槐花米中芦丁的提取纯化与鉴定

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1、槐花米中芦丁的提取纯化与鉴定一、目的要求：1.掌握酸碱法提取黄酮昔类的原理及方法。2.掌握趁热过滤及重结晶等基体操作3・黄酮类成分乙醇纯化方法4O掌握黄酮类成分定性与定量鉴定方法。二、实验原理芦丁(Rutin)又称芸香昔(Rutioside)芦丁是黄酮类植物的一种成分，黄酮类植物成分是存在于植物界并具有以下基本结构的一类化合物：就黄色色素而言，它们的分子中都有一个酮式拨基又显黄色，所以称为黄酮。黄酮的中草药成分几乎都带有一个以上轻基，还可能有甲氧基、绘基、绘氧基等其它取代基，3、5、7、4几个位置上有轻基或甲氧基的机会最多，6、8、V、2等位置上有取代基的成分比较少见。由于黄酮

2、类化合物结构中的疑基较多，大多数情况下是一元昔，也有二元昔。芦丁是黄酮昔，其结构如下:芦丁(Rutin)黃则骨架芦丁的提取原理:芦丁于热水，难溶于冷水。其分子结构中具有较多的酚轻基，显弱酸性，在碱中易溶解，而在酸性条件下易析出沉淀。故可采用碱提酸沉法提取芦丁。2.芦丁提取纯化原理芦丁中具有多个酚轻基，呈酸性，在酸液中电离受抑制溶解度降低，而在碱液中易成盐而增加水溶性，实验中利用芦丁的这种特性来实现提取和析晶的。芦丁在冷.热乙醇中溶解度差异很大,实验中釆用先以热乙醇溶解再冷却析出的方法进行精制。3・芦丁定性与定量鉴定原理取纯化后的芦丁2刃加乙醇15ml,置水浴上加热5分钟，滤过,取滤

3、液lml,加浓盐酸1〜2滴，再加镁粉少许，即显樱红色。使用紫外分光光度计通过测溶液的吸光度求出对应的浓度。三实验仪器紫外分光光度计，水浴锅，研钵，冷凝回流管，天平，广泛PH试纸,布氏漏斗，量筒，烧杯，滴定管，吸量管等。四实验试剂槐花米，饱和石灰水，镁粉，酚猷，95%乙醇，盐酸，0・157mg/ml的芦丁标准液,五实验步骤称取3g槐花米于研钵中研成粉状，置于50mL烧杯中，加入30mL饱和石灰水溶液，加热至沸，并不断搅拌，煮沸一刻钟后，抽滤，滤渣再用20mL饱和石灰水溶液煮沸lOmin,合并滤液用15%盐酸中和,调节PH二3-4,放置1-2小时，使沉淀，抽滤，水洗，得芦丁粗产物。4.

4、将制得的芦丁粗品置于50ml烧杯中，加入30ml水，加热至沸,并不断搅拌，并慢慢加入10mL饱和石灰水溶液，调节PH二8-9,等沉淀溶解后，趁热过滤，滤液置于50mL烧杯中，用15%盐酸调PH=4-5,静置30min,芦丁以浅黄色结晶析出，抽滤，水洗，烘干得芦丁纯品操作流程:槐花米粉末煮沸提取，抽滤饱和石灰水中和、沉淀、抽滤》粗提物15%HC1洗涤粗品煮沸、溶解饱和石灰水15%HC1溶液洗涤趁热过滤滤液5.取所提取的芦丁粗品，加入无水乙醇约30倍，水浴热回流溶解，趁热抽滤，将滤液浓缩至原体积一半，转移至烧杯中，放置,冰浴，析出结晶，抽滤，称重，计算得率。6・黄酮类定性鉴定:1。盐酸

5、-镁粉试验：取样品数毫克，加稀醇加热溶解，加镁粉50-100毫克，滴加浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。2.标准曲线的制备精密吸取0.157mg/ml的芦丁标准液0,1.0,1:=.I•2.0,3.0,4.0,5.0,6.0ml,分别置于IOm1容量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，在250nm波长处作紫外检测。回归方程为C-0.3216A十0.0007,相关系数r=0.9994。4回收率用标准加入法测定紫外检测的回收率。5测定样品芦丁含量精密称取样品一定量，置50ml容量瓶中用30%乙醇稀释至刻度，再精密量取容量瓶中，用30%乙醇稀释至刻度，按标准曲线同样条件作紫外检测

6、。由标准曲线计算芦丁量.并计算含量。参考文献曾荣.尤曼桜中芦丁的测定和提取技术体系初步研究［D］四川农业大学，2005・马国刚.槐米芦丁的超声波辅助提取及化学修饰研究［D］北京林业大学，2008・赵强,廖天录，王俊峰,杨明.槐花屮芦丁的提取及检测方法的建立研究［J］甘肃畜牧兽E,2010,(03)・董晓宁，赵强，王俊峰.槐花中芦丁的正交提取工艺及抗氧化活性研究［J］畜牧与饲料科学,2010,(02)曾荣，罗学刚.尤曼桜中芦丁的提取方法研究［J］食品科学,2006,(11)张黎明，赵希，张小利，王玲玲.槐米总黄酮提取物的热分析指纹图谱［J］应用化学,2007,(10)姜清彬，陈学泽.

7、芦丁的提取及槐花复合保健茶的研制［J］中南林业科技大学学报，2008,(01)・