一种简单有效的植物RNA提取方法

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1、遗传HEREDITAS(Beijing)28(5):583～586,2006技术与方法一种简单有效的植物RNA提取方法张容,郑彦峰,吴瑶,王胜华,陈放(四川大学生命科学学院,成都610064)摘要:在提取缓冲液中加入皂土有效地去除了蛋白质并抑制RNAse,建立了一种高效的植物RNA提取方法。以麻疯树幼叶为材料,分别用TRIZOL,异硫氰酸胍法,SDS2KAc法和新创皂土法提取总RNA进行比较和验证,琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,只有皂土法能提出质量高,完整性好的RNA。进一步以皂土法提取的18SrRNA为模板的RT2PCR结果分析表明,用该法提取的RNA能用于分子克隆与

2、基因表达分析等后继分子生物学实验。该方法简便,快速,不失为一种经济高效的RNA提取方法。关键词:皂土;RNA提取;麻疯树中图分类号:Q781文献标识码:A文章编号:0253-9772(2006)05-0583-04ASimpleandEfficientMethodforPreparationofPlantRNAsZHANGRong,ZHENGYan2Feng,WUYao,WANGSheng2Hua,CHENFang(CollegeofLifeScience,SichuanUniversity,Chengdu610064,China)Abstract:Anewandefficie

3、ntmethodforisolationofplantRNAswasdevelopedbyaddingbentoniteintoextractionbufferinordertogetridofproteinandrestrainRNAse.Theelectrophoreticpatternsofnucleicacidsandabsorbanceat230nm,260nmand280nminaUV2VisspectrophotometerrevealedtheextractionwiththismethodcanobtainRNAswithgoodintegrityandpur

4、itywithoutanyapparentDNAcontaminationfromtheplantmaterialsrichinwithpolysaccha2rideandpolyphenollikeJatrophacurcasleaves,towhichTRIZOLreagent,SDS2KAcsolutionandGuanidineisothiocy2anatesolutionfailed.Furthermore,theresultofnucleargene(18SrRNAgene)amplifiedbyRT2PCRindicatedthattheRNAspreparedw

5、iththismethodcanmeettheneedsofmostmolecularbiologicalexperimentsincludinggenecloningandexpressionanalysis.Keywords:bentonite;RNAisolation;Jatrophacurcas要了解生物某个器官或结构的功能和作用机法,Rnase和蛋白质污染都是RNA提取过程中造成理,一个重要的方式就是从分子角度去研究其功能RNA提取质量下降的主要原因。在大多数RNA提基因的表达和调控,而分离得到高质量的RNA是进取方法中都是通过利用酚/氯仿进行抽提去除样品一步研究进行

6、的首要条件。目前关于RNA的提取中的蛋白质,虽然行之有效,但是RNA的损耗较大。方法有很多,常用的有TRIZOL试剂快速提取法、苯本文在提取缓冲液中加入了皂土(bentonite),减少[1][2]酚法、异硫氰酸胍法、CsCl梯度离心法、CTAB了后期酚/氯仿抽提的次数,从而降低了RNA的损[3][1,4][5]法,LiCl法、SDS2KAc法等。不管是那种方耗,缩短了实验时间,并且还能有效的抑制Rnase。收稿日期:20051106;修回日期:20060118基金项目:国家自然科学基金(编号:30270090)和四川大学科研启动基金资助项目[ThisWorkwasSuppor

7、tedbyGrantfromtheNationalNaturalScienceFoundationofChina(No.30270090)andFundforPromotingScientificResearchfromSichuanUniversity]作者简介:张容(1977—),女,重庆人,硕士研究生,专业方向:植物分子生物学。Tel:028285417281;E2mail:zhangrong7710@126.com通讯作者:王胜华(1957—),男,湖南人,副教授,博士,研究方向:植