番木瓜果实总RNA提取方法比较

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1、76广东农业科学·2008年第10期番木瓜果实总RNA提取方法比较袁贞，沈文涛，周鹏(中国热带科学院热带生物技术研究所，海南海El571101)摘要：通过吸光比值分析和非变性胶电泳，对番木瓜果实RNA不同提取方法进行了比较研究，结果表明．Trizol试剂法提取番木瓜果实RNA的OD260／OD230值在1．63～1．97、OD260／OD280值在1．79—2．00之间，具有方便快捷、完整性好、受多糖多酚影响较少以及无DNA和蛋白质污染等优点，对类似番木瓜果实成分的其他作物的RNA提取具有一定的借鉴意义。关键词：番木瓜果实：RNA；提取中圈分类号：T667．9；TQ91文

2、献标识码：B文章编号：1004—874X(2008)10—0076—04ComparisonoftotalRNAcontentofpapayabydiferentmethodsYUANZhen，SHENWen-tao，ZHOUPeng(／nst／tuteofTropicalBioscieneeandBiotechnologyChineseAcademyofTropicalAgricuhure，H~kou571101，Ch／na)Abstract：ThisarticledeterminedandComparisonoftotalRNAcontentofpapayabyTri

3、ZOlanddifierenttraditionalmethods，analysebyabsorbencyandgelelectrophoresis．ResultsindicatethatthevalueofRNA0D260／OD23Owerebetween1．63to1．97andthevaluesofOD260／OD280werebetween1．79to2．00．TheectrophoresisbandswereclearonagarosegelandintegrityofRNAwasgood．RNAwithhighqualityandhighquanitycanb

4、eextractedwiththismethodforobtainingsimilaritypapayaplants也highconcentrationsofphenolics．Keywords：papayafruit；RNA；extraction番木瓜(Caricapapaya)又称为木瓜、万寿瓜．属番CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)法等。这些方法已在许木瓜科多年生草本植物，是热带、亚热带果树之一。番多植物组织中应用并成功提取RNA。但是，有些植物木瓜鲜果具有丰富营养和食疗保健价值。其果实中含组织所含的物质种类极为复杂，尤其在某些果实中含有丰富的糖分、有机酸、蛋白质、脂

5、肪、多种维生素及有丰富的多糖以及一些尚未能确定的次生代谢产物．可溶性钙、铁等营养成分，并有健脾胃、助消化、通便、这些物质的存在常常会影响RNA提取的产量和纯度。清署解渴、解酒毒释血压、解毒消肿、通乳、驱虫等功所以人们针对不同的研究对象发展了一系列相对有效效。据美国营养学对水果果实内维生素、矿物质、纤维的RNA提取方法，而至今尚未见有关高质量番木瓜果素含量和热量的评估表明，番木瓜位居1O种最佳水肉组织总RNA提取的报道。为此。我们通过吸光比值果的首位【l1。因此，开展番木瓜果实的分子生物学研究分析和非变性胶电泳，对番木瓜果实RNA不同提取方可以对其品质改良和遗传育种等方面有

6、着重要的作法进行了比较研究，现将研究结果报道如下。用。1材料与方法从果实中提取RNA是进行分子生物学研究的必要前提。在进行Northern杂交分析、纯化mRNA以用1．1试验材料于体外翻译或建立eDNA文库、RT—PCR及差示分析供试的番木瓜品种为梭罗2号。取果皮绿色或黄等分子生物学研究时，都需要高质量的RNA。因此，从色的果实，去皮后将果肉切成约1cm，大小的小块，并番木瓜果实中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利用液氮速冻处理，防止果肉被空气氧化和RNAase污进行其分子生物学研究的关键。目前，有关植物组织染。RNA的提取方法很多，最常用的有胍法、苯酚法和试验使用的塑料

7、制品均用0．1％DEPC水溶液浸收稿日期：20o8—06_ol泡8h以上并经高温高压灭菌，玻璃或金属制品用作者简介：袁贞(1982一)，女，在读硕士生200~C高温烘烤8h以上，其他仪器设备或试剂均保证通讯作者：~m(1963一)，男，研究员，E-mail：zhp6301@126．corn干净且无RNAase污染771．2RNA提取方法组织约200mg于离心管中，加入提取缓冲液lmL(5试验设Tris一硼酸法、异硫氰酸胍法、PEG一异硫氰moYL异硫氰酸胍、pH8．0。50retool／L1rris—HC1、pH酸胍法、改良C