一种快速提取葱属植物DNA的方法

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1、生物技术通讯860LETTERSINBIOTECHNOLOGYVol.23No.6Nov.,2012doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2012.06.022技术方法一种快速提取葱属植物DNA的方法1，2112王婵，田保华，裴雁曦，王永勤1.山西大学生命科学学院，山西太原030006；2.北京市农林科学院蔬菜研究中心，北京100097［摘要］目的：针对分子育种工作的繁琐性及葱属植物次生代谢物较多的特点，研究一种利用普通试剂及简单仪器高效快速提取葱属植物DNA的方法。方法：对碱处理法稍加改进，在碱

2、性环境中高温裂解细胞，将释放的DNA保存在Tris缓冲液中，用PCR检测提取质量并分析DNA的保存时间。结果：与用试剂盒提取的DNA相比，扩增产物无显著差异，利用此方法提取DNA并分析了13个洋葱品种的细胞质雄性不育类型；保存时间分析显示，DNA在常温下只能保存5d，在4℃或-20℃可至少保存2个月。结论：该方法方便快速、成本低、适于田间操作，得到的DNA可满足分子生物学实验的基本要求，可用于以PCR为基础的分子标记辅助育种。［关键词］DNA提取；碱处理法；保存时间；葱属［中图分类号］Q94-336;Q78［文献标识

3、码］A［文章编号］1009-0002（2012）06-0860-03ARapidMethodforExtractingDNAinAllium1,2112WANGChan,TIANBao-Hua,PEIYan-Xi*,WANGYong-Qin*1.CollegeofLifeScience,ShanxiUniversity,Taiyuan030006;2.BeijingVegetableResearchCenter,BeijingAcad⁃emyofAgricultureandForestrySciences,Beiji

4、ng100097;China*Co-correspondingauthors,WANGYong-Qin,E-mail:wyqty@sohu.com;PEIYan-Xi,E-mail:peiyanxi@sxu.edu.cn［Abstract］Objective:BecausebreedingistediousandAlliumhavemanysecondarymetabolites,wedescribedarapidmethodusingcommonreagentsandsimpleapparatusforextrac

5、tingDNAinAllium.Methods:Thealkalitreatmentwasimproved.TheplantcellswerecrackedinthehightemperaturewhenexistNaOH,thenthere⁃leasedDNAwerestoredinTrisbuffer.ThequalityandstorageperiodofDNAwerestudiedbyPCR.Results:ComparedwithDNAextractedbykit,theiramplificationpro

6、ducthavenosignificantdifference.UsingthismethodtheDNAwereextractedandthestylesofcytoplasmwereidentifiedof13onionvarieties.AnalysisofthetimeofstorageshowedthatDNAcanbekeptfor5daysatroomtemperature,atleasttwomonthsat4℃or-20℃.Con⁃clusion:Thisrapidmethodisconvenien

7、tandfast.Also,ithasthelowcostandissuitableforfieldoperation.TheextractedDNAcanbeusedforthemolecularmarker-assistedbreedingbasedonPCR.［Keywords］DNAextraction;alkalitreatment;timeofstorage;Allium快速提取DNA是作物分子育种发展的前提，无缩短了提取时间，且提取的DNA也能满足分子生物论是对植物遗传多样与亲缘关系的研究、种质资源学研

8、究的需求，但这些方法在葱属中还未见相关应与种子纯度的鉴定，还是相关基因的定位与克隆，都用报道。需要大批量地提取DNA。目前植物DNA提取最常葱属（Allium）植物含有丰富的含硫化合物、黄[6-7]用的方法有CTAB法、SDS法、果胶酶法、高盐低pH酮类化合物及多糖等，具有多种生理功能，如抑菌值法，虽然这些方法都已成熟，但均步骤繁多、费时消炎、