解耦联蛋白2对线粒体氧化损伤诱导端粒依赖性衰老的干预和机制

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：簖庞签字日期：弘侈年6月9日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学

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3、关机制，并进一步探讨高表达UCP2对细胞衰老、凋亡的影响和相关机制，以揭示UCP2在端粒依赖性衰老的作用。方法：1、用血管紧张素II(AnglI)，干预血清饥饿后的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)1周，并分为四组，QDMEM组；②AnglI(0．1lmaol／L)组；@AngII(1pmol／L)组：@AngII(10p．mol／L)组。流式细胞仪法检测活性氧，线粒体膜电位和凋亡率，通过细胞衰老p．半乳糖苷酶染色试剂盒检测各组衰老细胞数量(光学显微镜观察)，通过Westernblot检测各组细胞的TERT、UCP2、c．myc．C．fos、p65、

4、p53、Akt、p-Akt、ERK和p-ERK蛋白的表达情况。2、为了观察P13K／Akt信号通路在氧化诱导细胞衰老机制中的作用，用血管紧张素II(AnglI)干预血清饥饿后的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)前，通过LY294002(P13K／Akt抑制剂)来抑制细胞的P13K／Akt信号通路，并根据LY294002浓度不同，将实验组分为六组，IDMEM组；IIAnglIl“rnol／L组；IIILY29400251xmol／L+AnglIllmaol／L组；IVLY29400210pmol／L+AnglI1lmaol／L组；VLY29400220

5、pmol／L+AnglI1p,mol／L组；VILY29400230pmol／L+AnglI1“mol／L组。通过细胞衰老p．半乳糖苷酶染色试剂盒检测各组衰老细胞数量(光学显微镜观察)。通过Westernblot检测各组细胞的TERT、UCP2、c．myc、c-fos、p65、p53、Akt、P．Akt、ERK和P．ERK蛋白的表达情况。3、用血管紧张素II(AnglI)和拟高表达解耦联蛋白2(UCP2)作用的外源性解偶联剂CLCCP，干预血清饥饿后的HUVECsl周，将实验分组设为(1)DMEM组；(2)AnglI(1Ixmol／L)组；(3)C

6、LCCP(101anol／L)+AnglI(1lxmol／L)组；(4)AnglI(1pmol／L)+DMSO组。通过上述相同的方法检测各组活性氧、线粒体膜电位、凋亡率和衰老细胞水平。通过Westernblot检测各组细胞的TERT、Akt、P．Akt、ERK和P．ERK蛋白的表达情况。摘要结果：1、AnglI(10J-tmol／L)组，AnglI(1pxnol／L)，AnglI(O．1Ixmol／L)组，DMEM组在干预一周后检测ROS水平分别为1595+16．7、1312+14．3、1096+13．8、943+12．3(各组间比较P均

7、)；线粒体膜电位水平分别为948+13．2、826士11．8、652士9．9、298士6．1(各组间比较P均

8、LY294002的浓度的升高，各组细胞染色情况我们可以看出，细胞数明显减少，染色衰老的细胞逐渐的减少；通过LY294002