仪器分析试验讲稿

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1、黄连药材的薄层色谱法鉴别一、目的要求1．掌握薄层硬板的制备方法2．掌握薄层色谱的一般操作方法3．了解薄层色谱在中药分析中的应用二、实验原理中药黄连中主要有效成分为小檗碱等生物碱类成分，利用薄层色谱可将药材中各成分分离，用盐酸小檗碱对照品加以对照，可起到鉴别黄连的作用。三、仪器与试剂1．仪器双槽层析缸、玻璃板10cm×20cm（厚0.5mm）、定量毛细管（2μl）、薄层涂布器、研钵、分析天平。2．试剂薄层层析用硅胶G、盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所）、黄连药材，其它试剂均为分析纯四、实验内容与步骤1．硅胶G薄层板的制

2、备称取硅胶G1份和0.7%的CMC-Na2.5份在研钵中同一方向研磨混匀，除去气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳移动涂布器进行涂布（厚度为0.5mm），涂好的薄层板置立平台上晾干，于105-110℃烘30分钟，置干燥器中备用。2．供试品溶液的制备取本品粉末约0.1g，置100ml容量瓶中，加入盐酸-甲醇（1：100）约95ml，60℃水浴中加热15分钟，取出，超声处理30分钟，室温放置过夜，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。3．对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.05mg的溶液，作为

3、对照品溶液。4．点样吸取供试品溶液2μl和对照品溶液4μl，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上。一般用定量毛细管点样于薄层板上，点样形状为圆点，点样基线距底边1.5cm，点样直径不大于2mm，点样间距1.5cm。5．展开点好样的薄层板放入展开缸中，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）为展开剂，展开，展距约10cm，取出，晾干。6．检出将薄层板置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。五、注意事项1．点样直径一般不大于2mm2．点样时注意勿损伤薄层表面。气相色谱法测定藿香正气水

4、中乙醇含量一、目的要求1.掌握用气相色谱法测定中药制剂中乙醇含量的方法。2.熟悉气相色谱定量分析操作方法。二、基本原理藿香正气水为酊剂，由苍术、陈皮、广藿香等十味药组成，制备过程中所用溶剂为乙醇。由于制剂中含乙醇量的高低对于制剂中有效成分的含量、所含杂质的类型和数量以及制剂的稳定性等都有影响，所以《中国药典》规定对该类制剂需做乙醇量检查。乙醇具挥发性，《中国药典》采用气相色谱法测定各种制剂在20℃时乙醇的含量（%，ml/ml）。三、仪器与试药1.气相色谱仪、微量注射器。色谱条件：填充柱，进样口温度为150℃，柱温为120℃，

5、检测器温度为200℃，氮为流动相，检测器为氢火焰离子化检测器。2.无水乙醇、正丙醇（AR）3.藿香正气水（市售品）四、操作步骤1.标准溶液的制备精密量取恒温至20℃的无水乙醇和正丙醇各5ml，加水稀释成100ml，混匀，即得。2.供试品溶液的制备精密量取恒温至20℃的藿香正气水10ml和正丙醇5ml，加水稀释成100ml，混匀，即得。3.测定法（1）校正因子的测定：取标准溶液2μL进样1次，记录对照品无水乙醇和内标物质正丙醇的峰面积，按下式计算校正因子：校正因子（f）=Cs/AsCR/ARAs为内标物质正丙醇的峰面积；AR为

6、对照品无水乙醇的峰面积；Cs为内标物质正丙醇的浓度；CR为对照品无水乙醇的浓度。（2）供试品溶液的测定：取供试品溶液2μL，连续注样3次，记录供试品中待测组分乙醇和内标物质正丙醇的峰面积，按下式计算含量：含量（Cx）=f×AxAs/CsAx为供试品溶液峰面积；Cx为供试品的浓度。取3次计算的平均值作为结果。藿香正气水中乙醇含量应为40%-50%。五、注意事项1.在不含内标物质的供试品溶液的色谱图中，与内标物质峰相应的位置处不得出现杂质峰。2.标准溶液和供试品溶液各连续3次注样所得各次校正因子和乙醇含量与其相应的平均值的相对标

7、准偏差，均不得大于1.5%，否则应重新测定。六、思考题1.内标物应符合哪些条件？2.实验过程中可能引入误差的机会有哪些薄层扫描法测定黄连药材中盐酸小檗碱的含量一、目的要求1．掌握薄层扫描仪测定样品含量的方法2．掌握薄层薄层定量的点样和展开技术3．练习薄层扫描仪的使用4．学会用外标两点法定量二、实验原理薄层扫描法是利用某种波长的单色光对薄层上的斑点扫描，通过测定该斑点对光的吸收度而确定其含量。本实验采用荧光扫描，测定黄连药材中盐酸小檗碱的含量。薄层扫描法的定量分析方法常用外标两点法，即在同一薄层板上点两个浓度的对照品，再点上一

8、定量的供试品，进行扫描测定。三、仪器与试剂1．仪器薄层扫描仪、双槽层析缸、玻璃板10cm×20cm（厚0.5mm）、定量毛细管（2μl）、分析天平、水浴锅、容量瓶。2．试剂薄层层析用硅胶G、盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所）、黄连药材，其它试剂均为分析纯四、实验内容与步骤1．硅胶G