槐花米中芦丁的提取分离与鉴定

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1、槐花米中芦丁的提取分离与鉴定实验一预试；背的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。实验二产品的精制:重结晶；晋的水解。实验三昔、昔元的定性鉴定；试、试元的TLC鉴定；糖的纸层析鉴定。槐花米中芦丁的提取分离与鉴定（-）预试；昔的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。（二）产品的精制:重结晶；甘的水解。（三）昔、昔元的定性鉴定；貳、貳元的TLC鉴定；糖的纸层析鉴定。教学目的：1.掌握酸碱法提取黄酮甘类的原理及方法。2.掌握化学鉴别试验、背水解、薄层层检查等手段在苜类结构鉴定上的作用。已知重要成分及其性质1.芦丁（芸香rutin）淡黄色针晶，水屮结晶者含3分结晶水，C27H30O16-3H2Ol

2、OOmmHg和11O°C加热12小时后，变为无水物，无水物于25°C变棕，115〜7°C软化，214〜5°C发泡分解，lg芦丁溶于约3OOml冷水，200ml沸水，7ml沸甲醇，溶毗噪，甲酰胺和碱液，微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿，二硫化碳、乙瞇、苯和石油瞇。2.榊皮素(Guereetin)为芦丁的苜元，CI5H

3、0O7,MW302.23；含二分子结晶水为黄色针晶，（稀乙醇），5〜7°C失水，314°C解，lg溶于290ml无水乙醇、23ml沸乙醇，溶于冰醋-般在碱水中溶解显黄色，几不溶于水。R=——glu一rhaR=—OH芦丁懈皮素3.皂昔(Saponin)易溶于

4、毗呢。能溶于200倍的甲粗品为白色粉末，mp210°C〜20°C（dec）o醇，酸水解得下列两种背元及糖。糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。（1）白桦酯醇（Betulin）无色针晶，mp215〜2°C,能溶于醋酸,丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等；难溶于右油醯和水。(2)槐花二醇(Sophoradiol)无色针晶,醯、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。整套实验的过程：预试——提取分离——鉴定实验一预试；貳的碱提取，酸沉淀实验目的通过系统预试，了解检品中含有哪些类型的成分，对能含有哪些化学类型的成分，为进一步提取分离冇效成分捉供线索。实验原理原理：芦丁即芸香貳，它属黄酮貳类

5、，其分子中的酚径基呈弱酸性,可用碱溶、酸沉淀的方法进行提取。再利用它易溶于热水、热甲醇，难溶于冷甲醇的性质分离精制。实验内容预试；昔的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。实验所用试剂及仪器：试剂：槐花米15g+lg,乙醇，镁粉，浓盐酸，1%三氯化铝，3%三氯化铁乙醇溶液，10%口一蔡酚醇液，蒸馆水，硅胶G,0.3%〜0.5%CMC水溶液仪器：研钵天平试管水浴装置（70°C）过滤量筒滤纸，200目尼龙布，电炉，真空泵，布氏漏斗，剪刀，玻璃板，铺板器，薄层板放置架，漏斗实验步』一、预试：（-）意义：通过系统预试，了解检品中含有哪些类型的成分，可能含有哪些化学类型的成分，为进一步提取分

6、离有效成分提供线索。（-）实验内容：1.记录待预试天然药物（以卜•均称检品）的学名、植物來源、药用部分及特征（如色泽、嗅、味等）。2.将检品研成粗粉或剪切成碎块（如为新鲜品，应先在60°C左右的温度干燥）。3.预试液的制备：（1）乙醇提取液的制备称取检品（如槐花米）lg,压碎于试管中加乙醇10ml,在70°C水浴上浸渍20分钟，过滤，滤液供以下试验（其屮喷三氯化铝、三氯化铁各用一张经圆形滤纸层析后的滤纸片）（2）预试实验：①镁粉一盐酸反应量取检品液2ml加入镁粉少量及浓盐酸4〜5滴，放置（或于水浴中加热），观察红色产生（即可认为可能含有黄酮类化合物）②三氯化铝反应取检品液1

7、滴加1%三氯化铝溶液1〜2滴，出现黄色，且荧光加强。（也可将醇提取液滴于滤纸上，喷以1%三氯化铝溶液，再同以上进行观察比较）取检品液1滴滴于滤纸上，在其旁滴一滴1%厂氯化铝溶液，在两液融合处出现黄色（可能含有3・OH、4-C=O或5-OH>4-C=O或邻二酚OH）③三氯化铁反应将检品液滴于滤纸屑上，喷上3%三氯化铁乙醇溶液，出现绿、蓝或棕色斑点。取滤液滴于滤纸上，在英旁滴一滴3%三氯化铁，在两液融合处棕色斑点（含有酚-OH）④Q—蔡酚反应（Molish反应）取乙醇提取液lml,加10%a—蔡酚醇液1〜2滴，摇匀，沿管壁缓缓加入浓硫酸lml,不振摇，两液界面间出现紫色环（此反

8、应试糖、貳类化合物，反应较灵敏,若有微量滤纸纤维或中草纱粉末存在于溶液中，也能产生上述反应，故在过滤时应注意）。（可能含有糖或貳）二、提取分离：碱提取、酸沉淀称取槐花米粗粉15g,置于500ml烧杯中,加入沸水250ml及硼砂lg,在搅拌下加石灰乳调至pH=8〜9保持微沸30分钟，不断补充蒸发掉的水份，以保持pH=8〜9,趁热用尼龙布拧挤过滤（或抽滤）。残渣再加4倍量的水煎一次，趁热用尼龙布拧挤过滤（或抽滤）。合并滤液，在60°C〜70°C条件下，用浓盐酸调至于pH=4〜5,静置1小时，析出粗制芦丁，抽滤。弃去滤液