哇巴因诱导白血病细胞株Jurkat凋亡的实验研究

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1、华中科技大学硕士学位论文哇巴因诱导白血病细胞株（Jurkat）凋亡的实验研究姓名：熊安秀申请学位级别：硕士专业：儿科血液指导教师：金润铭2003.4.1华中科技人学同济医学院硕士研究生毕业论文哇巴因诱导白血病细胞株(Jurkat)凋亡的实验研究_——●-___一华中科技大学同济医学院附属协和医院儿科研究生熊安秀导师金润铭副教授中文摘要目的1、观察哇巴因对白血病细胞株(Jurkat)是否具有凋亡诱导作用；2、观察凋亡调节基因Bcl一2基因家族及半胱天冬氨酸蛋白酶Caspase一3在哇巴因促凋亡过程中的作用。方法

2、药物敏感性和细胞增殖抑制率采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定；应用DNA片段分析、流式细胞术、脱氧核糖核酸术端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)、透射电镜检测细胞凋亡；Bc卜2、BaX基因表达水平采用半定量逆转录PCR(RT—PCR)法；应用Western—blOt技术检测Bcl—2、Bax、半胱一天冬氨酸蛋白酶3(Caspase一3)蛋白表达水平；Caspase一3活性测定采用比色法。l华中科技大学同济医学院硕士研究生毕业论文厂(结果1、MTT结果显示哇巴因能抑制Jurkat细胞增殖，细胞增

3、殖抑制率与哇巴因的作用浓度和时间呈『F相关；2、DNA凝胶电泳示，畦巴因能诱导Jurkat细胞凋亡，呈现典型的凋亡梯度(DNA1addel")；流式细胞仪分析和TUNEL分析结果显示，哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡呈时间浓度依赖关系；3、Jurkat细胞经畦巴因处理后，出现Bax转录，Bax蛋白表达增加，但Be卜2mRNA及蛋白表达无明显变化；4、一定时间范围内，CasPase一3活性增加并可检测到Caspase-3的活化形式P17亚’基0／结论哇巴因通过激活Caspase一3诱导Jurkat细胞凋亡，凋亡调

4、节基因Bcl一2基因家族参与了哇巴因诱导Jurkat细胞凋亡的基因调控。关键词哇巴因细胞凋亡Bcl一2BaxCaspase一3华中科技大学同济医学院硕士研究生毕业论文Theexperimentalstudyoftheapoptosisofleukemiccellline(Jurkat)inducedbyouabainPostgraduate：XiongAn-xiuTutor：prof．JinRun-mingDepartmentofPediatriCS，UnionHospital，Ton鲥iMedicalCol

5、lege，HuazhongUniversityofScienceandTechnologyABS’l。RAC’l’Objective1．ToobservewhetherouabaincaninducetheapoptosisinJurkatcells；2．ToobservetheroleofBcl一2genefamilyandcysteinecontainingaspartatespeciticprotease(Caspase一3)inouabain·inducedapoptosis；MethodsUsing

6、theMTTmethodforassayingdrugsensibilityandinhibitionrateofcellproliferation．AnalysisofDNAfragment，flowcytometry(FCM)，theterminaldeoxynucleotidyltransferase—mediateddeoxyuridinetriphosphatenickend—labelingreactionmethod(TUNEL)andelectronicmicroscopewereperfor

7、medtoconfirmapoptosis．ThemRNAsofBcl一2andBaxwerestudiedbysemi—quantitativereversetranscriptionPCR(RT—PCR)technique．WesternblotanalysiswasdonetodetecttheproteinexpressionofBax，Bcl一2andeaspase一3．ActivitiesofCaspase一3werestudiedbychromometry．华中科技火学同济医学院硕士研究生毕业论

8、文Resuits1．Theresult0fMTTinhibitthegrowthofassayingindicatedJurkatcellsinathatOUabainwasabletotimeanddosedependentmanner；2．DNA“ladder’’withagarosegelelectrophoresiswasobservedinJurkatcellSafterouabaintr