甲型肝炎病毒Vero细胞适应株的选育研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com微生物学免疫学进展2003年第31卷第4期甲型肝炎病毒Vero细胞适应株的选育研究陈尔佳，马波，魏绍忠(1．云南沃森生物技术有限公司，昆明650033；2．云南润生药业有限公司，昆明650031)摘要：将甲肝患者粪便中分离的甲型肝炎病毒在Vero细胞中进行适应性培养，选育高滴度适应株应用于甲肝灭活疫苗研究。在Vero细胞上连续传代，测抗原滴度和感染性滴度，满意后按WHO推荐的甲型肝炎灭活疫苗规程进行灭活疫苗试制研究。经Vero细胞14次适应性传代后，病毒抗原滴度可高达1：2560

2、，感染性滴度为8．23LogC．cID5o／ml。试制的灭活疫苗HPSEC检测在280nln时仅有一个高峰，SDS．PAGE电泳，在22kD、26kD和33kD处有三条蛋白带，和HAVVP3、VP2和VP1的位置相同。ICR小鼠效力试验表明疫苗剂量1600EU／ml与Merck疫苗50U效果相似。通过研究获得了Veto细胞甲肝病毒适应株YN5株，初步证明可作为甲型肝炎灭活疫苗的候选毒株。关键词：甲型肝炎病毒；YN5株；Vero细胞；灭活疫苗中图分类号：R373·21文献标识码：A文章编号：1005—5673(2003)04-0

3、001-04ThestudyonadaptationofhepatitisAvirusYN5straininVerocellCHEN西曲‘，MABo，WE1Shoo·zhong2(1．YunnanWosenBiotechCo．，Ltd，Kunming650033，China；2．YunnanRunshengPharmaceuticalCo．ILid，Kunmm／ng650031，China)Abstract：YN5strainwasisolatedfromfecesofhepatitisApatientsandadaptedt

4、overocells．TheadaptedYN5strainWaSidentifiedasHAVwiththespecficexperiment．AntigenictitersofYN5strainP14onVerocellswere1：2560，infectivetit·resofthatWas8．23LogCCID5o／m1．TheexperimentalvaccineWasmadeaccordingtoWHOrequirementforinactivatedhepa·tifsAvaccine．Experimentalva

5、ccinewasonlyonepeakthroughHPSECat280nm．BySDS·PAGE，YN5straincontains，threepeptidecomponentsVP1，VP2，VP3，theirmolecularweightsareabout33，26，22kDrespectively．Inaddition，theefi·ciencyoftheexperimentalvaccine，ICRmiceimmunizedwith1600EU／rnlWassameasMerckvaccine(50U)．Theres

6、earchprovideYN5strainadaptedVerocellandWaSawellstrainforproducinginactivatedvaccine．Keywords：HepatitisAvirus(HAV)；YN5strain；Verocel；Inactivatedvaccine甲型肝炎(简称甲肝)是由甲肝病毒(Hepatitis培养。因此，筛选出能在Vero细胞上高效稳定Avirus，HAV)感染人体引起的一种急性传染病，其增殖的甲肝灭活疫苗病毒候选株将有利于甲肝灭活预防可使用甲肝减毒活疫苗或灭活疫苗。两

7、者相疫苗产量的提高和成本的降低。试验以Vero细胞比，甲肝灭活疫苗具有较强的免疫原性，免疫后能诱为细胞基质，成功筛选出一株可以高效、稳定增殖的发高水平的体液免疫，无病毒返祖，疫苗稳定性好，甲肝病毒YN5株，并进行了灭活疫苗的初步试制研便于保存、运输和使用。目前中国生产的甲肝减毒究。一活疫苗和新批准生产的灭活疫苗均是应用人二倍体材料与方法细胞(KMBI7或2BS株)制备的。然而甲肝灭活疫苗生产需要的抗原量大，如何通过体外培养HAV，1标本的采集与处理大量获取制备甲肝疫苗所需的HAV抗原，仍然是当1995年3—9月从昆明医院收集到

8、6份甲型肝前十分重要的研究课题。13Veto细胞是WHO推荐炎急性患者粪便，分别编号为YN1一YN6。粪便标的生产人用疫苗的良好细胞基质，且可用于发酵罐本用EagleMEM制成10％悬液，按5％加入植物活收稿日期：2003-05-05；修回日期：2003-06．14+基金项目