鲫源迟缓爱德华氏菌的分离鉴定及其毒力基因的检测

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1、微生物学通报Oct.20,2017,44(10):2380−2390MicrobiologyChinahttp://journals.im.ac.cn/wswxtbcntongbao@im.ac.cnDOI:10.13344/j.microbiol.china.170044研究报告鲫源迟缓爱德华氏菌的分离鉴定及其毒力基因的检测1111,21*程俊茗万明月周晋扬贾丹胡鲲(1.上海海洋大学水产与生命学院上海201306)(2.中国水产科学院黄海水产研究所山东青岛266071)摘要:【目的】探明上海某养殖场的异育银鲫(Ca

2、rassiusauratusgibelio)发生死亡的病因,研究致病菌分类地位和毒力基因携带情况。【方法】通过病原菌的筛查和回感试验,确定发病原因,对16SrRNA基因、gyrB和rpoB管家基因测序,建立病原菌系统进化树,结合API-32E细菌鉴定系统对菌株的生理生化进行鉴定,综合判定致病菌的种类及其分类地位;根据已报道的7个毒力基因fimA、citC、gadB、mukF、katB、esrB和sodB序列,设计引物进行PCR扩增,研究病原菌毒力基因携带情况。【结果】致病菌GY15是导致异育银鲫发病的原因,GY15的

3、16SrRNA、gyrB和rpoB基因与已报道的迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellatarda)相似性在99%以上,构建系统进化树和API鉴定确定该菌株为E.tarda,腹腔注射回感可导致异育银鲫死亡,5半致死浓度(LD50)为4.26×10CFU/mL;已报道的7种毒力基因在该致病菌中均能被检测到;药敏试验结果显示,该菌对恩诺沙星、氟苯尼考和氧氟沙星等15种药物敏感,对新霉素、四环素和复方新诺明等18种药物表现为耐药。【结论】首次报道E.tarda可感染异育银鲫,它对异育银鲫的养殖造成威胁。关键词:异育银鲫,迟

4、缓爱德华氏菌,鉴定,毒力基因Foundationitem:SpecialFundforAgro-scientificResearchinthePublicInterest(No.201203085);NationalNaturalResourcesPlatformofChina;ShanghaiOceanUniversityKnowledgeServicePlatform*Correspondingauthor:Tel:86-21-61900453;E-mail:khu@shou.edu.cnReceived:Jan

5、uary16,2017;Accepted:May04,2017;Publishedonline(www.cnki.net):August08,2017基金项目:公益性行业(农业)科研专项项目(No.201203085);国家水产种质资源平台项目;上海海洋大学知识服务平台项目*通讯作者:Tel:86-21-61900453;E-mail:khu@shou.edu.cn收稿日期:2017-01-16;接受日期:2017-05-04;优先数字出版日期(www.cnki.net):2017-08-08程俊茗等:鲫源迟缓爱德华

6、氏菌的分离鉴定及其毒力基因的检测2381IdentificationandvirulencegenesdetectionofEdwardsiellatardaisolatedfromCarassiusauratusgibelio1111,21*CHENGJun-MingWANMing-YueZHOUJin-YangJIADanHUKun(1.CollegeofFisheriesandLifeScience,ShanghaiOceanUniversity,Shanghai201306,China)(2.YellowSe

7、aFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisherySciences,Qingdao,Shandong266071,China)Abstract:[Objective]ToconfirmthepathogenythatcausesCarassiusauratusgibeliodeathinsomefishfarmsinShanghai,andcharacterizethevirulencegenesofthepathogenicbacteria.[Methods]Th

8、epathogenicbacteriawereconfirmedbasedonthepathogensscreeningandartificialchallengeexperiment,andidentifiedaccordingto16SrRNA,gyrBandrpoBgenessequenceandbiochemicalcharacteri

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