浙液相色谱讲义八：检测器-原理及操作

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1、检测器WatersLCSchool培训教材对检测器的要求高灵敏度可重现的设置合适的带宽快速或可变的时间常数宽的线性响应容易使用及保养自我诊断功能检测器的种类衡量检测器的指标灵敏度∶S=△R/△Q△R是检测器响应值的增量△Q是样品量的增量噪音∶没有样品时检测器的最大输出信号漂移∶检测器在一段时间内响应值的变化线性动态范围∶最大线性相应与最小检出限之比最小检测限∶样品产生两或三倍于噪音信号时的浓度信噪比∶S/N注意∶最小检测限不是一个单纯的检测器指标。它实际上是评价整个色谱系统的指标，包括了色谱系统、分离机理、色谱柱在内的综合性指标，信噪比亦如此紫

2、外-可见光检测器基于样品池(S)中的样品对光产生吸收，有信号差如是可变波长检测器，还有分光系统(光珊)Beer'sLaw-BEER定律光能量∶P0=透过溶剂的光能量P=透过样品的光能量光通量(透过率%)∶T=P/P0吸光度∶A=-log(T)=log(P0/P)吸光度=单位吸光度×流动池长度×溶液浓度即∶A=abc同紫外检测器灵敏度有关的因素信号强度(S)从BEER定律可看出样品的种类样品浓度及进样的体积检测池的长度所使用的波长，检测器的时间常数噪音(N)流动相所使用的波长，灯的能量检测器的时间常数非检测器因素-电噪音，泵脉动等紫外检测器的溶

3、剂影响不同种类溶剂有其截止波长溶剂的质量好坏对其截止波长有影响为何溶剂质量不好?含紫外吸收的杂质溶解在其中的氧气缓冲液溶质的紫外吸收背景吸收的影响背景吸收减少线性范围许多溶剂产生背景吸收示差折光效应示差折光效应的危害产生假的紫外吸收变化∶定量误差，光谱图不准确梯度时严重的基线漂移梯形池设计（曾用于440/441，490及486检测器）最初的专利设计Waters2487检测器用于2487的消除示差折光效应的设计专利的梯形狭缝设计，消除示差折光效应同时；进一步提高灵敏度及线性范围Waters2487的其他特点：双通道、高灵敏度仪器内集成比色皿位置多

4、种功能，胜任更复杂的工作MaxPlot，RatioPlot，灯优化软件等梯形狭缝(TaperSlit)流动池Patentappliedfor不同种类流动池的比较普通的圆柱形池梯形池梯形狭缝池进口出口进口出口进口出口486的面板及操作按此键后可调波长(190nm-600nm)波长数值显示在面板下面一行按此键褉环改变面板上面一行显示的内容Absorbance:吸光度Reference:参比池的能量Sample:样品池的能量调正满刻度量程对积分输出无作用调正滤波参数常设为∶1.0自动调零486的Diagnostics操作按此键后，进入Diagnos

5、tics状态面板下面一行显示∶ddd，按相应的数字可进行不同的校正，常用的如下∶(详细参见操作手册)4，重新校正波长12，显示检测器(486)的版本号13，显示及修改IEEE地址(2-29)，缺省值及非IEEE操作是015，正常参比及样品池位置16，转换参比及样品池位置，常用于制备20，设置关灯时间21，设置积分输出的偏置26，设置扫描参数∶起、止波长，步宽(nm)，停留时间27，和26号参数一起工作，完成扫描2487的面板及操作回车键分屏显示键选项移动键主屏幕方法调用，A/B通道参数显示切换设置及诊断单/双波长方式切换，自动调零运行/停止键第

6、二功能键监视色谱图2487的显示面板通道吸光度灯开/关波长灵敏度下一画面运行时间自控/遥控诊断开/关键盘锁开/关单/双波长Shift开/关光电二极管矩阵检测器简称∶PDA(PhotodiodeArrayDetector)兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息在收集色谱图的同时，得到光谱图色谱峰的纯度鉴定，色谱峰的确认任意波长的再处理对PDA的要求∶色谱的灵敏度光谱的灵敏度光谱的分辨率光电二极管矩阵检测器示意图Waters的光电二极管矩阵检测器全新的光路设计不用聚光镜及各种消色差镜，以减少光路损失反相梯形光束流动池，用以消除示差折光效应灵敏度及分辨

7、率的同时提高分辨率：1.2nm噪音：±1.510-5AU996与传统光学单元的比较示差折光效应的影响从硬件上消除示差折光效应带来的好处不损失灵敏度及分辨率不会因错选参比波长而损失色谱及光谱信息只需设定如下参数即可操作∶波长范围分辨率每秒采集的光谱数操作极为简便不需费神选择参比波长及其带宽Waters996的操作996需同2010一起工作所有的操作在2010上完成示差折光检测器DifferentialRefractiveIndexDetectorWaters410及2410的日常操作调整检测器内、外(如有柱温箱)温度以5ml/min的流速“pu

8、rge”参比池五分钟不接色谱柱！视室温变化大小，需较长时间的平衡参数设置按文献值或实验决定通常410可以在白天结束工作后不关机，节省第二天的平衡时