇〇／Ｃｏ４－１）（式中：ｎ一甲基楼溶液降解率．Ｃ一甲基澄溶液的巧始浓度ｏ；Ｃｒ－光照时间ｔ时反应液中甲基瞎溶液的浓度。４．３结果与分析４．３．１菌体二次发酵液蛋白电泳结果分析二烧基硫酸钢－－ＰＡＧｗｘｚＯ利用十聚丙帰醜氨凝胶电泳巧ＤＳ巧技术对茵株ｌ的二次发－－－酵液蛋白进行ＳＤＳＰＡＧＥ电泳分析，获得Ｔ条带较为清晰的电泳图谱（见图４１）。图４１中泳道２显示的是菌株ｗｘｚＯｌ经过硝酸银溶液浸泡处理后获得的菌体二次发醇液蛋白条带，，，泳道３为添加蒸權水处理后获得的菌体二次发酵液蛋白条带与泳道３相比泳道２新产生了２条蛋白条带，与蛋白Ｍａｒｋｅｒ对照，可知这两种蛋白相对分子量约为８０７９成［还原酶的蛋白质ａ和１４０ｋＤａ。其中，１４０ｋＤａ的蛋白质与文献印报道发现的硝酸分子量相同。这说明菌株ｗｘｚＯｌ在硝酸银溶液中浸泡７２ｈ后产生了硝酸还原酶，由此ＮＯ溶液引发的一种诱导反应推断Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的合成可能是由Ａ，菌株ｇ：５ｗｘｚＯｌ在硝酸银的诱导下分泌硝酸还原酶，溶液中的银离子在该酶作用下被还原成单质银，同时银离子与胞外氯离子缓慢作用生成氯化银纳米粒子来抵御银离子的毒害作用。－－３１ 东北林业大学硕±学位论文１２３—ｊ１００—ｋｍｍ＝ｉ〇ｚＰ：Ｓ＼＼巧２５—ｍＷｍｍ．■‘；‘－２－０£４－４－二图１ｗｘｚｏｒ菌体次发酵液蛋白样品的ＳＤＳＰＡＧＥ图谱１：Ｍａｒｋｅｒ２；添加硝酸银处理的菌俾二次发歷液蛋白３：；；未经硝酸银处理的菌体二次发酵液蛋白＊－－Ｆ．ｉｉｅ３ｉｇ４１ＳＤＳＰＡＧＥｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｓｅｃｏｎｄａｒｙｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｌｉｕｏｒｒｏ化ｉｎｓａｍｌｅｓｏｆｓｔｒａｎｗｘｚＯｌｂｅｆｏｑｐｐ（）ａｎｄａｆｔｅｒ２）ｒｅａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＡＮ〇３（ｇ４．３．２Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子表面蛋白电泳结果分析ｇｇ为了验证Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的表面蛋白是否与其稳定性有关，使用８ｍｏｌ／Ｌ尿素和１％ＳＤＳ混合液对合成的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子进行处理并加热离必，收集上清ＳＤＳ－见图４－ＳＤＳ和液，通过ＰＡ畑电泳得到了清晰的蛋白条带２。图中显示经尿素变（）性处理的样品泳道２中出现了１条相对分子量约为８０ｋＤａ的蛋白条带，与经过硝酸银＇一１，浸泡菌体后新产生的蛋白条带其中条是致的，化对照样品没有该条带的出现说明相对分子量为８０ｋＤａ的蛋白质附着在Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子衷面，起到了很好的稳定作用＞Ａ／Ａｌ，获得。利用蛋白质变性的方法可ｙ使ｇｇＣ复合纳米粒子表面蛋白被分离下来纯度较好的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子，为Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的潜在应用提供重要参考。－３２－ ４Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子合成机理探讨及光催化活性研究＿１州白产］ｎ：二ｆｃａ－白？Ｓ§鍵ｒＰｉ＾５＿羞２５含感＇、＊■‘＂．，：．－．；２＿。心ｊ；、、，如－？／Ｖ号餐－令辦，？，．？齡心、－２Ａ／ＡＣ－ＰＡＧＥ阁４ｇｇｌ复合纳米粒子表面附着蛋白的犯Ｓ同谱＾－－ｆｉ．４２ＳＤＳＰＡＧＥｓｅｃｔｒｕｍｏｆｒｏｔｅｉｎａＵａｃｈｅｄｔｏＡ／ＡＣｃｏｍｏｓｋｅｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓｇｐｉｐｇｇｐｐ４．３．３硝酸还原酶活性（ＮＲＡ测定结果分析）菌株ｗｘｚＯｌ在加入不同化度硝酸锻溶液进行混含培养后，测定硝酸还原酶巧性ＮＲＡ－，结果见图４３。ＮＲＡ由高到１．Ｌ１ｍｍｏＶＬ和２由图可知，底依次是５ｍｍｏＩ／、（）ｍｍｏｌ／Ｌ。，ＮＲＡ逐浙增大，２４ｈｉ１３．２１函〇培养初期在酶活性最大值分另ｊ为１斷．．．／ｍｇｍｉｎ、１５．３２ｎｍｏｌＮ〇７ｍｍｉｎ口．１６ｎｍｏｌＮＣ／ｍｍｉｎ，此，随着培养时间增２ｇ和Ｖｇ后Ｎ〇，ｍｎ力口，ＮＲＡ呈现下降趋势，在７２ｈＮＲＡ降到最小值，分别为３．５２ｎｍｏｌ２７ｍｇｉ、．４．．２１ｎｍｏｌＮ〇７ｍｍｉｎ和２．６７ｎｍｏｌＮＣ／ｍｍｉｎ２ｇＶｇ，之后ＮＲＡ趋于稳定。Ｎ民为一ＮＲＡ随研究表明大多数底物诱导酶，定浓度的底物能诱导其基因的表这，－－着ＮＣＶ浓度增大而增大，但当ＮＣＶ浓度达到定的化后，加入菌液中的重金厲离子产生抑制作用，酶活性受到抑制。因此，ＮＲＡ由高到底依次是１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、１ｍｍｏｌ／Ｌ、２ｍｍｏ－ｌ／Ｌ。同时由图４３还可，，ｙ■看出随着诱导时问的延长酶巧性逐渐降低。这是因Ｎ民ｉｓｑ为很不稳定，在诱导条件下酪巧性增长很快，在非诱导条件下Ｎ民极易失活。－１８Ａ■１６ｆ白一￣１ｍｍｏ＾ＬＳ—■—１．５ｏｌ化ｍｍ－－Ｊ蓋＾１＾邀－２Ｉ■＞■＇＊０——￣—０２０４０６０８０１００培养时间（ｈ）凶４－３不同浓度硝酸银对硝酸还原酶活性ＮＲＡ的影响（）－３３－Ｉ 东北林业大学硕±学位论文＊ｉ４－ｆｎｔｒａｔＦ．３Ｅｆｅｃｔｓｏ出ｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｓｉｌｖｅｒｉｔｅｉｏｎＮＲＡｇｎｔｒａｃｏｎｃｅｏｎ４．．３４厌氧菌合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的机理探讨目前已有多种微生物被报道具有合成金属、非金属与金属复合纳米材糾的能力，但是这种复杂的生物反应机制尚不明确。普遍观点认为金属离子的还原是由微生物产生的酶所催化的，该过程与微生物活细胞的生物活性密切相关。Ｓｈａｈｖｅｒ出等研究发现多＋＋种细菌释放出的物质均对Ａｇ起还原作用，认为含硝基的还原酶可能参与了Ａｇ的还原１。Ｋａｌｉｍｕｔｈｉ严认为地衣芽抱巧茵细胞膜上存在的硝酸还原酶可Ｗ作为电子载体通过ＮＡＤＨ电子传递系统将电子传递给银离子，银离子获得电子被还原成纳米银。近几年来，国内外学者们利用细菌、真茵和酵母菌等多种微生物材料制备纳米银并对其合成机理进行了深入探讨，取得了丰硕的研究成果。然而，据报道只有极少数特殊的微生物在特定环境下能够合成Ａｇ和ＡｇＣｌ纳米粒子，大多数微生物不具有同时合成Ａｇ和ＡｇＣｌ纳米粒子的能力，关于其合成机理方面的研究尚处于初步探索阶段。菌株ｗｘｚＯｌ分泌物蛋白样品ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳结果显示经过靖酸银溶液处理后菌体一产生了两种新的蛋白，其中种是硝酸还原酶。由此，我们初步推测出Ｗ下合成机理：苗株ｗｘｚＯｌ在硝酸银的诱导下分泌出硝酸还原酶，溶液中的银离子在该酶作用下被还原成单质银一些大分子物质保护下，同时银离子在厌氧菌生长过程中释放的与胞外的，氯离子缓慢作用生成ＡｇＣｌ纳米粒子，Ａｇ纳米晶负载在ＡｇＣｌ上从而形成了Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子。表面蛋白电泳结果显示相对分子量为８０ｋＤａ的蛋白质附着在Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子表面，使制备的纳米粒子不易团聚，对提高Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的稳定性和分散性起着重要作用。４．３．５Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子光催化活性分析４－４３０ｍ－由图，反应ｉｎ达到吸附解吸平衡可＾看出１＾后甲基澄的浓度不再发生变化，说明甲基澄在黑暗环境中并未发生降解催化剂的甲基稽溶液在可见光照射下发；无生自降解，７０ｍｉｎ内降解率根据公式计算为４．１％；当在可见光下照射并且使用Ｐ２５作为催化剂时，甲基構的降解率提高到１０．２在可见光下照射并且添加Ａ／Ａ％ｌ复合；当ｇｇＣ纳米粒子时，甲基憧的降解率有了明显的提升，７０ｍｉｎ降解率达到９６％。结果表明，在可见光照射下－，Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子对甲基楼的降解有明显的促进作用，可作为种高效光俏化剂。－－，３４ ４Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子合成机理探讨及光値化活性硏究０－．８＼无光照无催化剂一—＼ｆ巧５＾——－０．６？Ａ／ＡｇｇＣＩ｜ｅ０．４－０－＼．２＼＼———————＿０ＩＩ—ＩＩＩ—１Ｉ—？Ｉ—ＩＩ—１—１ｉＺ—．００１０２０３０４０５０６０７０Ｔｉｍｅｍｉｎ（）间４－４甲基檀（ＭＯ光降解过程的浓度变化图）－ｄＦｉｇ．４４ＰｈｏＵ）ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆＭＯｄｙｅｕｎｄｅｒｖｉｓ化ｌｅｌｉ呂ｈｔｉｒｒａｉａｔｉｏｎＡ／ＣｌＳＰ民Ａ光催化剂降解ＭＯ的机理：在可见光的照射下ｇｇ，金属银由于效应在可见光区表现出强烈吸收，，Ａｇ原子吸收１个光子产生１个光生电子和空穴对。光生＋。电子巧递到银纳米粒子表面与溶液中的Ａｇ和〇２作用形成Ａｇ和化与此同时，光生＋０＋空穴ｈ巧递到ＡｇＣ，ｌ纳米粒子表面被Ａｇ与Ｃｒ俘获生成Ａｇ和州。如和０／是具有０强氧化活性的自由基，能够迅速氧化ＭＯ生成ｃ〇２和Ｈ２０，Ｃ１自身又被还原成ｃｒ，整８３个体系达到平衡［＾光化学反应过程如下：＊Ａ／Ａ＋一ｇｇＣｌ片Ｖｖｉｓ化ｌｅＡ／ＡｌＷ（）ｇｇＣ＇＊＋—Ａ／Ａｌ一Ａ／ＡｈＡ／ＡＣｅ２ｇｇＣｇｇＣｒｇｇｌ＋（）（）—＋ｅ〇一（３２Ｖ（）＋〇Ａｇ／Ａｇｃｒｈ＋ｃｒ一Ａ／ＡＣｌ＋Ｃｌ４（）ｇｇ（）〇＋Ｍ一＋Ｃ〇Ｃ１ＯＣ牛Ｈｒ２Ｏ（５）２４．４本章小结本章逝过聚丙稀醜氨凝胶电泳巧ＤＳ－ＰＡＧＡ／Ａ巧技术对ｇｇＣｌ复合纳米粒子的合成机理进行了初步探索，经。电泳实验结果巧明：与不加硝酸银洛液处理的蘭体发酵液相比过１ｍｍｏ，ｋＤａｌ／Ｌ硝酸银溶液浸泡处理的阐体发酵液中产生了两种新的蛋巧分别为８００ｋＤａ一ｌ和，其中，这ｚＯ１４种与文献中报道的硝酸还原酶相对分子量相同说明瞄株ｗｘ在硝酸银溶液中浸泡后产生了硝酸还原酶。由此推断Ａｇ／ＡｇＣｌ夏合纳米粒子的合成可能Ｎ化溶液引发的＇是由Ａｇ种诱导反应，菌株ｗｘｚＯｌ在硝酸银的诱导下分泌出硝酸还原酶，溶液中的银离子在该酶作用下被还原成单质银，同时银离子在厌氧菌生长过程中释？放的些大分子物质保护下ｌ纳米粒子，Ａ，与胞外的氯离子缓慢作用生成ＡｇＣｇ纳米晶－３５－？ 东北林业大学硕±学位论文负载在ＡｇＣｌ上从而形成了Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子。Ａｇ／Ａｇａ复合纳米粒子的表面蛋白经８ｍｏｌ／Ｌ尿素和１％ＳＤＳ混合液处理后分离下来，其相对分子量为８０ｋＤａ，与添加硝一酸银诱导处理后产生的其中１条蛋白条带是致的，表明８０ｋＤａ蛋白质是银离子诱导产生的与Ａｇ／ＡｇＣＩ复合纳米粒子稳定有关的表面蛋白。芭可Ｗ抑制Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的团聚，从而生成分散均匀、稳定性好的Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子。硝酸还原酶活性ＮＲＡ测定结果表明一：定浓度的硝酸银溶液能够诱导硝酸还原酶产生，ＮＲＡ随着（）’’Ｎ０浓度增大而増大一３，但当Ｎ０浓度达到定的值后，由于菌液中的重金属离子产生抑３制作用，ＮＲＡ受到抑制。本试验Ｗ甲基穫染料为研究对象，对Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的光催化活性进行研ｍ－。ｉｎ达究结果表明：反应３０到吸附解吸平衡Ｗ后甲基搭的浓度不再发生变化，说明甲基捲在黑暗环境中并未发生降解；无催化剂的甲基澄溶液在可见光照射下发生自降ｉ解，７０ｍｎ内降４．１％Ｐ２５解率为；当在可见光下照射并且使用作为催化剂时，甲基澄的降解率提高到１０．２％；当在可见光下照射并且添加Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子时，甲基澄的降解率有了明显的提升，７０ｍｉｎ降解率达到９６％。由此可见，在可见光照射下，－－？Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子能够作为种高效光催化剂，为开发Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子的应ｇｇ用价值提供了实验依据。－３６－ ５结论５结论５．１本研究结论（１）本试验选用大庆油田采油厂水处理站的含油污水水样作为实验样品，利用硝酸银浓度梯度法筛选出一株耐银的厌氧菌菌株，通过形态学Ｗ及分子生物学方法对厌氧菌进＇’行鉴定，确定该菌属于说ｒｒａｅ航ｒｓｐ．，并命名为Ｇｆｌｍｅ侃ｓｐ．ｗｘｚＯｌ。－巧Ｗ该厌氧菌作为微生物材料合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子，通过ＵＶｖｉｓ、ＸＲＤ、ＴＥＭ和ＨＲＴＥＭ等手段对合成的产物进行表征，证明合成了纯度高、单分散性？５０好、粒径分布在１０ｎｍ具有异质结构的球形或近球形复合纳米粒子。￣￣（３）合成反应发生的适宜温度范围在１５３７ｔ之间，培养基初始ｐＨ在６９范围之间，说明温度与阳是影响Ａ／ＡｇＣ／Ａｇｌ复合纳米粒子制备的重要条件。ＡｇｇＣｌ复合纳米粒子的转化率为７９．６８％，接近于目前化学方法合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子的转化率。４ＧｗｄｅＷｏｓ．ｗｘｚ０１经硝酸银溶液处理后产生了硝酸还原酶。相对分子量为８０（）ｐｋＤａ的蛋白质附着在Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子表和起到了很好的稳定作用。Ａ一（５）ｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子对甲基燈溶液有很好的降解效果，能够作为种高效可见光催化剂应用于光催化降解领域。５．２创新点１本课题选取油田污水水样作为实验研究对象，利用硝酸银浓度梯度法筛选出耐银（）的厌氧菌菌株，并Ｗ该厌氧菌作为微生物材料与硝酸银溶液混合培养合成Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子，为生物法合成Ａｇ／ＡｇＣｌ纳米复合巧料提供新种源。２本课题初步探讨了厌氧菌合成Ａ／ＡＣｌ复合纳米粒子的机理并对其光催化性能（）ｇｇ进行了研究，开发了生物法合成Ａｇ／ＡｇＣｌ纳米复合材料的新途径，为绿色环保的金属纳米复合材料的生物制备提供重要参考。氏３展望，关于生物制备金属纳米复合材料的报道较少，目前，因此使用更多新物种来合成金属纳米复合材料将是今后生物纳米科技研究的重点。本研究利用厌氧菌成功制备了Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子，但是，由于实验时间限制，关于其合成机理只进行了初步探？讨，还需运用化学和生物学方法从纳米水平与基因表达水平进步深入分析，只有研究清楚这种复杂的反应机制才能够实现对Ａｇ／ＡｇＣｌ纳米复合材料的形貌控制，进而按照人们的意愿合理选择不同的微生物材料，合成出在催化、能源、环保等领域具有重要应用前景的金属纳米复合材料。－３７－？ 东北林业大学硕±学位论文参考文献？：：山周全乾刘维轿．贵金属纳米材料．北京化学工业出版化２００８１４，尚通明，等Ｓｕ－ｉａｎａ．ＦｒｏｅｓＲＨｅｗｅｒｍａｌｌｌｅｒｕｃｔｕｒａｌＤｕｌＮｉｍａＣ．ＡＮＴｈＳｔａｂＳｔｅｘＴａＣ口］ｙｙ，ｙｐ？Ｎａｎｏｃｏｍｏｓｉｔｅ．Ｍｅｔａｌ．Ｔｒａｎｓ．１９９２Ａ２３：１０７１１０８１ｐ，ｆｅ－ｍｓｌｒａｚｅｎｄｕｎｓｎＮａｎｏｃｒｓｔａｉｎｅ３ＨａｇｄｔＡ．ＧｔｌＭ．ＬｉｈｔｉｃｅｄＲｅｄｏｘＲｅａｃｔｉｏｉｌｌＳｓｔｅ．［］，ｇｙｙＣｈｅｍｅｖ９５？：．Ｒ．１９９５４９６８，４ＰＹｎａ－］ｉｎＨｄｉａｉｓＱＣＭａｎｅｔｉｃｒｏｅｒｔｉｅｓｏｆＦｉｎｅＣｏｂａｌｔＰａｒｔｉｃｌｅｓＰｒｅａｒｅｄｂＭｅｔａｌ［ｇ，ｊｐｙｇｐｐｐｙＡ？ｔｏｍＲｅｄｕｃｔｉｏｎ，ＡＬＰｈｓ．１９９０６７：４５０２４５０８ｐｐｙ，ａ？５］ＢｌｌＰ．ＧａｒｗｉｎＬ．ＳｃｉｅｎｃｅａｔｔｈｅＡｔｏｍｉｃＳｃａｌｅ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９２３５５：７６１７６８［，，６Ｌｔ－Ａ．ＪｒａｔＳｉＴｈｅｉｉａｔｉｖｅＴｗｏＳｔ．Ｍ．ｅｅ．Ｃｈａｋｖａｒ．ＤａｍｃｓｏｆＤｓｓｓｔａｔｅｓｅｍ．Ｒｅｖｏｄ［］ｇｇ，ｙｙｎｐｙＰｈ？ｙｓ．１９８７巧：１８７，［７］Ｒ．Ｔｈｏｍａｓ，ＮａｉｒＡ．Ｒ，ＳｏｕｍｙａＫ．Ｒ．，ｅｔａｌ．ＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＡｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＳｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃＥｆｆ－－ｅｃｔｏｆＢｉｏｓｙｎ也ｅｓｉｚｅｄＡｇＮＰｓｗｉ化ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓＡｇａｉｎｓｔＭｕｌｔｉｄｍｇＲｅｓｉｓｔａｎｔＢｉｏｆｉｌｍＦｏｒＣｏａｓｅ－ＮｅａｔｔｅｃａａｍＡｍｉｎｇｕｌａｉｖｅＳｔａｈｙｌｏｃｏｃｃｉＩｓｏｌａｄｆｒｏｍＣｌｉｎｉｌＳｌｅｓ．ｐｐｌｉｅｄｇｇｐｐＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０１４，１７３口）：４４９＾６０［８］王脑，晏雄．纤维增强复合材料的特点及其在±木工程中的应用，玻璃钢／复合材料．＾２００５６：５４５６，（）－－９民巧８７％？．Ｒｏ．Ｃｅｒａｍｉｃｓｂ化ｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓｏｌｅｌｒｏ山ｅｓｃｉｅ打ｃｅ４８３４：１６６４１６６９［］ｙｙｇ．？２（），１０Ｏ．Ｇ．ＧｌｃｒｔｏｖＶ．Ｅ．ＺａｒｋｏＶ．Ｖ．Ｋａｒａｓｅｖ．Ｐｒｏｂｌｅｍｓａｎｄｒｏｓｅｃｔｓｏｆｉｎｖｅｓｔｉａｔｉｎｔｈｅ，，［］ｐｐｇｇｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｅｖｏｌ山ｉｏｎｏｆａｇｇｌｏｍｅｒａｔｅｓｂｙ化ｅｓａｍｌｉｎｍｅ化ｏｄ．ＣｏｍｂｕｓｔｉｏｎＥｘｌｏｓｉｏｎｐｇｐａｎｄ％？ＳｈｏｃｋＷａｖｅｓ．２０００１：１４６１５６，（）？１１张立德徐国财．．１．纳米复合材料北京：２００２：１６［］，化学工业出版社４？１２钱家盛何平望：．功能性緊合物基纳米复合材料．功能树料．２００３３４３７１３７４［，］，（）１３ＹａｎＪ．ＪａｃｋｉｅＹ．．．．Ｎａ打ｏｃｏｍｏｓｉｌ：ｅｓｏｆＡＳａｎｄＮｏｂｌｅＭｅｔａｌｓ．Ａｎｅｗ．ＣｈｅｍＩｎｔ．［］ｇ，ｐｇｓｇＥｄ２０？１１５０：４６３７４６４３，［１４］Ｐａｎ呂Ｍ．，ＨｕＪ．Ｙ．，ＺｅｎｇＦＬＣ．Ｓｙｎ化ｅｓｉｓ，ＭｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌＣｏｎｔｒｏｌ，ａｎｄＡｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌＰｒｏｅｒｔｉ．．ｉｅｓｏｆＨｏｌｌｏｗ／ＳｏｌｄＡＳ／ＡＨｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｓ．ＪＡＭ．ＣＨＥＭ．ＳＯＣ２０１０１３２：ｐｇｓｇ，？１０７７１１０７８５１ＹａｎＪｅ－５１ｔｔｔａＡｔ［．ＪａｃｋｉＹ．．民ｏｏｍ：ｅｍｅｒａｕｒｅｓｎｈｅｓｉｓｏｆｎａ打ｏｃｒｓｌｌｉｎｅＳａｎｄｉｓ］ｇ，ｐｙｙｇｓｎａｎｏｃｏｍ？ｏｓｉｔｅｓｗｉ化ｏｌｄｈＣ．．Ｃｅｍ．ｏｍｍｕｎ２００９２２：３１８７３１８９ｐｇ，－１６ＹａｎＪ．ＬｉｕＨ．ｏｓｉｔｅｓｏｆＭｅｔａ．ＮａｎｏｃｏｍｌＯｘｉｄｅｓａｎｄＮｏｂｌｅＭｅｔａｌｓ．ＭｅｔａｌＢａｓｅｄ［］ｇ，ｐ？ｏｓｔ．５Ｃｏｍｉ化Ｎａ打ｏｍａｅｒｉａｌｓ２０１５１：１６１９７ｐ，１７Ｓ．Ｋ．ＧｈｏｓｈＴ．Ｐａｌ．ＩｎｔｅｒａｒｔｉｃｌｅＣｏｕｌｉ打ＥｆｅｃｔｏｎＳｕｒｆａｃｅＰｌａｓｍｏ打民ｅｓｏ打ａｎｃｅｏｆＧｏｌｄ［］，ｐｐｇ—ＮａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓＦｒｏｔ．１；ｍＴｈｅｏｒｏＡｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ２００７１０７１；４７９７４８６２ｐｙｐｐ，（）－３８－ 參考文献－［１８］ＲＪａｉｎＸ．吐ＨｕａｎＩ？比？Ｅｌｓａｅｄ，ｅｔａｌ．ＮｏｂｌｅＭｅｔａｌｓ０打化ｅＮａｎｏ％ａｌｅ：Ｏｔｉｃａｌａｎｄ，ｇ，ｐｙｐＰｈｏｔｏｔｈｅｒｍａｌＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄＳｏｍｅＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｉｎＩｍａｇｉｎｇＳｅｎｓｉｎ巧ｉｏｌｏａｎｄ，ｇ，ｇｙ，ｃｅ？Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｈｅｍ．ｅｓ．８１１２：１Ａ．Ｒ２００４（）５７８１５８６，Ｉ打ｔｔｔＡ－ｏｗ９义ＢｉＪ．Ｙｅ．ｓｉｕｏｘｉｄａｉｏｎｓｎｈｅｓｉｓｏｆＡ／ｌｃ〇ｊ：ｅｓｈｅＵｎａｎｉ巧ｓａｎｄｔｈｅｉｒ。］，ｙｇｇＣｈｏ化ｃ？ｌｉｃｒｏｅｒｔｉｅｓ．Ｃｈｅｍｏｍｍｕｎ．２００９：６５１６５５３ｐａｔａｙｔ．Ｃ（４３５ｐｐ）２０李秀化斬云霞于鹏飞Ａ￣．Ａ／Ｃｌ／Ａ３Ｐ〇４复合材料的沉淀转换光还原法制备及［］ｇｇｇ？．化工新型材料０１４４２：光催化性能研究．２４５５９，（１１）２１Ｂ．Ａ．Ｓｎｏｏｋ．Ｔｈｅｏｒａ打ｄＰｒａｃｔｉｃａｌＡｌｉｃａｔｉｏ打ｏｆＳｕｒｆａｃｅＰ打Ｒｅｓｏｎａｎｌａｓｍｏｃｅｆｏｒ［］ｐｙｐｐＡｎ？ａｌｙｔｉｃａｌＰｕｒｐｏｓｅｓ．ＴｈｅｏｒｅｔｉｃａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ．２０１２，４８口）：２８３３０６刘鸣华一２＾朱明山．银／窗化银：类新型等离子体光催化訊化学进胶２０１３，［，陈鹏露－２５２＾／３：２１０２２０（）［２３］Ｄｏｎｇ民Ｆ，ＴｉａｎＢＺ，Ｚｅ打ｇＣ乂ｅｔａｌ．ＥｃｏｆｒｉｅｎｄｌｙＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄＰｈｏｔｏｃａｔａｌｙｔｉｃＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＵｎｉｆｂｒｍＣｕｂｉｃＡＡＣｌＰｌａｓｍｏｎｉｃＰｈＭｏｃａｔａｌ巧．１ｇ＠ｙ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．ＣｈｅｍＣ．２０１３１７１：ｇ，（）２？１３２２０２４赵丹华余黛媚林云．二师．广东第［］，纳米材料在染料废水处理中的研究进展综述，３４？范学院学报：６０．２０１４５６６，（）２５］李凤生，杨毅马振叶等．功能纳米复合材料及应用．北京：国防工业出版社．２００３：［，，２＾８４２８９［２巧ＷａｎｇＲ，ＨｕａｎｇＢ．，ＱｉｎＸ＂Ａｇ＠ＡｇＣｌ：Ａｈｉｇｈｌｙｅｆｉｃｉｅｎｔａｎｄｓｔａｂｌｅｐｈｏｔｏｃａｔａｌｙｓｔａｃｔｉｖｅ？ｕｎｄｅｒｖｉｓ化ｌｅｌｉｈｔ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００８１２０４１：８０４９８０５１ｇ，（）［２７］ＬｉａｎｇＹＨ，ＬｉｎＳＬ，ＨｕＪＳ，ｅｔａｌ．ＦａｃｉｌｅｈｙｄｒｏｔｈｅｒｍａｌｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｎａｎｏｃｏｍｐｏｓｉｔｅＡｇ＠ＡｇＣｌ／Ｋ；２Ｔｉ４〇９ａｎｄｐｈｃｒｔｏｃａｔａｌｙｔｉｃｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｕｎｄｅｒｖｉｓｉｂｌｅｌｉｇｈｔｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ－？ｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＣａｔａｌｓｉｓＡ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ．２０１４３８３３８４：２３１２３８ｙ，（）２８－ＳｈｕＪ．Ｘ．Ｗａｎ．？ａ．＂ｏｔｎｔｈｅｓｓｏｆＡＡｒｉｄｈｏ１；ｏｃａｔａｌｓｔ［］，ｇＺＨ，沿ＧＯｎｅｐｓｙｉｇＣｌｇｈｙｂｙＱ＠ｐｗｉｔｈｈｉｇｈｐｈｏｔｏｃａｔａｌｙｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｐｈｏｔｏｓｔａｂｉｌｉｔｕｎｄｅｒｖｉｓｉｂｌｅｌｉｈｔａｎｄｓｕｎｌｉｈｔｙｇｇ？ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ．ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＪｏｕｒｎａｌ．２０１４２５２：３７４３８１，［２９］ＷａｎｇＲ，ＭｉｎｇＴ．Ｓ．，ＷａｎｇＧＨ．ＣｏｃａｔａｌｙｓｔｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｎａｎｏｎｉｚａｔｉｏｎｏｆＡｇ／ＡｇＣｌｐｈｏｔｏｃａｔａｌｙｓｔｗｉ也ｅｎｈａｎｃｅｄｈｏＵ）ｃａｔａｌｔｉｃｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＣａｔａｌｓｉｓＡ：ｐｙｐｙｅｍｃａ２０４？Ｃｈｉｌ．１３８１：１１４１１９，（）３０ＳｅｈｕｕｌｍａｎＪＨ，ＳｔｏｅｅｋｅｎｉｕｓＷ，ＰｒｉｎｃｅＬ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｂ［］ｙ？ｅｌｅｃｔｒｏｎｓｉｏｎｓｍ．．１ｍｉｃｒｏｅｎｍｌｉｃｒｏｓｃｏ．ＪＰｈｓ．Ｃｈｅｍ９５９６３：１６７７１６８３ｐｙｙ，－３１ＺｈｕＭ．ＣｈｅｎＰ．ＬｉｕＭＡ．．ＳｕｎｌｉｈｔＤｒｉｖｅｎＰｌａｓｍｏｎｉｃＰｈｏｌ；ｏｃａｔａｌｓｔｓＢａｓｅｄｏｎ／ＡＣｌ［］，，ｇｙｇｇａｎＯ——ｍＮａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｓｉｚｅｄｖｒｅｄ；ＥｎｈａｎｃｅｄＣａｔａｌｔｃＳｙｎｔｈｅｉａｉｌｉｎＷａｔｅＭｉｕｙｉ？ｈｏｌｏＳｅｌｅｃｔｉｏｎＪＭ．１２１４ＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｂＭｏｒ．．ａｔｅｒＣｈｅｍ．２０１：．１６１３１６４１９ｙｐｇｙ，［３２］ＺｈｕＭ．，Ｃｈｅ打Ｒ，ＬｉｕＭ＂Ａｇ／ＡｇＢｒ／Ｇｒａｐｈｅ打ｅＯｘｉｄｅｎａｎｏｃｏｍｐｏｓＵｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｖｉａｏｉｌ／ｗａｔｅｒａ打ｄｗａｔｅｒ／ｏＵｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎｓ：ａｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｓｕｎｌｉｇｈｔｅｎｅｒｇｉｚｅｄｐｌａｓｍｏｎｉｃ３９ 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參考文献ａｎｄｔｈｅｉｒｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｍｃｅｌｉａｌｍａｔｒｉｘ：ａｎｏｖｅｌｂｉｏｌｏｉｃａｌａｒｏａｃｈｔｏｙｇｐｐｎａｎｏａｒ？ｔｉｃｌｅｓｎｔｈｅｓｉｓＮａｎｏＬｅｔｅｒｓ．２００１１０：５１５５１９ｐｙ，，。）４９ＲＭｕｋｈｅｉｅｅＡ．ＡｈｍａｄＤ．Ｍａｎｄａｌ巧ａｌ．ＢｉｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆＡｕＣＬＴｉｏｎｓｂ也ｅｆｕｎｕｓ［］ｊ，，，ｙｇ，Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｓｐ．ａｎｄｓｕｒｆａｃｅｔｒａｐｐｉｎｇｏｆｔｈｅｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｒｍｅｄ，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ？ＣｈｅｍｉｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＥｄｉｔｉｏｎ．２００１４０巧：３５８５３５８８，（）［５０］Ｐ．Ｍｕｋｈｅｑｅｅ，Ｓ．Ｓｅｎａｐａｔｉ，Ｄ．Ｍａｎｄａｌ，ｅｔａｌ．ＥｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＧｏｌｄＮａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｂｙｔｈｅＦｉｉｎｇｕｓＦｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２００２，３（５）：４６？１４６３［５１］Ｎ．Ｖｉｇｎｅｓｈｗａｒａｎ，Ｎ．Ａｓｈｔａｐｕｔｒｅ，Ｐ．Ｖａｒａｄａｒａｊａｎ，ｅｔａｌ．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｉｌｖｅｒｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｕｓｉｎｇｔｈｅｆｕｎｇｕｓＡｓｐｅｒｇＵｌｕｓｆｌａｖｕｓ．ＭａｔｅｒｉａｌｓＬｅｔｅｒｓ．２００７，６１（６）：？１４１３１４１８［５２］李广泉．±曲霉介导的纳米材料生物还原制备及其应用硏究．吉林大学博±论文．２０？１２：３１４７－５３Ｊ．ＧａｒｄｅａＴｏｒｒｅｓｄｅＪ．ＰａｒｓｏｎｓＥ．Ｇｏｍｅｚ巧ａｌ．ＦｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｒｏｗｔｈｏｆＡｕ［］ｙ，，，ｇｖ？ｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓｉｎｓｉｄｅｌｅａｌｆａｌｆｋｌａｎｔｓ．ＮａｎｏＬｅｔｔｅｒｓ．２２４：３９７４０１ｐｉｐ００２，（）５４ＶｏｎａｔｈｒｓＮ．ｅｅｒａａｄｈａｅａ．Ｂｏｅｎｃｓｎｔｈｅｓｓｏｆ．ＧｐｉＳ．ＰｒｉａｄａｈｉｎｉＭＰｒｉｒｓｓｈｉｎｉｔｌｉｉｉ［］，ｇｙ，ｙｙ，ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｓｉｌｖｅｒｃｈｌｏｒｉｄｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｕｓｉｎｌｅａｆｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＣｉｓｓｕｓｕａｄｒａｎｕｌａｒｉｓＬｉｎｎ．ｇｑｇ？ＭａｔｅｒｉａｌｓＬｅｔｔｅｒｓ：．２０１３９１２２４２２７，Ｍ－－－Ａ５５ＶｉＵＩＭ．民Ａ．ａｎｕｅｖａｂａｎｅｚａＧ．ＹａｎｅｚＣｍｚａ？ｌｖａｒｅｚＧａｒｃｉａａｅｔａｌ．ｕｅｏｕｓｃｏｍｈｕｓｋ［］，，，ｑｅｘ－ｔｒａｃｔｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｅ打ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＡｇＣＩａｎｄＡｇ打ａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓ．ＭａｔｅｒｉａｌｓＬｅｔｔｅｒｓ．２０１５ｇｐ，？１５２：１６６１６９５６于兵川．２００５．．［］，吴洪特张万忠光催化纳米材料在环境保护中的应用石油化工，，４３５？：４９１４９５（）５７王朋？？Ａ．／Ｔｉ，杨穆，彭超豪溶剂热法步合成化核壳纳米材料及其光催化性能研［］ｇ？１究？功能材料．２０１４４５１：２０４７１２０５０，（巧５８．林禅ＴＫ）２纳米材料的制备、改性及其光催化性能研究．中国海洋大学博±论文．［］２０１４？１３：３０５９董如林刘淑赞栋等．Ｔｉ〇薄膜．应用［］，，陈智，微乳／水热法制备具有自清洁功能的２２０１３？化学．３０：％８９４３，巧）［６０］Ａ．Ｆｕｊｉｓｈｉｍａ，Ｎ．民ａｏＴａｔ；ａ，Ａ．ＴｒｙｋＤｏｎａｌｄ．Ｔｉｔａｎｉｕｍｄｉｏｘｉｄｅｐｈｏｔｏｃａｔａｌｙｓｉｓ．Ｊ．？化ｏｔｏｃｈｅｍ．ＰｈｏＵ）ｂｉｏｌ１１．Ｃ．２０００１：１２，（）［６１］ＬｕｏＧ．，ＪｉａｎｇＸ．，ＬｉＭ．ＦａｃｉｌｅＦａｂｒｉｃａｔｉｏ打ａｎｄＥｎｈａｎｃｅｄＰｈｏｌ；ｏｃａｔａｌｙｔｉｃＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆＡＡ？Ａｇ／ｇＣｌ／ｒＧＯＨｅｔｅｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅＰｈｏｔｏｃａｔａｌｓｔｌ．Ｍａｔｅｒ．Ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ．２０１３５：２１６１２１６８ｙｐｐ（）６２ｉＬ．ｕＪ．ｉｕ．ｔｈｅｓｉｓａｎｄｈｏｔｏｃａｔａｌｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｏｆｌａｓｍｏ打ｉｃＡＡＣｌ［］Ｑ，Ｙ，ＬＧＳｙｎｐｙｙｐｇ＠ｇ？ｃｏｍｏｓｉｔｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｏ打ｔｉｔａｎａｔｅｎａｎｏｗ．ＴｐｉｒｅｆｉｌｍｓＣａｔａｌｙｓｉｓｏｄａｙ．２０１４２２４：１９３１９９（）６３胡荣，任志敏，陈超．超声微乳液法制备Ａｇ／ＡｇＣｌ复合纳米粒子及其光催化性能硏［］－４－１ 东化林业大学硕±学位论文？究．材料导报Ｂ．２０１２２６２：２７２９，（）孔祥正／－［６４王金刚姬平利．共沉淀法制备ＡＡｇＣｌＴｉ〇２空也复合纳米微球及其光催］，，ｇ￣化性能．高等学校化学学报．２０１３３４：２６３５２６４３，６５杨霞．［］．高效棉酪降解菌株的筛选鉴定及其差异蛋白质组学研究．浙江大学博±论文２０－１１：３７３９？６６范秀祭李广武微生物学实验：：沈萍．北京高等教育出版化２００４２１０２２４［］，［６７］马放，任南琪，杨基先．汚染控制微生物学实验．哈尔滨：哈尔滨工业大学出版社，２００２－：６８８４［６８］布坎南艮Ｅ，吉布斯Ｅ化伯杰氏细菌鉴定手册（第八版）．北京：科学出版社．１９８４：－７６０７９０６９Ｍ．Ｆ．Ｌｅｎｋｅ，Ｍ．Ｅ．ＦｌｅｅｔＧｏｕｈａｍ．Ｂｉｏｓｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｉｌｖｅｒｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓｂｙ［］ｇ，．ＳｔｙｐＦｉｌａｍｅｎｔｏｕｓｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍａｓｉｌｖｅｒ（Ｉ）ｎｉｔｒａｔｅｃｏｍｐｌｅｘ．Ｌａｎｇｍｕｉｒ．２００７，２３（５）：２６９４－２６９９ｏｔｈｅｓｅ－［７０］ＷｅｉＸＴＬｕＭＦＬｉＷ．Ｓｙｎｉｓｏｆｓｉｌｖｒｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓｂｙｓｏｌａｒｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｆｒｅｅ，，ｐＢａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓｅｘｔｒａｃｔｓａｎｄＡｇＮ〇３，ＢｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２０１２，１０３（１）：２７？３２７８－Ａ７１ＹａｏＸ．ｔｃａｔａｌ．ＸＬｉｕＸ．Ｈ．ＺｈｕＤ．．ＳｎｈｅｓｉｓｏｆｃｕｂｅｌｉｋｅＡ／Ｃｌｌａｓｍｏｎｉｃｐｈｏｔｏｙ巧［］，，ｙｇｇｐｗｉｔｈｅｎｈａｎｃｅｄ＼ｄｓｉｂｌｅｌｉｈｔｈｏｔｏｃａｔａｌｔｉｅａｃｔｉｖｉｔ．ＣａｔａｌｓｉｓＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ．２０１５５９：ｇｐｙｙｙ，？１５１１５５［７马ＷａｎｇＰ．，ＨｕａｎｇＢＸ．，Ｑｉｎ义Ｙ．Ａｇ＠ＡｇＣｌ：ＡｈｉｇｈｌｙＥｆｉｃｉｅｎｔａｎｄＳｔａｂｌｅｂ抑ｏｔｏｃａｔａｌｙｓｔＡｃ？ｔｉｖｅｕｎｄｅｒｉｓｉｂｌｅｉｈｔ．ｈａｎｏｅｗｈｅｍｎｔ．Ｅｄ．．２００８４：７９１７９３３ＶＬＷｇｂＡｎｇ．Ｃ．Ｉ７３ｇ，，王勇董英．７３王利群．硝酸盐对硝酸还原酶巧性的诱导及硝酸还原酶基因的克隆［］，，生物工程学报９５￣：６．２０１３１３２６３４，（）７４刘卿．［］．反硝化菌ＤＮＦ４０９中硝酸还原酶基因敲除的研究．华中农业大学博±论文２００８－１１：９７５吴伟刘道玉巽建宏．脱氮副球菌硝酸盐／亚硝酸盐还原酶的活性变化及对养殖水［］，，２４４￣１体中无机氮素的转化．农业环境科学学报．２０１３３２６：１２巧，（）－７６ＺｈｏｕＪ－．Ｂ．ＣｈｅｎＹ．ＹｕＪ．Ｇ．Ｐｅａｒａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃ化ｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｖｉｓｉｂｌｅｌｉｈｄｒｉｖｅｎ［，ｒ］ｇ，ｐｇｐｌａｓｍｏｎｉｃｐｈｏｔｏｃａｔａｌｙｓｔＡｇ／ＡｇＣｌ／Ｔｉ〇２ｎａｎｏｃｏｍｐｏｓｈｅｔｈｉｎｆｉｌｍｓ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ＾￣化ｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒａｎｄＩｈｏｔｏｂｉｏｌｏＡ：Ｃｈｅｍｓｔｒ．：８７ｙｇｙｉｙ２０１１２２３８２，［７７］规乾任志觀陈疆王智宇．超声微乳液法制备Ａｇ／ＡｇＱ复合纳米颗粒及其光催化性能研究￣２９．材料导报Ｂ．２０１２２６２７，口［７８］朱高升，吕胜鹏，黄占华．真菌纤维／硫化賴复合纤维材料及其光催化性能研究．功５？能材料４６３：０３０８３０３０８５．２０１，（）［７９］Ｌ．Ｐｈｉｌｉｐｐｏｔ，Ｐ．Ｍｉｒｌｅａｕ，Ｓ．Ｍａｚｕｒｉｅｒ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓｄｅｎｉｔｒｉｆｉｎｃｌｕｓｔｅｒｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｔｈｅｎａｒｎｉｒｎｏｒａｎｄｎｏｓｅｎｅｓ．ｇ，ｙｇ，ｇ－４２－， 参考文献Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔ目ｉｏｈｓｉｃａＡｃｔａ．２００１１５１７：４３６＾４０ｐｙ，＋［８０］封克．水稻苗期不同时段ＮＣＶ吸收特点及其受ＮＨ４的影响．中園农业科学．７？２００３３６３：３０３１２，（）ｎＳ－８１ＳｈａｈｖｅｒｄｉＡ？民？Ｍｉｎａｅｉ．ＳｈａｈｖｅｒｄｉＨ？民？？ＲａｉｄＳｎｔｈｅｓｉｓｏｆＳｉｌｖｅｒＮａｎｏＣｒｓｔａｌ［］，ａ，ｐｙｙＵｓＮｏｖＡ－ｉｎｇＣｕｌｔｕｒｅＳｕｅｒｎａｔａｎｔｓｏｆＥｎｔｅｒｏｂａｃ１：ｅｒｉａ：ａｅｌＢｉｏｌｏｉｃａｌｒｏａｃｈ．ＰｒｏｃｅｓｓＢｉｏｐｇｐｐＣｈｅｍ－．２００７４２：９１９９２３，巧２］Ｋ．Ｋａｌｉｍｕｔｈｕ，ＳｕｒｅｓｈＢａｂｕ艮？，ＶｅｎｋａｔａｒａｎａｎＤ＂ＢｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｉｌｖｅｒｎａｎｏｃｒｙｓｔａｌｓｂｙＢａｃ？ｉｌｌｕｓＨｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ．ＣｏｌｌｏｉｄｓＳｕｒｆ化Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ．２００８６５：１５０１５３，（１）８３．商化银／导电高分子复合纳米材料的合成及光催化性能研究谷淑娜．华东理工大学［］？博±论文．２０１１：１６１８－４３－ 攻读学位期间发表的学术论文攻读学位期间发表的学术论文叫张杰，王娇，崔程带张恥类庶张国财．北虫草特色酱油的发酵工艺安徽农业科学２０￣１４４２２１：７１８４７１８６，，（）２一一，熊文［］张杰，张映，王娇杨洪王滨松．株还原制备纳米银的细菌菌株ｚｘｗＯｌ，，的分离鉴定．湖南农业大学学报，２０１５４，３王滨松王娇张映熊文崔巧宗一［］张杰．种利用芽抱杆茵体内还原制备纳米银颗，，，，，粒的方法．国家发明专利（公开）杰王滨松张映一．Ｗ］张，王娇文株可Ｗ还原制备纳米银的解淀粉酶芽抱杆，，熊菌．国家发明专利公开（）－４４－ 致谢致谢本论文的工作是在我的导师张杰副教授的悉也指导下完成的，导师渊博的学术知识、忘我的王作热情、严谨的治学态度、高度的敬业精神给予我极大的帮助和影响，导师不仅Ｗ她的言行教会我如何做学问，也教我懂了很多做人的道理。在此论文完成之际！，谨向辛勤培育我的导师致Ｗ衷也的感谢和诚挈的敬意感谢王滨松老师在实验中给予的悉也指导，使我渐渐掌握科学思考和解决问题的方法一，令我终生受益。感谢赵敏老师、杨洪老师和狂春蕾老师教授我们现代微生物学理论知识和相关实验技术，同时感谢实验室各位师兄师姐对我的指导和帮助。特别感谢本课题组张映同学和熊文同学的密切配合和无私帮助，感谢你们在学习和生活上对我的支持和鼓励，同时感谢微生物２级全体硕±同学为实验室创造良好的学１术氛围，身在这个团结友爱的集体中我感到非常荣幸，也非常感谢王靖瑶、田郭顺、张吴、张帅、毕男、崔晓磊、李凡妹等同学Ｈ年来的支持和陪伴，与你们度过的日子让我终身难忘。一最重要的感谢是我的父母及家人，感谢你们直Ｗ来默默的理解与支持，你们的殷一直是我努力奋斗的全部动力和来源切期望。最后祝愿所有的老师和同学也想事成，在事业上取得更大的成就！－４５－ 独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研。究成果据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不巧含为获得东北林业大學或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。■学位论文作者签名：签字日期：如／ｉ年／月／么日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解东北林业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权东北抹业大学可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：至导师签名：旅ｔ气签字日期：月日签字日期：年日Ｗｆｒ年／／文心处＾月么学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：：邮编通讯地址：
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