鸡蛋源沙门菌之分离判定及抗药基因和毒力基因之检验

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1、鸡蛋源沙门菌之分离判定及抗药基因和毒力基因之检验第一章沙门菌研究进展沙门菌（Salmonella）是一种重要的人畜共患病原菌，存在广泛，不仅能引起畜禽及其他动物发生感染，而且还能导致人类食物中毒，是世界范围内引起人胃肠道感染及腹泻最主要的病原菌，在我国，沙门菌引起的食物中毒也是居细菌性食物中毒的首位（吕世明等2006;田质高2009），并且在进出口食品安全检测监控项目中，沙门菌属于不得检出的微生物种类。人类感染该病原菌主要是通过食用被污染的食物等（Butayeetal.2006），所以对于沙门菌的研究对我国的食品安全、兽医公共卫生等有着非常重要

2、的作用。1.1沙门菌的一般特性1.1.1形态特征沙门菌（Salmonella）属于肠杆菌科，兼性厌氧，非芽孢短杆菌，革兰氏阴性，大多有周身鞭毛，能运动，菌体大小为1～30.5～1μm，一般无荚膜，大多数有周身鞭毛，除猪霍乱沙门菌（S.gallinarum）和鸡白痢沙门菌（S.pullorum）外，其余沙门菌都具有运动性。1.1.2培养特性沙门菌对培养基营养要求不高，普通培养基和液体培养基中均可生长，但鸡伤寒、鸡白痢、甲型副伤寒和羊流产等沙门菌在普通营养琼脂上由于营养等原因生长不易，它们的最佳生长温度为37℃，最低生长温度为6℃，在pH范围

3、4.1～9.0均可生长，生长最适pH为6.8～7.8。沙门菌常采用肠道鉴别培养基进行分离，在麦康凯琼脂上可生成无色半透明的菌落；在SS琼脂上形成无色半透明（产H2S菌株菌落中心带黑色）的菌落，在三糖铁琼脂斜面上斜面为红色，底部变黑或不变黑，多数菌株产气，但鸡伤寒和伤寒沙门菌不产气。加入甘油、葡萄糖、硫代硫酸钠、脑心浸液和血清等的培养基有助于沙门菌生长。另外，沙门菌在培养基上存在S.R变异（布坎南1984;柳增善2007）。1.1.3生化特性生化反应对菌种的鉴别有重要意义。沙门菌可代谢葡萄糖、甘露醇、麦芽糖和卫茅醇，大多产酸产气，不能代谢乳糖、蔗

4、糖等，明胶不能被液化，尿素也不能被分解，不产生脂酶与脱氧核糖核酸酶，脲酶阴性，VP试验（乙酰甲基甲醇试验）阴性，MR甲基红试验阳性（丙酮酸试验与VP多是相反），有赖氨酸脱羧酶。1.1.4抗原结构沙门菌具有复杂的抗原结构，主要有菌体（O）和鞭毛（H）两种抗原,少数存在（K）抗原。O和H抗原是沙门菌最主要的抗原，是构成沙门菌血清型鉴定的基础，而O抗原又是每个菌株的必有成分。O抗原可耐一定热的脂多糖，相对稳定，脂多糖的侧链能够决定沙门菌O抗原的特异性，而决定簇则由该链末端单糖及多糖链上单糖排列顺序决定，一株菌可以含有多个O抗原，沙门菌共有65种O抗原

5、，以阿拉伯数字表示。将具有相同O抗原的各个血清型沙门菌归为一组，共有42组，该脂多糖还能够刺激机体，使机体产生相应的lgM抗体。H抗原为对热不稳定的蛋白质，沙门菌的H抗原共有两种，被称为第1相和第2相，第1相相比第2相的特异性高又被称为特异相，用小写英文字母表示；第2相因特异性低又称为非特异相，一般用小写的阿拉伯数字表示。根据H抗原的不同，可对沙门菌进行进一步的分种或分型，H抗原与O抗原不同，主要刺激机体，使机体产生相应的抗体lgG。与沙门菌毒力相关的抗原为vi抗原，不稳定，易破坏或者丢失，vi抗原由聚-N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸组成，含有v

6、i抗原的菌株不能被相应的抗血清凝集（王章云1999;irzaieSetal.2010）。1.1.6沙门菌的分型最早沙门菌的分类及命名主要考虑临床症状、宿主和分离出的地点。根据Y-2及tetA的检出率均高于60%，耐药基因aadA2、sul-I、qnrs和BlaSHV-1的检出率分别为50.00%、47.92%、18.64%和16.95%，且分析得出，耐药表型与耐药基因之间无显著相关性。（4）对分离株毒力基因进行检测的结果显示，携带率分别是SPI-1为60%、SPI-2为73.3%、SPI-3为100%、SPI-4为90%、SPI-5为76.7%

7、。毒力岛基因SPI-1+SPI-2组合SPI-1+SPI-2+SPI-3+SPI-4+SPI-5毒力基因组合与沙门菌致病力有显著的相关性，而且携带SPI-1菌株的致病性略高于携带SPI-2的菌株，携带SPI-4、SPI-5毒力岛基因与菌株的致病性无显著相关性。