Agilent1260高效液相色谱仪

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1、山东康源堂中药饮片有限公司标准操作规程题目:Agilent1260高效液相色谱仪标准操作规程编号：颁发部门：质量管理部起草：日期：审核：日期：批准：日期：执行日期：分发部门：质量管理部、检验室依据：《中国药典》2015年版四部1.目的：正确使用仪器，确保化验结果的准确度、精密度，延长仪器使用寿命。2.范围：适用于Agilent1260高效液相色谱仪及色谱数据工作站的操作3.职责：3.1操作人员：按照本操作规程操作仪器，对仪器进行自检，作使用登记。       3.2负责人：负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期自检、仪器综合管理。4.要求：4

2、.1开机 4.1.1溶剂准备 按要求准备所需流动相，每瓶均超声10min排气，将原来浸泡在甲醇中的滤头取出对应放在各个流动相中（A：二次蒸馏水；B:色谱纯甲醇；C：色谱纯乙腈；D:缓冲溶液；）。 4.1.2开启工作站 4.1.2.1启动计算机 打开计算机电源，登陆 windows 操作系统。 4.1.2.2启动工作站     打开 Agilent 1260 各模块电源，待 Agilent 1260 各模块自检完成后(各模块右上角指示灯为黄色或者无色)，点击屏幕桌面图标“HPLC -1260（联机）”，则进入工作界面。 模块右上角状态灯颜色说明： 无

3、色：未开电源或者模块准备就绪； 黄色：模块未准备就； 绿色：正在进样分析； 红色：模块出错； 所有模块红色：仪器有漏液 工作站图形颜色说明： 绿色：模块准备就绪；黄色：模块未准备就绪； 蓝色：正在进样分析；红色：出错或者不能联机； 灰色：此模块没启用。 将鼠标移至系统或各个模块的状态指示栏 ，系统会自动显示未就绪或出错的原因。4.1.3冲洗流动相管路 反时针旋开泵模块上的溶液排空阀 ，右键单击泵视图的空白处，选择“方法”，设置“流速”为 5ml/min。将实验中需要的各个通道分别设置“溶剂”为 100%，点击确定开始冲洗，每个通道冲洗3-5分钟，若

4、冲洗通道时压力显示超过10 bar，则可换过滤白头。 4.1.4平衡柱子 冲洗完柱子，按要求调整流动相速率及流动相比例，顺时针旋转排空阀，关闭溶液排空阀(确认泵流量为 1ml/min)，然后右键点击需用检测器模块视图的空白处，选择“方法”进入检测器的参数设置界面，按要求设置参数（停止时间与泵一致），后点击右键，选择“控制”，在弹出的窗口选择打开，开始平衡柱子，监视信号基线和压力，等待平稳后即可进样（若用缓冲溶液和有机相作为流动相，先用水和有机相平衡30 min，比例与所要求的缓冲溶液和有机相比例一致），待基线平稳后换用所要求的缓冲溶液和有机相按比例

5、混合平衡柱子30 min）。 4.1.5保存方法  将编辑好的方法保存起来。 4.2进样分析     在每个样品进样前，从“运行控制”菜单中点击“样品信息”，编辑好数据的保存路径。进样时，逆时针旋动进样器六通阀旋钮，进样完毕立即顺时针旋回该旋钮，并拔出进样针，妥善放置。4.3数据分析方法编辑 点击屏幕桌面图标“HPLC-1260（脱机）”。从“文件”菜单中选择“调用信号”选项，选中您的数据文件名，点击确定，数据被调出。从“图形”菜单中选择“信号选项”，设置信号包括的信息，从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的显示时间或选择“ 自定义量程”

6、手动输入 X、Y 坐标范围进行调整，点击“确定”。反复进行，直到图的显示比例合适为止。 4.4积分 4.4.1自动积分方法从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。后将积分参数存入方法，最后，选择“方法->保存方法/方法另存为”或直接保存数据分析方法。 4.4.2手动积分方法 选择“积分->积分事件”，选择“手动积分事件” ，如需更改，更改自动积分方法后，保存并关闭“积分事件”。选择“积

7、分->更新方法中的手动积分事件”，保存手动积分方法；选择“积分->应用方法中的手动积分事件”，将手动积分方法应用到当前谱图中；选择“积分->删除方法中的手动积分事件”，将从当前方法中删除手动积分事件。最后，选择“方法->保存方法/方法另存为”或者直接保存数据分析方法。 4.5校正 为“标准样品”建立校正曲线(工作曲线/标准曲线)，在色谱图正确积分后才可进行校正设置。4.5.1校正设置 从“文件”菜单中选择“调用信号”选项，选中您的标样数据文件名，点击确定，数据被调出。选择“校正->校正设置”设置校正参数。参考峰/其他峰---分钟栏留空，修改“%”以

8、改变确认保留时间范围内的峰都被认为是参考/其他峰含量单位---填写样品含量单位选择缺省校正曲线方法，“确定”退出。4.5.