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1、中图分类号：Q6-3单位代码：10660UDC：616-097学号:10660S120040学科专业代码:0710密级：公幵贵阳医学院2015届硕士学位论文(科学学位）'生理层流剪切力对树突状细胞免疫功能的影响Theeffectofphysiologicallaminarshearstressontheiimnunefunctionofdendriticcells研究生:董蓉导师：曾柱教授张春林教授年级:2012级专业：细胞生物学二◦一五年五月贵阳医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指
2、导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属贵阳医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。^lS年月0曰~)wlt__年二月攻日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借
3、阅。本人授权贵阳医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“V”）：1、保密□,在年解密后适用本授权书。2、不保密dk年r月>>曰lnS年S取；日究生院存档。中图分类号：Q6-3单位代码：10660UDC：616-097学号：10660S120040学科专业代码：0710密级：公开贵阳医学院2015届硕士学位论文（科学学位）生理层流剪切力对树突状细胞免疫功能的影响Theeffectofphysiolo
4、gicallaminarshearstressontheimmunefunctionofdendriticcells论文作者：董蓉指导教师：曾柱教授张春林教授申请学位：理学硕士培养单位：基础医学院学科专业：细胞生物学研究方向：树突状细胞的力学免疫学研究研究起止日期：2013年7月至2015年1月论文评阅人：禹文峰教授姚伟娟副教授答辩委员会主席：袁军主任技师论文答辩日期：2015年5月22日二〇一五年五月生理层流剪切力对树突状细胞免疫功能的影响专业：细胞生物学硕士研究生：董蓉导师：曾柱教授张春林教授【摘要】树突状细
5、胞（dendriticcells,DCs）被认为是目前功能最为强大的抗原递呈细胞，在启动和放大固有免疫和适应性免疫应答方面发挥着关键作用。在发挥免疫学调节功能的整个过程中，DCs都始终遭受来自血流、组织间液和淋巴流等的剪切力（shearstress,SS）作用，而DCs对生理液流SS的应答还不得而知。因此，本研究的目的是探讨生理层流SS对DCs免疫学功能的影响，以期进一步深入理解DCs的生物学功能。方法:外周血单个核细胞来源的单核细胞，经重组人白介素-4（recombinanthumaninterleukin-4
6、,rhIL-4）和重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinanthumangranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor,rhGM-CSF)诱导获得未成熟DCs(immaturedendriticcells,imDCs)，再经重组人干扰素-γ（recombinanthumaninterferon,rhIFN-γ）和脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导获得成熟DCs（maturedendriticcells,mDCs)。2用椎板剪切仪给D
7、Cs加载1、5、10、15dyn/cm的SS，作用1、3、6、12小时后在光学显微镜下观察DCs形态和检测DCs的细胞骨架F-actin的分布。用FITC标记的右旋糖苷与DCs共孵育，以检测DCs抗原吞噬能力。应用流式细胞术检测DCs的表型CD11c,CD40,CD80,CD83,CD86,CCR7,CD1a,CD205和HLA-DR的表达，流式细胞术检测DCs表面粘附分子CD18,CD11a,CD54,CD62P和CD106表达。用芯片技术检测DCs的microRNA、mRNA和lncRNA表达谱，实时荧光定量
8、PCR(Real-timeqPCR)验证芯片的结果。结果：加载SS后，DCs的形态发生明显变化，与对照组相比较，剪切力使细胞明显变小、突起减少，细胞直径明显变小（P<0.05），DCs的细胞骨架（F-actin）发生了重组;细胞的抗原吞噬能力下降（P<0.05）；DCs的表面分子CD1a,CD11c,CD40,CD80,CD83,CD86,CCR7,CD205和HLA-D
