藏红花悬浮培养产物的分离提取、分析及抗氧化活性研究

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1、ExtractionofSaffronsuspensioncultivatemetabolites，analysisandantloxidantactivityl●-●■'●Dissertal：ionSubmittedtoNanjingUniversityofTechnologyinpartialfulfillmentofrequirementforthedegreeofMasterofMedicineBvPinmeiⅥUSupervisors：Prof．LihongYUANApril2012硕士学位论文摘要现代药理学研究表明：藏红花提取物及

2、其提纯组分藏红花素、藏红花苦素、藏红花酸等在抗肿瘤、免疫调节以及抗抑郁方面都具有良好功效，尤其是在抗肿瘤方面功效显著，并且毒副作用低于现常用抗肿瘤药物。人工栽培藏红花主要以球茎繁殖，但球茎繁殖系数低，退化现象严重，导致藏红花种源严重缺乏。藏红花的有效成分主要集中于柱头，由于藏红花资源有限，柱头产量极低。近年来，植物细胞工程的发展已为很多植物及其代谢产物的工业化生产提供了机会，同时也为解决藏红花资源短缺问题提供了一条有效途径。本研究以藏红花悬浮培养细胞产色素为实验材料，初步探索其化学成分及抗氧化活性，并且采用大孔树脂吸附分离藏红花细胞培养液中藏

3、红花素及藏红花苦素。研究结果如下：1．考察不同的展开体系对藏红花色素类物质分离效果的影响，当丁醇：乙酸：水=4：1：1作为展开剂时，薄层色谱法分析藏红花色素类物质能达到较好的分离效果。对藏红花柱头醇提色素及藏红花色素类物质进行薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)分析，藏红花悬浮培养细胞能够产生与柱头相同或相似的成分。藏红花球茎愈伤组织悬浮培养产生藏红花色素类物质与幼芽愈伤组织悬浮培养产生藏红花色素类物质成分相似。添加铜离子、茉莉酸甲酯、壳聚糖、壳聚糖寡糖作为诱导子，样品出峰的数量及保留时间基本一致，添加诱导子对代谢产物的组成影响较

4、少，但是对某些特征峰的含量及相对含量有明显改变。2．采用HO·、DPPH·、ABTS+．清除法研究藏红花悬浮培养细胞产生色素的抗氧化活性，随着加入样品质量浓度的增大，自由基的清除能力也依次增加。球茎产生藏红花色素类清除HO·的IC50值约为柱头醇提色素的30．2倍、抗坏血酸的54．7倍，幼芽产生藏红花色素类物质清除HO·的IC50约为柱头醇提色素的5．4倍、抗坏血酸的9．8倍。球茎产生的藏红花色素清除DPPH·的IC50值约为柱头醇提色素的165倍、抗坏血酸的3．3倍，幼芽产生的藏红花色素清除DPPH·的ICso约为柱头醇提色素的74倍。球茎

5、产生的藏红花色素清除ABTS+．的IC50值约为柱头醇提色素的11．7倍、抗坏血酸的9．7倍，幼芽产生的藏红花色素清除ABTS+·摘要的IC50约为柱头醇提色素的6．6倍、抗坏血酸的5．5倍。说明离体培养产生藏红花色素类物质具有较高的抗氧化能力，可作为天然抗氧化剂进行开发利用。3。考察HPD．100A大孔树脂提取藏红花素和藏红花苦素的最佳工艺条件，其最适工艺条件为：25℃、色素液pH6、藏红花素和藏红花苦素上样质量浓度分别为1．0mg／mL和24．6mg／mL、溶液处理量1．5BV、吸附流速1．5mL／min、洗脱剂为体积分数40％乙醇溶液、

6、洗脱剂体积1．75BV、洗脱流速1．0mL／min的条件下分离藏红花素和藏红花苦素，藏红花素和藏红花苦素的吸附率分别达到94．4％和75．5％，解吸率分别为99．9％和87．5％。采用大孔吸附树脂分离藏红花培养液中藏红花素和藏红花苦素具有广阔的工业前景。关键词：藏红花细胞悬浮培养成分分析抗氧化分离IIABSRTACTModemmedicinefindsthat：saffronextractanditsconstituents，suchascrocin．picrocrocinandcrocetinhasdistinctefficacyinant

7、i-tumor，immunoregulation，anti．depressionandSOon．Especially，saffronischaracterizedwithwidelyantitumorandcancerpreventiveactivities，andlittletoxicityandsideeffect．Undertheconditionsoftraditionalcultivation．saffronwaspropagatedbyvegetativeproductionthroughtheformationofadaught

8、erCOrm．However，thepropagationrateofsaffronWasrelativelylowandthedegradationofcorms