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1、棉花学报CottonScience2016,28(4):413―417改进的TPS法院一种棉花叶片DNA快速提取方法*张友昌袁冯常辉袁别墅袁王小娇袁易先达袁张成袁秦鸿德渊湖北省农业科学科院经济作物研究所袁湖北武汉430064冤摘要院分子标记辅助选择需要大批量的DNA样品袁快速提取DNA的方法是提高选择效率的关键遥研究比较多种植物DNA的提取方法袁通过优化改进袁建立了适于棉花叶片基因组微量快速提取的新方法遥该方法增加缓冲液预处理及在TPS缓冲液中添加PVP40袁采用PCR板批量取样尧微型手电钻磨样袁省去了蛋白抽提尧D
2、NA沉淀尧洗涤尧风干尧溶解等步骤袁免去氯仿和异戊醇的使用遥本方法具有低成本尧快速尧高通量尧操作简单等特点袁而且能确保提取的棉花DNA的浓度和纯度达到要求袁满足大批量样本SSR分子标记辅助育种工作的需要遥关键词院棉花曰DNA曰快速提取曰CTAB法曰SSR中图分类号院S562.035文献标志码院A文章编号院1002-7807渊2016冤04-0413-0510.11963/issn.1002-7807.201604014*ZhangYouchang,FengChanghui,BieShu,WangXiaojiao,Yi
3、Xianda,ZhangCheng,QinHongde(430064,)AnimprovedmethodofrapidsimpleDNAextractionfromcottonleaveswasestablishedbasedontheTPS(namedbyusingTPSbuffer要amixtureofTris-HCl,EDTAandKCl)proceduretoincreasetheefficiencyofmolecularmarker-assistedse-lection.Comparedwithcetyl
4、trimethylammoniumbromide(CTAB)andTPSprocedures,thisnewmethodissuperiorasitusesfewerreagents,andissimpler,faster,andlessexpensive.Thisnewmethodmakesuseofapre-bufferwith2%(massfraction)PVP40addedtotheTPSbuffer(0.1mol窑L－1Tris-HCl,0.01mol窑L－1EDTA,1.2mol窑L－1KCl),a9
5、6-wellPCRplate,andaminiaturehanddrilltogrindsamples.Thisnewmethodcouldomitproteinextraction,DNAprecipitation,washing,drying,anddissolvingprocedures,anddoesnotrequirechloroformorisoamylalcohol.Usingthismethod,morethan600DNAsamplescanbeextractedinadaybyoneperson
6、,andtheextractedDNAissuitableforSSR(simplesequencerepeat)analysis.Thus,themethodcanbeusedincottonmoleculemarker-assistedselection.cotton;DNA;rapidextraction;cetyltrimethylammoniumbromidemethod;simplesequencerepeat[4]DNA提取是进行分子生物学研究的前提遥在rakhmon应用关联分析的方法对棉花基因定位棉
7、花叶片细胞破碎过程中袁棉酚等物质极易氧分析袁采用全基因组分析策略对285份陆地棉利化袁与蛋白质尧核酸等发生不可逆反应袁形成棕色用95个核心SSR标记扫描袁关联分析结果得出[1]复合物袁影响棉花高质量DNA的提取遥棉花分LD渊Linkagedisequilibrium冤在全基因组上的衰减子生物学研究工作也因此滞后于水稻等DNA提情况袁强LD位点SSR对占11%～12%袁LD衰减取相对较容易的作物遥1993年Paterson建立了棉普遍在小于10cM区间袁且对纤维品质做了关联[5]花基因组快速提取的CTAB渊Hexad
8、ecyltrimethyl分析曰2015年LiFuguang等解析了全长2173ammoniumbromide袁十六烷基三甲基溴化铵冤Mb的陆地棉TM-1基因组袁其包含7万多个蛋[2]法袁可以获得高质量的DNA袁使棉花分子研究白编码基因袁从而结束了陆地棉没有参考基因组[3]获得快速的发展遥2007年Guo等完成了第一张图谱的历史遥近年来袁随着棉花数量性状基因
