HBcAb阳性供肝组织内cccDNA检测及与肝移植术后乙肝复发的关系

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1、分类号：I屿12．6密级：学位类别：科学学位口专业学位团学校代码：1062学号：20102680学科门类：医学天洋酱科史粤TIA挂J

2、INM￡OICALU糙IV嚣RSll●Y硕士学位论文MLASTER’SDISSERl、ATION论文题目HBcAb阳性供肝组织内cccDNA检测及与肝移植术后乙肝复发的关系TITLETherelationshipbetweencccDNAofHBcAb—positivedonorlivertissueandhepatitisBrecurrenceafterlivertransplantation一级学科

3、：临床医学二级学科：外科学普外论文作者：姜然然指导教师：张建军教授天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：塾箜日期：2013年5月，。Et学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的

4、全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密囱。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：导师签名：日期：知B年娟D日日期：少，3年朋(D日天津医科大学硕士学位论文中文摘要【目的】检测乙肝核心抗体阳性供肝组织内HBVcccDNA，结合肝移植术后乙肝复发率，探讨HBcAb阳性供肝中cccDNA与术后HBV复发的关系。【方法】实验分为两部分。第一部分：建立检测供肝组织中HBV

5、cccDNA的荧光定量PCR检测体系。根据入组病例的种族和地理分布特点，在GenBank选取HBV常见B、C基因型50株的全基因组序列，结合HBVrcDNA、HBVcccDNA结构特点选择相对保守的序列设计HBVcccDNA选择性引物和探针。根据cccDNA的结构和生物学特点，利用PSAD消化去除rcDNA和整合型HBVDNA的干扰后，利用跨越缺口的选择性引物扩增，延长到探针结合位点时，利用其外切酶活性将探针切断，产生荧光信号。以pCPl0质粒构建标准曲线，13-actin作为内参照，对供肝组织提取的DNA样本进行PSAD消化后进行c

6、ccDNA检测，确定引物的最佳退火温度和检测灵敏度。第二部分：HBcAb阳性供肝组织内HBVcccDNA的荧光定量PCR检测与术后HBV的复发率的关系。2007年1月至2010年1月因乙肝相关性疾病在我院行肝移植手术患者1200例，根据实验分组、入选标准、排除标准，选取病例共85例，其中男性65例，女性20例，年龄18．65岁，平均为44．55+12．37岁，随访18．60个月，平均随访32．12+10．06个月。分为实验组(HBcAb阳性供肝、HBsAg阴性，n=40)、对照组(HBsAg阳性供肝，n=15)、正常组(无肝炎供肝，n

7、=30)三组。入选标准：1)年龄18．65岁，性别不限；2)HBsAg或HBsAg和DNA阳性；3)签署知情同意；4)预计术后存活6个月以上者。排除标准：1)术前血清学HBsAg阴性；2)预计术后生存期<6个月者；3)存在其它肝炎病毒混合感染；4)HBV病毒变异者；5)严重药物过敏者。利用第一部分创建的方法，检测供肝组织内的HBVcccDNA。所有患者肝移植术后给予HBIG联合核苷类药物预防乙肝复发方案。定期检测HBV血清学及HBVDNA，如有HBsAg阳性或HBV．DNA阳性者取肝穿活检病理确认复发。计算乙肝复发率，探讨HBcAb阳

8、性供肝中cccDNA与术后HBV复发的关系。实验结果采用SPSS16．0统计软件对数据进行x：检验。p<0．05为差异有统计学意义。【结果】天津医科大学硕士学位论文第一部分：成功建立了检测供肝组织中HBVcccDNA的荧光定量PCR检测体系。第二部分：入组患者共85例，实验组、对照组及正常组分别有12例、11例和0例cccDNA检测呈阳性，其阳性率分别为30％(12／40)、73．3％(11／15)、o。实验组与对照组的HBVcccDNA阳性率的差异有统计学意义(f=8．419户O．004)。实验组、对照组及正常组术后HBV的复发率分

9、别为10％(4／40)、80％(12／15)和3．3％(1／30)。实验组与对照组术后HBV的复发之间差异有统计学意义(矛=25．913P<0．001)。实验组、正常组术后HBV的复发之间差异无统计学意义(#=1．149