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1、菌核侧耳原生质体制备再生探究摘要：采用正交试验法，对菌核侧耳原生质体制备再生条件进行优化。结果表明，菌核侧耳原生质体制备最佳条件为：取培养3d的菌丝体，以0.6mol・L—1甘露醇作为渗稳剂，在1.5%溶壁酶的酶液中，30。(2酶解1h,其原生质体得率最高，可达1.19X107o最佳再生条件为：取培养9d的菌丝体，利用0.6mol•L—1的蔗糖作为渗稳剂，在1.0%L+2.0%C+l.0%S的酶液中，36°C下酶解4h,其原生质体的再生率最高，可达2.43%O关键词：菌核侧耳；原生质体制备；再生；正交试验中图分类号：S646.14文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.10
2、06—6500.2012.05.006StudyonProtoplastPreparationandRegenerationofPleurotustuber—regiumZHANGYue,GUOCheng—jin(CollegeofLifeScience,TianjinNormalUniversity,Tianjin300387,China)Abstract：Usingtheorthogonalexperimentmethod,theconditionsofprotoplastpreparationandregenerationofPleurotustuber一regiumwereopti
3、mized.TheresuItsshowedthattheoptimumpreparingconditionofPleurotustuber——regiumwere3dmycelium,with0.6mol•L一1mannitolasosmoticstabilizer,intheenzymesolutionof1.5%lywallzyme,digestingat30°Cfor1h,thepreparationrateofprotoplastwasthehighest,theprotoplastyieldreached1.19X107・Theoptimalregenerationcondit
4、ionwereusingmyceliumcultured9d,adding1.0%lywallzyme,2.0%cellulaseand1.0%snailase,with0.6mol•L—1sugarasosmoticstabilizer,digestingfor4hattheconditionof36°C,thehighestprotoplastregenerationratewas2.43%.Keywords：Pleurotustuber一regium；protoplastpreparation；regeneration；orthogonalexperiment菌核侧耳[Pleurot
5、ustuber一regium(Frl)Sing(1951年)],又名具核侧耳、茯苓侧耳、南阳侧耳、虎奶菇。属真菌界(KingdomFungi)、担子菌门(Basidiomycota)、层菌纲(Hymenomycetes)、伞菌目(Agaricales)、侧耳科(Pleurotaceae)、侧耳属(Pleurotus)[1]。主要分布在热带和亚热带地区，是一种珍稀的药食兼用菌，由菌核和子实体两部分组成，生于森林内土中的腐木或木桩上。菌核侧耳具有非常丰富的药用价值，其作为功能性食品可以治疗哮喘、冠心病、感冒、胸痛、天花、高血压、神经系统等疾病，外敷可以治疗乳腺炎，还能促进胎儿的发育，提高早产儿
6、的成活率，近年来研究表明，菌核侧耳还具有较好的抗肿瘤的作用[2—3]o同时，其营养价值也较为丰富，含有较高的蛋白质、人体必需氨基酸、矿物质及活性多糖等物质[3—4],是一种极具开发前景的药食兼用菌。近年来，关于菌核侧耳的研究更多集中于药理成分、营养成分和栽培技术等方面，而有关原生质体制备的研究少见，未见其原生质体再生的深入研究。作者通过正交试验系统地研究了多种因素对菌核侧耳原生质体制备及再生能力的影响，优化了其制备与再生的条件，为菌种改良、新品种选育以及原生质体融合等研究提供理论依据，也为充分利用和保护这一菌种资源创造条件。1材料和方法1.1材料1.1.1供试菌株菌核侧耳由中国林业菌种保藏
7、中心提供。1.1.2试验试剂马铃薯（浸提液）、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、酵母粉（生化试剂）、麦鉄（浸提液）、琼脂（天津市珠江卫生材料厂）、KH2P04、MgS04・7H20、VB1.VB6、甘露醇、NaClo1.1.3试验仪器SW—CJ—2FD净化工作台（苏州净化设备有限公司），BS224S电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司），SPX—250B—Z型生化培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），超净工作台，Galen显微镜（
