超强毒鸡传染性法氏囊病病毒克隆化毒株选育及其对免疫器官的影响

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1、山东农业大学硕士学位论文超强毒鸡传染性法氏囊病病毒克隆化毒株选育及其对免疫器官的影响姓名：赵静申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：朱瑞良2003.6.1Ys0765≯关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得酶成采。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人藏集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本帮瞧子舨，允许论文被盔

2、阕积借阕。本人授权由东农韭大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据摩进行梭索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：导师签名：圈期：山系农业大学硪』．举位诧文e嚣雾l}sRNAlB静英文缩略表chickenembryofibroblastdoublestrandRNAinfectiousbursaldisease蕊糕感黪臻辩簸敷链RNA铸染幞法鼹囊瘸wIBDVwryvirulentIBDV怒强馋絷镶法茂囊瘸瘸毒ll∞巍一0RFpCRC

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4、monkeyl}溯燎獭姆鳓魏——————』!iL：：!!旦∑塞堕些童堡堕望童塞茎翌苎鱼壅矍宣塑墅堕摘要f鸡传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的免覆抑制性疾病，疫苗接种是预防本病的主要手段。20世纪80年代中后期由于国内外已先后出现了超强毒株和变异株IBDV，IBD免疫失败时有发生。为研制高效的疫苗，国内外学者先后成功地进行了超强毒株和变异毒株弱毒的培育，Rosenberger等首次将变异株E经CEF传代获得致弱，Kibenge等将变异株A经Vero细胞传代获得弱毒株，Tsai等

5、分别将变异株IN和E适应在BGM．70上，经30代和40代，失去了对鸡的致病性。I／，V本试验以超强毒传染性法氏囊病病毒的国内分离株GX8／99株为研究对象，将该毒株先在鸡胚传10代，又经CEF盲传22代，开始适应鸡胚成纤维细胞(CEF)，并引起细胞病变，表现为细胞聚缩、细胞拉成纤丝状，死细胞粘附其上，最后变圆、脱落。到25代经2次无限稀释法克隆，获得4株克隆化病毒株。对超强毒IBDVGX8／99株的囊毒、鸡胚传代毒及其克隆化病毒分别采用AGP．免疫胶体金试纸膜及荧光抗体检测证明了IBDV的存在，这三种检

6、测方法以免疫胶体金试纸膜法最为简单、方便、快速，并且灵敏度也非常高(可达到10．4～1075)。对超强毒IBDVGX8／99株原始毒囊毒及其克隆化细胞毒进行ELD”测定，并对克隆化细胞毒进行TcID。测定文结果表明原代毒在鸡胚上的滴度最高，4株克隆毒的滴度稍低于原代毒。4殊克隆化细胞毒的ELDso,TCIDso总体上差别不明显，但是对鸡胚及CEF的亲和力表现的完全不同。克隆1在鸡胚的滴度最低但是在CEF的滴度很高，克隆2在鸡胚的滴度最高但是在CEF的滴度最低，克隆3、克隆4在鸡胚及CEF的滴度变化比较一致

7、。表明4个克隆化毒株对鸡胚及鸡胚成纤维细胞的亲和力明显不同。说明它们是不同的克隆化细胞毒。Y潞超强毒IBDVGX8／99株囊毒及其克隆化细胞毒，分别接种4周龄t?山东农业入学硕十学位论文SPF鸡4天后的法氏囊指数均比健康对照同批鸡低1．72～3．06倍，胸腺指数均眈键潦对照葡拯鸡低，雨且骧代毒萎缩严重，比对照组低4．54倍，其余4个克隆化毒萎缩稍轻，比对照组低1．26～1．79倍；脾脏指数均比健康对照同批鸡高，比对照组高1．14～1．64倍，说明原代毒及克隆化细胞毒均可以引起法氏囊及胸腺萎缩、脾脏脾胀。初

8、步揭示了超强毒IBDV^“GX8／99株免疫抑制的机理。l／—。，本磅究遴过超强毒攘GX8／99拣在鸡题传代、缨腿适应，又经竞隧化获得了4株克隆化细胞毒。接种SPF鸡致病试验表明4株克隆化细胞毒的致繇率均小予6。7％，其中鸯嚣撩致短率为0(尧隆l帮壳鍪4)。匿院可以预见，通过该传代致弱途径，有希辍获得对超强毒IBDV有预防作用的弱毒疫茁株，为有效预防超强毒IBDV的感染奠定基襁。关键词：传染性法氏囊病瀹≤超摇《磊；细胞克虞瓦每