核桃叶片总 RNA 提取方法的比较研究.pdf

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1、山东农业科学2014，46(2)：11l2，l6ShandongAgriculturalSciences核桃叶片总RNA提取方法的比较研究陈新，刘洪对，贾建云，徐丽，张力思，刘庆忠(1．山东省果树研究所／山东省果树生物技术育种重点实验室，山东泰安271000；。2．山东省农业科学院国际合作处，山东济南250100)摘要：通过对比Trizol、EASYspin和Qiagen3种试剂盒提取方法，探讨适合核桃叶片总RNA提取的有效方法。结果表明EASYspin试剂盒提取的RNA纯度较高、完整性好，试验用时较短

2、，且试剂盒成本较低。关键词：核桃；总RNA；Trizol；EASYspin；Qiagen中图分类号：Q522文献标识号：A文章编号：lOOl-4942(2014)02-0011-03ComparativeStudyonIsolationMethodsofRNAfromWalnutLeavesChenXin。，LiuHongdui，JiaJianyun，XuLi，ZhangLisi，LiuQingzhong(1．ShandongInstituteofPomology／ShandongProvincialK

3、eyLaboratoryofFruitTreeBiotechnologyBreeding，Taian271000，China；2．DepartmentofInternationalCooperation，ShandongAcademyofAgriculturalSciences，．n0n250100，China)AbstractThreemethodsofTrizol，EASYspinRN09andQiagenwerecomparedinthispapertofindouttheeffectivemet

4、hodtoextracttotalRNAfromwalnutleaves．TheresultsshowedthattheRNAextractedwi山EASYspinRN09kithadthehigherpurityandgoodintegrality，andthismethodsavedtimeandcost．KeywordsJuglansregiaL．；TotalRNA；Trizol；EASYspinRN09；Qiagen核桃(JuglansregiaL．)是我国重要的干果来越高，因此，有必要筛选理

5、想的提取方法。树种，栽培历史悠久，分布广泛。目前，我国核桃本研究用Trizol、EASYspin和Qiagen3种试的栽培面积和产量均居世界第一位j。RNA提剂盒提取核桃叶片总RNA，通过对RNA纯度和取是分子生物学研究的基础，也是试验成败的关完整性的比较，筛选最适合核桃叶片总RNA提取键。关于植物RNA提取的方法很多，但由于不同的方法，为今后核桃的分子生物学试验奠定基础。植物材料细胞中次生代谢产物的种类、含量不同，1材料与方法适合的提取方法也不相同。核桃组织中富含多糖多酚等物质。酚类化合物在匀浆时极易

6、被氧化成1．1试验材料醌类物质，与RNA产生不可逆的结合，从而影响本试验所用材料采自国家果树种质泰安核桃RNA的分离纯化j。多糖的许多理化性质与板栗资源圃，随机从树的不同方位挑取生长发育RNA相似，在提取过程中易与RNA形成共沉正常的幼叶，立即液氮速冻，于一70~C超低温冰箱淀_3j，且后期很难将其分离开，对RNA的分离和中保存备用。纯化造成很大的干扰。若RNA提取方法不当，会1．2试剂与耗材导致RNA埋在多糖形成的粘稠胶状物中难于溶Trizol、EASYspinRN09与Qiagen3种试剂盒解、分离

7、，严重影响后续试验的稳定性。随着核桃分别购自北京全式金生物技术有限公司、北京艾研究的不断深入，对核桃总RNA质量的要求也越德莱(Aidlab)生物科技有限公司和德国凯杰公收稿日期：2013一lO—O8基金项目：科技部科技基础性工作资助项目“国家核桃板栗种质资源平台”(2013—048)；农业部作物种质资源保护项目(2014NWB009)；山东省农业良种工程项目[鲁科农字(2011—086)]作者简介：陈新，博士，助理研究员，主要研究方向为果树种质资源及分子生物学。E—mail：63249324@qq．o

8、om通讯作者：刘庆忠，男，研究员，研究方向：果树种质资源与生物技术育种。E—mail：qzliu001@126．tom12山东农业科学第46卷司。试验所用器皿用0．1％DEPC水处理24h以2．23种方法提取总RNA纯度和产率的比较上，然后高温灭菌；研钵、玻璃器皿等在180℃高3种方法获得的RNA用紫外分光光度计检温烘烤12h以上，备用。测，结果(表1)显示：Trizol试剂盒法提取的RNA1．3试验方法0D猢／OD珈为1．350，说明其中