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1、美味蘑菇原生质体制备及再生探究摘要：采用正交试验方法对美味蘑菇原生质体制备与再生最佳体系进行筛选，包括酶条件、渗透压稳定剂、菌龄、酶解的时间及温度。结果表明，原生质体最佳制备条件为液体静置培养12d菌丝体,0.6mol-L-1NaCI作为渗透压稳定剂，在2%溶壁酶和3%蜗牛酶作用下,28°C酶解3h,原生质体制备率为3.6x106个・mL-1;最佳再生条件为液体静置培养12d菌丝体,0.6mol-L-1MgSO4・7H2O作为渗透压稳定剂，在2%溶壁酶和1%蜗牛酶作用下，359酶解1.5h，原生质体再生率为3.01%o关键词：美味蘑菇；正交试验；原生质体；制备；再生中图分类号：
2、Q949.329+.81文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2012.04.038ResearchonProtoplastPreparationandRegenerationofAgaricusedulisBullLIUHong-li,GUOCheng-jin(CollegeofLifeScience,TianjinNormalUniversity,Tianjin300387,China)Abstract:TheoptimalpreparationandregenerationconditionsofAgaricusedulisBullp
3、rotoplastwereinvestigatebyOrthogonalarraydesign,includingenzymesystem,osmoticstabilizer,cultureage,enzymolysistemperature,andenzymolysisduration.TheresultsshowedthattheoptimalpreparationconditionsofAgaricusedulisBullprotoplastwere12-day-oldliquidmyceliumintheenzymesolutionof2%Lywallzymeand3%
4、Snailase,digestedfor3hoursat28°Cwith0.6mol-L-1NaCIasosmoticpressurestabilizer,andtheobtainedpreparationrateachieved3.6x106mL-1.TheoptimalregenerationconditionsofAgaricusedulisBullprotoplastwere12-day-oldliquidmyceliumintheenzymesolutionof2%Lywallzymeand1%Snailase,digestedfor1.5hoursat35°Cwit
5、h0.6mol-L-1MgSO4-7H2Oasosmoticpressurestabilizer,andtheobtainedregenerationrateachieved3.01%・Keywords:AgaricusedulisBull;orthogonalarraydesign;protoplast;preparation;regeneration美味蘑菇(AgaricusedulisBull)[1],草腐菌,其菌丝体EiC和子实体生长温度几乎相同，且菌丝体由营养生长向子实体转化的繁育阶段不需温差刺激。美味蘑菇耐高温，生活力强,适应性广，适宜夏季栽培，为夏季增添新品种，利
6、于实现蘑菇周年生产，增加菇农经济效益。原生质体制备与再生是原生质体技术的关键步骤［2・3］。美味蘑菇是采自天津市西青区的野生蕈经组织分离得到株。目前有关美味蘑菇栽培技术有零星报道，但至今未见其原生质体相关研究。笔者通过正交设计方法，对美味蘑菇原生质体制备、再生最佳条件进行筛选，建立原生质体制备与再生优化系统，以便进一步开展美味蘑菇原生质体紫外诱变育种、原生质体融合研究，为其原生质体技术探讨以及人工栽培生产提供参考。1材料和方法1.1美味蘑菇，由天津师范大学蕈菌研究所提供。1.2试剂蔗糖，葡萄糖，甘露醇,MgSO4-7H2O,KH2PO4,NaCI,VB1,酵母粉（生化试剂），牛
7、肉膏（生化试剂），琼脂（天津市珠江卫生材料厂），以上除注明外均为分析纯。1.3酶溶壁M（Lywallzyme）,购自广东省微生物研究所；蜗牛酶（Snailenzyme），购自北京普博欣生物科技有限公司。1.4培养基（W-V-1）PDA综合培养基：棉籽壳20%（浸提液），马铃薯20%（浸提液），葡萄糖2%,MgSO4-7H2O0.15%,KH2PO40.3%,VB10.0004%,琼脂1.4%,pH值自然。液体培养基：蔗糖3%,葡萄糖3%,酵母粉0.5%,牛肉膏0.1%,MgSO4-7H2O0
