细菌鉴定之生化反应

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1、细菌鉴定之生化反应南医大三附院检验科江培涛常用试验碳水化合物的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验碳源和氮源利用试验各种酶类试验抑菌试验一碳水化合物的代谢试验1糖（醇、苷）类发酵试验原理：细菌含有发酵糖（醇、苷）的酶分解糖类产酸、产气、或仅产酸培养基：含有0.5%~1%的糖（醇、苷）的液体、半固体、固体、或微量生化管方法：纯菌种接种培养基，要求的温度，数小时至两周，微量管注意保持湿润，以免干燥结果：能分解糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应若能产气时，培养基可出现开裂气泡等现象意义：肠杆菌科尤为重要2氧化-发酵试验（O/F）原理：细菌分解葡萄糖的过程

2、中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；可以进行无氧降解的，称为发酵型；不分解葡萄糖的称为产碱型培养基：HL二氏培养基方法；待测菌同时接种两只HL培养基，其中一只滴加无菌的液体石蜡，高度不少于1cm，35℃培养48h或更长结果：两只均无变化为产碱型；两只均产酸为发酵型；仅不加石蜡的产酸为氧化型意义：肠杆菌科与非发酵菌的鉴别；葡萄球菌与微球菌的鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型3ONPG（β半乳糖苷酶试验）原理：有的细菌可以产生β半乳糖苷酶，分解邻-硝基酚-β半乳糖苷生成黄色的邻-硝基酚方法：从KIA上取菌，于0.25ML无菌生理盐水中制菌悬液，加甲苯一滴，使酶释放

3、。37℃水浴5min,加0.25mlONPG试剂，水浴20min-3h观察结果结果：呈现黄色为阳性，一般20-30min内显色意义：迅速及迟缓发酵乳糖的细菌为阳性，不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定注意：该试验不一定与分解乳糖相一致，决定于细菌产生的酶及其活性七叶苷水解试验原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，后者与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应生成黑色化合物，使培养基呈黑色方法：将待测菌接种于七叶苷培养基，培养后观察结果结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性意义：D群链球菌与其他链球菌的区别，前者为阳性；肺炎克雷伯、

4、阴沟肠杆菌多阳性V-P试验原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中被氧化为二乙酰，进而与培养基中蛋白胨内精氨酸中的胍基作用，生成红色化合物，即为V-P试验阳性。α奈酚可加速此反应培养基：葡萄糖蛋白胨水方法：待测菌接种于培养基，35℃48h，加入甲液（6%α奈酚酒精溶液）和乙液（40%KOH溶液）结果：20min内出现红色为阳性，如无红色，且于35℃4h后仍如故即为阴性意义：本试验常与甲基红一起试验，前者阳性则后者多阴性甲基红试验原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者进一步生成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的PH降至4.5

5、以下，加入甲基红试剂后显红色即阳性。若产酸量少，或进一步转化为其他物质，则培养基的PH仍在6.2以上，加入甲基红试剂后显黄色，为阴性培养基：葡萄糖蛋白胨水方法：待测菌接种于培养基，2-4天后，加入甲基红试剂，观察结果结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳性，黄色为阴性意义：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸杆菌、等为阳性；肠杆菌属、哈夫尼亚菌属为阴性7葡萄糖酸盐试验原理：某些细菌能氧化葡萄糖酸盐作为唯一碳源，生成2-酮基葡萄糖酸盐。加入班氏试剂，于沸水煮沸10分钟，出现砖红色沉淀，表明有葡萄糖酸盐的存在培养基：2-酮基葡萄糖酸盐肉汤方法：待测菌接种于培养基，35℃培

6、养18-24h，于其中加入0.3ml浓缩班氏试剂，然后沸水中煮沸10分钟，出现砖红色沉淀表明有葡萄糖酸盐的存在意义：用于肠杆菌科分类二蛋白质和氨基酸的代谢试验1明胶液化试验原理：细菌产生明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体变为液体方法：待测菌接种于明胶培养基，22℃培养7天。若用35℃孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察前先置4℃冰箱30min再观察结果：培养基呈液化状态为阳性意义：多数假单胞菌能液化明胶，肠杆菌科细菌如：沙雷菌、变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶2吲哚（叮基质）试验原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚

7、，当加入吲哚试剂-柯氏试剂（对二氨基苯甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚培养基：蛋白胨水方法：待测菌接种于培养基，35℃培养24-48小时，沿试管壁缓慢加入吲哚试剂结果：于两者接触面出现红色为阳性，无色为阴性意义：肠杆菌科细菌的鉴定；大肠杆菌、产酸克雷伯为阳性试剂：柯氏试剂（对二氨基苯甲醛）与欧氏试剂的区别：前者含戊醇，后者含酒精，都含浓盐酸，前者主要成分为后者10倍，后者灵敏度更高硫化氢试验原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化氢，后者遇亚铁离子或铅则形成黑褐色的沉淀。培养基：醋酸铅培养基方法：待测菌接种于醋酸铅培养基，35℃培养24-48小时观察结

8、果结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性意义：沙门菌属、