《转录后加工》课件

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1、第6章Pre-RNAprocessing6.1原核生物rRNA和tRNA转录后加工6.1.1rRNA转录后加工6.1.1tRNA转录后加工原核细胞rRNA前体的加工6.1.1rRNA转录后加工rRNA的加工tRNA的加工分成3个阶段“斩头”：形成5′末端[RNaseP具有内切酶的活性，可切除前体tRNA5′端的前导序列（41nt）]去尾：切除多余的核苷酸形成3′-OH末端。缺-CCA的tRNA要用tRNA核酸转移酶加-CCA修饰：通过甲基化酶，硫醇酶，假尿嘧啶核苷化酶等进行修饰，如氨基酸臂的4-硫尿苷（4tu），D臂的2甲基

2、鸟苷（2mG），TψC臂的假尿苷（ψ）和反密码子环上的2异戊腺苷（2ipA)6.1.2.tRNA的加工6.2Pre-RNAprocessinginEuk.6.2.1概念pre-RNAcappingtailingsplicingmethylationediting生物学意义;matureRNA●preventpre-RNAfromdigestedbyRNaseastemplate(proteintranslation)linterruptedgene(interruptedRNA)moveintrons(stopcodon)6

3、.2.2pre-RNAcappingCap-0m7GpppXpYp-------(共有)Cap-1m7GpppXmpYp-------Cap-2m7GpppXmpYmp-------1、帽子的种类HN—CH3m7G帽子0其中:☆单细胞真核生物只有Cap—0☆Cap—1是其余真核生物的主要帽子形式☆Cap—2存在于某些真核生物中2、帽子结构的生成☆甲基供体都为S—腺苷甲硫氨酸（SAM）☆RNA鸟苷酸转移酶-----戴帽酶（cappingenzyme）3、帽子结构的功能（1）对翻译起识别作用------为核糖体识别RNA提供信号

4、Cap—0的全部都是识别的重要信号Cap—1,2的甲基化能增进识别（2）增加mRNA的稳定性，使5’端免遭外切核酸酶的攻击（3）与某些RNA病毒的正链合成有关（Cap—1、Cap—2）除帽子结构外的Euk.mRNA内部甲基化－－－m6A形式6.2.3pre-RNAtailing1、3’端-----约长200bp(大多数Euk.的mRNA)（poly(A)+poly(A)-）最近研究发现，原核生物的RNA转录后也有3’添加poly(A)的现象E.coli的poly(A)+聚合酶早在1962年就已发现2、poly(A)的生成a、

5、RNA末端腺苷酸转移酶（poly(A)聚合酶）催化前体－－ATP反应如下：多聚核糖核酸+nATPMg++或Mn++多聚核糖核酸(A)n+nPPib、添加位点内切酶(360KDa)切除一段序列由poly(A)聚合酶催化添加poly(A)内切酶的识别位点（有其它因子参与）切点上游13－20bp处的AAUAAA切点下游的GUGUGUG（单细胞Euk.除外）Proceedingofpre-RNAtailingRecognizingsiteCapCap特异内切酶识别AAUAAA及随后的GUGUGUG并在其间酶切，在3‘端聚合50-20

6、0poly(A)GUGUGUG3、poly(A)的功能c、对含poly(A)的mRNA失去poly(A)可减弱其翻译（1）可能与核质转运有关（2）与mRNA的寿命有关（3）与翻译有关a、缺失可抑制体外翻译的起始b、胚胎发育中，poly(A)对其mRNA的翻译有影响（非poly(A)化的为储藏形式）（4）poly(A)在分子生物学实验中有很大应用价值a、也可将oligo(dT)与载体相连，从总体RNA中分离纯化mRNAb、用寡聚dT（oligo(dT)）为引物，反转录合成cDNA6.2.4.RNASplicingPrimary

7、transcriptTheconsensussequencesforhuman5’splicesite(5’剪接位点):theexon-intronboundaryatthe5’endoftheintron3’splicesite(3’剪接位点):theexon-intronboundaryatthe3’endoftheintronBranchpointsite(分枝位点):anAclosetothe3’endoftheintron,whichisfollowedbyapolypyrimidinetract(Pytract)

8、.RNAsplicingmodelsgroupIofintron(chloroplast&mitochondrial)真核生物细胞器基因，低等真核生物核rRNA基因GroupIIofintron:只见于某些真菌线粒体和植物叶绿体基因hnRNA的拼接：需要剪接体,由核糖核蛋白介导★tRNA基