广西猪瘟病毒不同来源株的E2基因的克隆和序列分析

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1、广西猪瘟病毒不同来源株的E2基因的克隆和序列分析摘要本研究采用RT—PCR技术对来自广西不同地区的猪流产胎儿与死胎82份、新生仔猪33份和老母猪自细胞172份进行猪瘟病毒检测，结果共有9份为阳性，其中死胎及流产胎儿4份、新生仔猪3份和母猪白细胞2份，从阳性病料中选取6份进行猪瘟病毒E2基因的克隆、测序，得到长度为1119核苷酸的目的基因片段。将这些阳性材料接种于易感细胞PK-15，经过三代盲传，用RT-PCR可检测到GXGZ02、GxXJcl和GXXJBl材料所接种的细胞为猪瘟阳性。应用DNAstar序列分析软件

2、对所测定的6个毒株与已知序列的HCLV、Shimen等毒株的相应片段进行同源性分析比较。结果显示，GXGZ02株与HcLv、Shimen株的核苷酸同源性分别为82．3％和84．2％，其余5株与HCLv、Shimen株的核苷酸同源性分别为96．8％一97．3％和94．3％一94．9％，推定的氨基酸同源性分别为89．8％～96．4％和91．2％～94．5％。除GXGZ02株，其余5株毒株之间核苷酸和推定的氨基酸同源性分别为99．1鼽99．6％和98．4％~99．2％。6个广西毒株E2基因的所有Cys位点都没变，可推测

3、猪瘟病毒E2蛋自在抗原结构方面依然保持很高的稳定性。与石门毒株、兔化弱毒疫苗株相比，广西毒株在具有中和特性的B、C区域内723和724氨基酸位点发生了变异。把6个广西毒株与国内外已发表的猪瘟病毒相应序列进行比较，并建立了遗传进化树。该遗传树主要分为两大群和一个另类，除GXGZ02株属于基因Ⅱ群外，其余五株皆属于基因I群，与属于同一基因群。关键词：猪瘟病毒E2基因序列分析同源性广西大学2006届硕士毕业论文广西猪瘟病毒不同来源株的E2基因的克隆和测序列分析CloningandSequnceanalysisofE2g

4、eneofClassicalSwineFeverVirusisolatesfromdifferentregionofGuangxiabstractInthisstudytheE2genesof6strainsofclassicalswinefevervirus(CSFV)isolatedfromSOWleukocytes，pigletandabortiveembryosinGuangxiwereamplifiedbyreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RT-PC

5、R)．TheE2genefragmentswhichcontain119nucleotidesinlengthwereclonedandsequenced．ThenpermissivecellsPK-15wereinoculatedwinlthepositivesample．Afterthreeblindpassages，CSFVwasdetectedpositiveintheculturecellsandmediumbyRT-PCR．ComparisonofE2seqencesbetween6strainsan

6、dhogcholeralapinisedvirus(HCLV)、ShimenstrainusingDNAStarsoftwarewascarriedout，theresultshowedthatthehomologybetweenfivefromGxuangxistrainsandHCLVwere96．8％～97．3％fornucleotidesequenceand95．6％～96．4％fordeducedaminoacidsequence．whileGXGZ02trainsandHCLVtrainis82．3％

7、and89．8％．ThehomologybetweenfivestrainsfromGxuangxiandShimenwere94．30／'0．-94．9％fornucleotidesequenceand91．20／o--94．5fordeducedaminoacidsequence．Thenucleotidehomologyamonggxuangxistrainswere99．1％～99．6％．andtheirdeducedaminoacidhomologywas89．3％-99．2％．NoCysteinres

8、idueschangeonE2glycoproteinofGuangxistrainshadbeenshown，indicatingthatE2glycoproteinofGuangxistrainsstillremainhighlystability．TheantigenicdomainBandCwhichrelatedwithneutralizingactivity,