胶体金免疫层析法快速检测赭曲霉毒素A研究

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1、20粮食与油脂2011年第10期胶体金免疫层析法快速检测赭曲霉毒素A研究舒文祥，徐炜，李艳，吴文烨，王黎丽，周坚(无锡安迪生物工程有限公司，江苏无锡214174)摘要：该研究应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测食品和饲料中赭曲霉毒素A方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，标记抗赭曲霉毒素A单克隆抗体，标记胶体金抗体喷涂于玻璃纤维上，赭曲霉毒素A偶联抗原OTA-OVA和二抗兔抗鼠IgG分别啧涂于硝酸纤维膜上作为检测限和质控线，依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装成试纸条并装卡。测试结果表明，赭曲霉毒素A快速检测试纸条灵敏度为5ng／mL，检测时间为10min，批内和批

2、间重复性为100％，假阳性率和假阴性率均为0。该法简单方便，非常适于现场快速检测赭曲霉毒素A。关键词：赭曲霉毒素A；胶体金免疫层析；快速检测⋯NtudyOng01ld1i‘mmunoclnromat·o~raplIIVassaYI--orrapi‘d■detectionofochratoxinA、SHUWen—xiang，XUWei，LIYan，WUWen—ye，WANGLi-!i，ZHOUJian(WuxiAntixBiotech．Co．，Ltd．，JiangsuWuxi214174，China)Abstract：TOestablisharapidassayfordetectio

3、nofOchratoxinAinfoodandfeed，goldimmunochromatographyassaywasstudied．Colloidalgoldmarkedcoupledwithmonoclonalantibodyagainst0chratoxinAwasjetsprayedontotheglassfiber．OTA—OVAandrabbitanti-mouseimmunoglobulinswasjetpositionedontoanitrocellulosemembrane．Samplepad，goldjetpad，nitrocellulosemembranea

4、ndabsorbentPaDerwereassembledandcutintodetectingcard，respectively．TheresultshowedthatthesensitivestandardofrapidassayforOchratoxinAvisualdetection1imitiS5ng／mL．anddetectiontimewithinl0min．Repeatabilityofstripis100％．Theassaygivesnofalsepositiveandfalsenegativeresults．SoitiSverysimpleandconvenie

5、nttorapidlydetect0chratoxinAonthespot．Keywords：ochratoxinA；goldimmunochromatographyassay；rapiddetection中图分类号：TS207．4文献标识码：A文章编号：1008—9578(2011)1O一0020一O3赭曲霉毒素(Ochratoxin)是曲霉菌属和青霉菌1材料与方法属产生二级代谢产物，包括赭曲霉毒素A、B、C、D1．1材料与仪器和a等七种结构类似化合物⋯；其中赭曲霉毒素A赭曲霉毒素A标准品：北京标准物质研究中心；(OchratoxinA，OTA)在自然界分布最广泛、毒性最抗赭曲霉

6、毒素A单抗、0TA一0VA：无锡安迪生物工强。赭曲霉毒素A是一种对肝脏和肾脏强毒物质，程有限公司；氯金酸(HAuC14·3H20)：美国Sigma公可导致受试动物免疫抑制、肾萎缩、胎儿畸形、流产及司；柠檬酸三钠、碳酸钾：上海化学试剂公司；硝酸纤死亡，并具有高度致癌、致畸、致突变作用叫；为维素膜(NC膜)、玻璃纤维、样品垫、吸水纸：上海金标此，国际癌症研究机构IARC将其定位lib类致癌生物科技有限公司；试纸条切刀、喷膜仪：上海韩感物。加强对OTA检测是防止被OTA污染食品电子科技有限公司；紫外分光光度计：上海精密仪器和饲料直接或间接进入人类食物链重要方法。有限公司；高速冷冻离心机：

7、湖南湘仪离心机有限公胶体金免疫层析技术系出现于20世纪80年代初司；磁力加热搅拌器等。期一种免疫分析方法。是在单克隆抗体技术、胶体金1．2实验方法免疫技术和新材料技术基础上发展起来一项以膜为1．2．1胶体金制备固相载体的快速检测技术"、镥。胶体金快速层析法用容量瓶量取200ml超纯水加入到500ml锥形因具有特异性强、灵敏度高、操作简便，特别适于大批瓶中，将锥形瓶置于磁力加热搅拌器加热板上，放入量样品检测，且结果判断直观可靠等优点而越来越被磁力搅拌子，打开搅拌旋钮至适