慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞中微小RNA的表达分析及其功能研究

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1、分类号UDC博士学位论文密级慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞中微小RNA的表达分析及其功能研究StudyonmicroRNAexpressionandfunctioninperioheralbloodmononuclearcellsfromoatientsl00tlmononuclearcellsIroatientswithchronichepatitisBvirusinfection作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：、副指导教师：论文答辩日期!■一陈莉内科学(感染病学)湘雅医院谭德明教授李聪智副教授答辩委员会主席中

2、南大学二零一二年九月一令一一，牛7乙月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者盛名：!生自日期：旦年兰月』日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学

3、校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：j生兰L导师签名绘期：竺年二月兰日摘要研究背景：乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染所致的慢加急性肝衰竭(HBV-relatedacute．on．chronicliverfailure，ACLF)是临床常见的危重症，病死率较高，对人类危害严重。关于ACLF的发病机制，目前认为主要包括病毒复制和宿主免疫反应及其相互作用两

4、个方面，但是HBV无直接致细胞病变效应，其本身并不直接对感染细胞产生破坏效应，由此人们认为ACLF发病机制的主要环节为病毒在一定条件下所诱发的宿主免疫应答异常。微小RNA(microRNA，miRNA)是近年来新发现的一类非编码小分子RNA。miRNA表达丰富，作用广泛，胚胎发育、细胞增殖分化均受miRNA的调控，同时miRNA也参与机体免疫反应的调节。miRNA可以通过Toll样受体(Toll．1ikereceptors，TLRs)与细胞因子信号途径对机体固有免疫进行调控，也可通过干扰抗原呈递及T细胞受体(Tcellreceptor

5、s，TCRs)途径对机体适应性免疫进行调控。作为机体免疫应答的始动者，miRNA在HBV感染发病机制中的作用也日益得到重视。多项研究已经证实，多个miRNA参与控制HBV复制、HBV相关肝脏疾病的进展，尤其是肝硬化和肝细胞癌的进展；也有研究发现对于接受干扰素(interferon，IFN)治疗的慢性HBV或丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)感染者，可利用患者外周血单个核细胞(Peripheralbloodmononuclearcells，PBMC)中miRNA表达水平的变化来协助判断疾病的临床转归。然而关于miRN

6、A与ACLF的关系，目前知之甚少。研究目的：(1)了解肝脏炎症程度不同的慢性HBV感染者PBMC中miRNA的表达谱。(2)确认慢性HBV感染者PBMC中是否存在与肝脏炎症程度相关的特异性miRNA。(3)对特异性miRNA可能的靶基因进行预测，了解慢性HBV感染者PBMC中特异性miRNA靶基因的表达水平。(4)对miR．197、miR-328的靶基因进行确认，初步探讨慢性HBV感染者体内miR-197、miR-328的作用途径。研究方法：(1)应用miRNA基因芯片技术对HBV相关的4例无症状携带者(asymptomaticcar

7、rier，ASC)及4例ACLF患者PBMC中miRNA的表达谱进行检测，对差异性表达的miRNA进行筛选。(2)采用TargetScan5．2，DIANA-microT3．0及Pictar生物软件对miR-197、miR-328的靶基因进行预测。(3)采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-timepolymerasechainreaction，real—timePCR)对HBV相关的70例ASC，107例慢性乙型肝炎(chronichepatitisB，CHB)患者，76例ACLF患者，及51例健康对照者PBMC中miR-150

8、、miR-197、miR．223、miR-328、miR．30a、miR．574．3p的表达水平进行验证分析；同时对PBMC中miR-197的靶基因白细胞介素18(intedeukin18，ILl8)、肿瘤坏死因子配体超