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《油菜_BrassicanapusL__BnPGIP基因克隆及其表达分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、488江苏农业学报(JiangsuJ.ofAgr.Sci.),2011,27(3):488~493周晓婴,陈松,戚存扣,等.油菜(BrassicanapusL.)BnPGIP基因克隆及其表达分析[J].江苏农业学报,2011,27(3):488493.油菜(BrassicanapusL.)BnPGIP基因克隆及其表达分析周晓婴,陈松,戚存扣(江苏省农业科学院经济作物研究所,国家油菜改良中心南京分中心,江苏南京210014)摘要:以油菜品系甘蓝型油菜宁RS1为植物材料,以南京油菜田里收集的核盘菌为致病菌,根据已经报道的油菜PGIP基因序列,设计简并引物。从宁RS1基因组D
2、NA中经PCR克隆到1条包含1个内含子与2个外显子的基因序列。序列比对分析显示,该基因与已公布的油菜PGIP1基因的核苷酸序列和氨基酸序列同源性均达99%,编码区序列全长984bp,编码332个氨基酸,富含亮氨酸。以翻译延伸因子EF1作为内标,利用半定量RTPCR分析了BnPGIP基因在核盘菌未诱导和诱导后宁RS1中的表达量差异。结果发现,核盘菌诱导后宁RS1中的BnPGIP表达含量明显提高,表明宁RS1在受到核盘菌侵染后体内的BnPGIP基因受到诱导表达。为进一步研究BnPGIP基因在抗核盘菌侵染的作用,构建了BnPGIP基因过量表达载体。关键词:甘蓝型油菜;多聚半乳糖醛酸
3、酶抑制蛋白;基因克隆;表达中图分类号:S435.654文献标识码:A文章编号:10004440(2011)03048806CloningandexpressionofBnPGIPgeneinBrassicanapusL.ZHOUXiaoying,CHENSong,QICunkou(InstituteofIndustrialCrops,JiangsuAcademyofAgriculturalSciences,NanjingSubcenterofNationalCenterofOilseedCropsDevelopment,Nanjing210014,Chin
4、a)Abstract:NingRS1,aBrassicanapuslinewithtolerancetoSclerotiniasclerotiorumwasusedinthisstudyasplantmateria.lThefungaiofSclerotiniasclerotiorumusedinthisresearchwascollectedfromoilseedrapeproductionfieldsinNanjing.SequenceofPGIPgenefromNingRS1genomewasclonedintoaDNAbyPCRusingthedegenerateprim
5、ersdesignedbasedonaknownPGIP1sequenceinoilseedrape.BothnucleotidesequenceandaminoacidsequenceofthePGIPgeneclonedshared99%similaritywithPGIP1.TheDNAsequencecontainsanintronandtwoexonswithacodingsequencelengthof984bp,encoding332aminoacids.ThedifferenceofexpressionoftheBnPGIPgeneinnormalNingRS1and
6、theSclerotiniasclerotioruminducedNingRS1wasanalyzedbysemiquantitativeRTPCRusingtranslationelongationfactorEF1asaninternalcontro.lItwasfoundthatthequantityofexpressionoftheclonedgeneintheinducedNingRS1wassignificantlyhigherthanthatinnormalNingRS1,indicatingthatexpressionoftheBnPGIPgeneinside
7、NingRS1wasinducedafterinfectionofSclerotiniasclerotiorumandtheresistanceagainstSclerotiniasclerotiorumwasimprovedin收稿日期:20100906NingRS1.ToinvestigatetheroleofBnPGIPinresistance基金项目:江苏省支撑计划项目(BE2009304);江苏省自主创
