利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统表达人生长激素的研究

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1、ＤＡＬＩＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ工睡倾士室位花文ＭＡＳＴＥＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ‘義ｒ利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统表达人生长激素的研究工程领域生赃胃？Ｌｆｔ作者姓名—李文利副教授——指导教师２０１５年６月答辩日期专业学位硕士学位论文利用柞香核型多角体病毒表达载体系统表达人生长激素的研究ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨｕｍａｎＧｒｏｗｔｈＨｏｒｍｏｎｅｇｅｎｅｉｎＡｎｔｈ

2、ｅｒａｅａｐｅｒｎｙｉＰｕｐａｂｙＡｎｔｈｅｒａｅａｐｅｒｎｙｉＮｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓＥｘｒｅｓｓｉｏｎｐＶｅｃｔｏｒＳｙｓｔｅｍ作者姓名：叶博工程领域：生物工程学号：４１３１８０２６指导教师：李文利：完成曰期ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内

3、容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果一。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处。，本人愿意承担相关法律责任学位论文题目：利用杵香核塑多角体病毒表达载体系统表达人生长激素的研究ｖｉｆ作者签名：日期：年（月／丨曰大连理工大学专业学位硕士学位论文摘要一柞蚕核型多角体病毒一（ＡｐＮＰＶ）属昆虫杆状病毒，可专性感染柞香。利用这特点研发的Ａ

4、ｐＮＰＶ表达载体系统已在柞蚕踊中成功表达绿色荧光蛋白基因，但尚没有表达具有生物学活性的蛋白的报道。本实验首次利用柞蚕核型多角体病毒（ＡｐＮＰＶ）表达载体系统分析人生长激素基因ａｇｈ）在柞蚕踊体中的表达。构建了转移表达载体＋ＡＭＢＥ／／７／７－ＤＮＡｐｐ７４８ｇ，将转移表达载体质粒ＤＮＡ与病毒ＡｐＮＰＶｚｌ／＾／ｚ／ｅｇ汝基因组共转染樗蚕－（Ｐｈｉｈｓａｍｉａｃｎｔｈｉａｍ？ｃ）培Ｐｃ０１，用末端稀释法蹄选获得重组病毒ｙ，养细胞＾－ＡＮＦＹ－Ａｐｈ／Ａ／ｈｃｅ，ｅｓｔｅｍｂｌｏｔ

5、和ＥＬＩＳＡ方法检ｐｇｆｐｇｈ将该重组病毒感染柞蚕踊采用Ｗ测分析人生长激素蛋白（ｈＧＨ）在柞香踊中的表达，结果显示：在柞蚕踊感染重组病毒＋－ＡｐｈＡｅｇ？？Ｖ／／ｈｇｈ后第１天，ｈＧＨ就有明显的表达感染后１３１４天蛹体液中的例ｆｐ；ｈＧＨ含量保持较高水平，感染第１５天至２０天，仍可以检测到ｈＧＨ的表达，但表达产物出现降解现象；重组ｈＧＨ最高表达量可达２５１．１８＿ｉ／ｍＬ柞蚕踊体液。用活化的人红｜ｇ白血病细胞ＩＣ５６２测定重组ｈＧＨ的体外活性，检测结果显示柞蚕蛹表达重组ｈＧＨ对

6、人红白血病细胞Ｋ５６２具有明显的促进增殖作用，。对重组ｈＧＨ进行了初步分离操作确定重组ｈＧＨ的最佳硫酸按盐析浓度为３５％。验证了利用免疫亲和层析从感染了重组柞香核型多角体病毒的柞香蛹体内分离纯化重组ｈＧＨ的可行性。本实验利用蚕踊高效表达有生物活性的ｈＧＨ，为拓展柞蚕＿的应用领域，开发基于ｈＧＨ的药品和保健品打下了良好的基础。关键词：梓蚕踊；核型多角体病毒表达载体系统；人生长激素；－－Ｉ利用柞蚕核型多角体病毒表达载体系统表达人生长激素的研究Ｅｘｒｅｓｓｉｏｎ

7、ｏｆＨｕｍａｎＧｒｏｗｔｈＨｏｒｍｏｎｅｅｎｅｉｎＡｎｔｈｅｒａｅａｅｒｎｉＰｕａｂｐｇｐｙｐｙＵｓｉｎｇＡｎｔｈｅｒａｅａｅｒｎｉＮｕｃｌｅｏｏｌｅｄｒｏｖｉｒｕｓＥｘｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔｏｒＳｓｔｅｍｐｙｐｙｈｐｙＡｂｓｔｒａｃｔＡｎｔｈｅｒａｅａｅｒｎｉｎｕｃｌｅｏｏｌｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓＡＮＰＶｉｓａｓｅｃｉｅｓｏｆｔｈｅｉｎｓｅｃｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｐｙｐｙ（ｐ）ｐｔｈｔａｔｃａｎｉｎｆｅｃｔｔｈｅｔｕｓｓａｈ

8、ｕａｗｉｔｈｈｉｈｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔ．ＴｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓｓｅｍｈａｓｂｅｅｎｐｐｇｙｐｙｄｅｖｅｌｏｐｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｉｓｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｆｅｃｔｉｎｇｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｏｆＡＮＰＶａｎｄｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙａｌｉｅｄｔｏｐｐｐｅｘｐｒｅｓｓｔｈｅｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｒｏｔｅｉｎｅｎｅｉｎｔｕｓｓａｈｕａ．Ｗｈｉｌｅ，ｔｈｅｒｅｉｓｎｏｌｉｔｅｒａ