肿瘤患者恶性胸%2f腹水来源自噬小体(MedAP)诱导IL-10%2bB细胞产生及其功能研究

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1、隶劫大·粤硕士学位论文肿瘤患者恶性胸／腹水来源自噬小体(MedAP)诱导IL．10+B细胞产生及其功能研究2015年5月Experimentalstudy0ntheproductionandfunctionsofIL．10+BceUsinducedbymalignanteffusions—derivedautophagosome(MedAP)fromtumorpatientAThesisSubmittedtoSoumeastUniVers埘FortheAcademicDegreeofMasterofMediciIleByC

2、hengFengSuperVisedbySchoolofMedicalSoutheastUhiVers时May2015舢删ⅧⅧ⋯洲洲洲⋯舢lY2922228东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：超鹾日期：21￡受：L

3、东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。中文摘要细胞自噬作为一个进化上十分保守的物质降解过程，对于维持细胞代谢、能量循环、细胞器更新起到重要的调控作用。研究发现自噬参与了一系列生理及病理过程并且与很多人类疾病的发生和发展有关，尤

4、其是自噬在肿瘤的发生和发展中起到重要作用【11。然而细胞内自噬水平并不是一成不变的，很多情况如轻度氧化应激和长时间营养剥夺会上调细胞内自噬水平【2】，新近研究发现自噬活性在多种肿瘤细胞中发生了变化，从而使自噬在肿瘤方面的研究也成为国际肿瘤治疗的研究热点。本实验团队前期研究已经证实了肿瘤细胞来源的自噬小体中包含了多种损伤相关分子模式(D』6山口s)分子如高迁移率族蛋白1(HMGBl)和热休克蛋白90(HSP90)。自噬小体中的这些模式子可以作为天然佐剂在免疫应答过程中发挥重要作用【引。众所周知，B细胞的主要功能是产生抗体、提

5、呈抗原、分泌细胞因子。然而近年来研究发现，一种全新的B细胞亚群一调节性B细胞(Regulato巧Bcell，Breg)在一些感染性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤的发生、发展和转归过程中发挥重要的免疫调节作用【4矧。Breg抑制免疫应答的方式有许多种，其中分泌IL-10是Breg介导免疫应答的主要方式，因此分泌IL．10也是Breg的主要特征。已有文献报道，Breg在肿瘤免疫中发挥了重要作用。一方面，Breg可以通过产生IL一10来抑制CD8+T细胞分泌IFN吖，从而促进肿瘤的发展。另一方面，调节性B细胞也可以通过募集Treg来

6、促进肿瘤细胞的肺转移【饥。虽然Breg在肿瘤的发生发展中发挥重要的调节作用，然而对于Breg在荷瘤小鼠及肿瘤患者体内是如何产生的仍需要进一步的研究。本实验团队前期研究发现，肿瘤细胞在某些条件下释放的自噬小体可以诱导小鼠B细胞活化、分泌抗体和细胞因子(IL．6，IL．10)峭J。另外，肿瘤细胞来源的自噬小体(TllIIlorcell-derivedautophagosome，TDAP)能够在体内和体外诱导小鼠B细胞为具有免疫抑制功能的IL．10+B细胞且TI)AP上的DAMP分子HMGBl在TDAP诱导B细胞成为IL．10+

7、B细胞过程中发挥了重要作用，所以本课题想要在动物实验的基础上进一步探讨肿瘤病人来源的自噬小体能否诱导人B细胞成为IL．10+B细胞及其诱导产生的IL．10+B细胞具有何种免疫调节功能。由于在肿瘤东南大学硕士学位论文形成阶段经历的低氧、低血供的营养匮乏过程，促使实体瘤中产生丰富的自噬现象并且多种肿瘤的病程中会产生含有大量肿瘤细胞的胸水或者腹水。所以我们猜想肿瘤病人恶性胸／腹水中可能也存在自噬小体，鉴于恶性胸／腹水标本容易获得，所以本课题将以恶性胸腹水来源的自噬小体(Mali印antef觚ions-d耐Ved删agosome，

8、MedAP)为研究对象，结合本课题组前期研究结果探讨Me山心对人外周血B细胞的影响。目的：本课题以临床肿瘤患者恶性胸腹水为研究对象，主要探讨以下问题：1)临床肿瘤患者恶性胸腹水中是否存在白噬小体．MedAP?2)MedAP能否诱导人B细胞成为IL．10+B细胞?3)Me山心诱导IL．10+B细胞对T细胞