菜籽饼粕饲用品质改良菌株筛选与混合发酵

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1、菜籽饼粕饲用品质改良菌株的筛选与混合发酵黄茜，钮琰星，倪光远一，何江，黄凤洪1(中国农科院油料作物研究所，湖北武汉，430062)2(华中农业大学食品科技学院，湖北武汉，43o07O)摘要筛选出了在菜粕上生长旺盛，能有效降低硫苷和粗纤维含量的高效降解菌株——枯草芽孢杆菌B、纳豆芽孢杆菌N。和酿酒酵母R，并进行单菌、混菌发酵实验。结果表明，混株发酵效果优于单菌株发酵，恶唑烷硫酮(0zT)及异硫氰酸酯(ITc)的降解率分别达到70．75％、82．14％；植酸、芥子碱、中性洗涤纤维分别减少71．37％、70．88％和26．12％；菜籽饼粕中粗蛋白的含量提

2、高了13．7O％。关键词菜籽饼粕，抗营养因子，菌株筛选，混合发酵我国是菜籽生产第一大国，每年饼粕产量达到国产普通菜籽预榨浸出粕。700万t左右。菜籽饼粕营养丰富、全面，粗蛋白含量1．1．3培养基可达35％一45％，氨基酸组成接近联合国粮农组织(1)菜籽饼粕(RsM)鉴定培养基：菜籽饼粕2o0(FA0)和世界卫生组织(wH0)推荐值，是优良的天g，自来水1o00mL，品温控制20cI=，浸泡24h，过滤然植物蛋白资源¨。但由于其含有硫苷、植酸、多得滤液800mL，加植酸钙5g，琼脂l5g，定容至1000酚、芥子碱等抗营养物质，粗纤维含量较高，限制mL

3、，灭菌制成平板培养基。了菜籽饼粕在畜禽日粮中的应用。为了更加有效地(2)牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3．0g，蛋白胨利用菜籽饼粕，各国科技人员研究了多种有效的脱毒10．0g，Nac15．0g，琼脂l8—20g，水100OmL，pH工艺，如：干热处理法、坑埋法、生物化学法、微生物降7．0—7．2。解法，其中微生物降解法的脱毒效果较明显。(3)麦芽汁培养基：5。B6麦芽汁琼脂培养基。目前，国内外的文献报道多针对菜籽饼粕中硫苷(4)查氏培养基：蔗糖30g，NaNO32g，K2HPO4的脱毒效果，对其他抗营养因子研究较少；另外lg，KCl0．5g，MgS04

4、·7H2O0．5g，FeSO4·7H2O只注重抗营养因子的脱除，而忽略了营养成分含量的0．01g，琼脂15—25g，蒸馏水l000mL，自然pH。提高。因此，本研究以降解限制菜粕饲用的主要抗营(5)菜籽饼粕液态摇瓶培养基：KHP00．3g／L，养物质——硫苷及其水解产物、纤维为目标，从菜籽粕40g／L，Na2C031g／L，Na2HPO44g／L，pH7．O研究室保藏的菌株中筛选出在菜籽饼粕上生长能力一7．2．121℃灭菌20min。强、高效降解硫苷、产纤维素酶酶活高的菌株；并将筛(6)菜籽饼粕固态发酵培养基：菜籽饼粕(3O选出的菌株混合发酵菜籽饼

5、粕，测定经发酵处理后的目)60g，自来水60mL。1l5c《=灭菌l5min。菜籽饼粕中各项抗营养因子的降解率、营养成分的含1．2方法量，为混合菌发酵菜籽饼粕制备益生蛋白饲料提供理1．2．1菜粕改良菌株的筛选论依据和数据参考。1．2．1．1改良菌株的初筛细菌的筛选培养：用牛肉膏蛋白胨培养基和l材料与方法RsM培养基。将保藏在斜面上的菌株接种在RsM1．1材料鉴定培养基上，观察其生长状况和菌落周围透明圈的1．1．1菌种来源有无与大小。能在这种高浓度培养基上生长并产生研究室保藏的32株细菌、17株酵母菌、26株霉透明圈的菌株，说明具有分解菜籽饼粕中有关

6、水溶性菌。毒物的能力。再将这些菌株回接到牛肉膏蛋白胨培1．1．2菜籽饼粕养基上恢复其典型菌落。以上培养条件均为25℃，120h。酵母菌的筛选培养：用麦芽汁培养基和RsM第一作者：硕士，实习研究员(黄凤洪为通讯作者)。培养基交替培养，依细菌的交替培养法进行。霉菌的收稿日期：2009—05—31，改回日期：2o09—08一ll筛选培养：用察氏培养基和RSM培养基交替培养，依旦至蔓鲞蔓Q塑(篁差丝塑l73l细菌的交替培养法进行。(AergusnMs)H5、里氏木霉(71rc0derm。reese)1．2．1．2改良菌株的复筛T4和康氏木霉(nngtrc0

7、derm0)K3。将初筛得到的5株霉菌、9株细菌和2株酵母菌2．1．2改良菌株的复筛分别接种到菜籽饼粕液态培养基上，30℃下培养72初筛得到的l6支菌株经菜籽饼粕液态发酵，测h，利用氯化钯快速定量测硫甙总量法测定硫苷的降得各菌株的硫苷降解率如表1所示。解率。表1各菌株发酵菜籽饼粕的硫苷降解率1．2．1．3高产纤维素酶菌株的优选菌株名称硫解率菌株名称硫率将复筛出的菌株接种到菜籽粕液态摇瓶培养基枯草芽孢杆菌B87．53醋酸杆菌s85．73上，150r／min，30℃下培养96h，并测定其所产纤维枯草芽孢杆菌B，8O．94毕赤酵母P，83．67素酶酶活。

8、枯草芽孢杆菌B89．O6酿酒酵母R86．92枯草芽孢杆菌B84．64黑曲霉E，83071．2．2混合菌发酵菜籽饼粕地衣芽孢