山药细菌性叶斑病病原的鉴定

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1、河南农业大学硕士学位论文题目出药细菌些吐堡痘瘟愿的鉴定学位申请人姓名王速至研究方向擅塑痘塞生塑随渔中国郑州2006年6月河南农业大学学位论文独创性声明、使用授权及知识产权归属承诺书学位论出药鳃菌箍时凝瘸瘸琢的鉴定学位文题謦级剐硕士学生学科导瓣姓名王振军埴物病骥学李淇连，剃红彦专业姓名学位论文奁鲡需保密，群密封阉每弼嚣怒否保密；独创性声瞬本人星交论文是在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果，除了文中l将翻热以标注霸魏瓣懿懿方羚，文孛不镪含箕麓夫已经发表或撰写_建静辑突藏l果，也不包括为获得河南农业

2、大学或其他教育机构的学位或证书陌使用过的材

3、瓣，撂霉教龋对j避连牙了窜定。与我⋯越工{擘懿瓣恚黠本辑究蕊散鹭任何燹献l均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。{!磅究生签名：互瓣名；。导蝼签名；多移屯lE1期：口6年6月邸臼日期：。6年6月f玉日学使论文使用授权及知识产权归属承诺本A宠全了解河鬻农业大学关于鼹存，使掰学位论文骆翘定，鹾学生搽须按照学校器求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印副本和电予版本，并提供嚣录梭索帮阕爨服务，可以采用影印、缩印或辛曩描等熨铡手段保存、汇编

4、学位论文。本人同意瀛南农业大学可以餍不鲻方式在不越媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。本人宠全了解《河鹰农业大学知识产权保护办法》的有关规定，在毕业离开河南农业大学西，就在棱期间从事的科研工作发表的所有论文，第一署名单蹙为河嘉农、韭大学，试验誊

5、料、艨始鼗擐、孛缀浆专利等知识产投驽归溺蔑农业大学所有，否则，承担栩应的法律责任。研究生签名：鬣懒导师签名：函苗通，学院领导签名：：矽孙巡L闩期：6‘年∥月厅R同期：抽年‘月f≥同

6、=；{i期：。6年6月I>F：il致谢本论文是在导师刘红彦研究员琴曩

7、李洪连教授的悉心指导一F完成的。刘红彦老师在论文的选题、实验设计和安排上都给予了精心的指导，刘老师严谨的工作、渊博的知识、赢遗麓晶德，一卷影g建和餐健着我不断盼学习、前避，在生活当中的细心关怀更是我倍感温暖。李洪连老师多来严}薰求实鹩治学态度、一丝不萄的工作作风、孜孜不倦的教学育人君嚣对人事鲍大度淫解始终都是我努力学习向上的源泉。在毕业来临之际，谨向刘红彦老师和李洪连老师表达我襄。昏鹊感谢释敲意!在实验进行过程中河南农业科学院棱保所鲍刘玉霞老师、王飞、倪云霞和刘新涛都给予了大量的支持和帮助；兰翔大

8、学斡伊艳杰博士、秀j艺农大麓王俊美祷±、溺南农业大学植物保护学院的2003级硬究生刘誊存、柴舂月，2004缀研究生王瑞等同学都糖供了大量的建议和帮助；2003王素平、范永虎等弼学氇参与了部分工作；论文在审稿、修改以及定藕当中得到了褒红羧老螂、孙炳剑老孵、宋玉立老薅、文才艺老帮、张猛老师和邢小平老师的热心指导。在既一并表示深深墟感谢l最后感谢我的家人、鼷友窝跨葵我多年熬河南农业大学和河南省农科院向关心、支持我的所有老师和同学表示最诚挚游谢意!摘要山药细菌性叶斑病是山药上发现的一种新病害，关于此病害的

9、研究尚未见任何报道。本研究根据山药病株的发病情况和镜鉴试验，初步确定为细菌性病害。从感病山药叶片中分离出四株培养性状不同的细菌菌株：YLS一1、YLS-2、TLS-3、YLS-4。在适宜条件下回接山药，只有菌株YLS-2能引起山药发病，发病症状与原病叶症状一致，并且可以从接菌发病的山药叶中再分离出该细菌，表面性状与原来分离的纯培养细菌一致，符合柯赫氏法则，证明细菌分离物YLS一2为山药叶斑病的病原菌。以三种标准菌株2584(Curtobacteriumflaccumfacienspv．f]accu

10、mfaciens)、T30(Cur．Zpv，beticila)和ICMP3023(Pseudomonassyringaepv．sjwingae)做形态学观察和生理生化实验，结果表明细菌分离物YLS一2和T30及2584亲缘关系较接，推测它们是近缘种。利用168rDNA通用引物。以YLS-2的全序列基因组为模板进行PCR扩增，得到长度约为1．5kbp的特异性条带，将该条带切胶、回收、克隆并送交测序，得到长度为1485bp基因序列，将该序列递交GenBank进行Blast同源序列检索，在亲缘关系相近的

11、前39个序列中，前35个均为短小杆菌属的菌株。用DNAStar软件进行系统进化分析。系统发育树图显示山药叶斑病菌与甜菜银叶病菌(Curtobacteriumf]accumfacien$pv．basellae(登录号：AY273210))单独构成一个分支，其同源性高达98．7％，这就说明山药细菌性叶斑病菌是萎蔫短小杆菌的一个变种．本研究利用ITS(InternalTranscribedSpacers)的通用引物以YLS-2的全序列基因组为模板进行PCR扩增，将所得特异性条带切胶、回收